جداول المختبر البكتريولوجي. المختبر البكتريولوجي: الأثاث والملابس والأواني الخاصة. المختبر البكتريولوجي، هيكله والغرض منه - علم الأحياء الدقيقة بتقنيات البحث الميكروبيولوجي

المختبر البكتريولوجي هو مؤسسة علمية وعملية تقوم بإجراء الدراسات المناعية وغيرها من الدراسات الميكروبيولوجية. توجد مختبرات بكتريولوجية طبية وبيطرية وصناعية.

يتم تنظيم المختبرات البكتريولوجية الطبية في المحطات الصحية والوبائية وما إلى ذلك لإجراء البحوث من أجل توضيح التشخيص والمكافحة الصحية والوبائية. يحتوي المختبر البكتريولوجي على: غرفة وسائط، غرفة غسيل، غرفة تحضير، غرفة تعقيم، الخ. يجب تكييف تصميم ومعدات المختبرات البكتريولوجية لإجراء البحوث في ظل ظروف معقمة، وحماية الموظفين من العدوى المحتملة. يجب أن تكون غرفة المختبر البكتريولوجي مشرقة وواسعة. من الضروري استبعاد إمكانية المسودات. يتم حجز مكان خاص لتحضيرات التلوين.

المعدات الإلزامية لمكان عمل عالم البكتيريا هي موقد، وجرة بمحلول حمض الكربوليك للماصات المستخدمة، ووعاء إغلاق، ورفوف لأنابيب الاختبار والحلقات البكتيرية، وقواطع المينا، والملاقط، والمقص، والمشرط، والشرائح، وغطاء النظارات. يجب أن يحتوي المختبر البكتريولوجي على صواني معدنية لأطباق بيتري أو دلاء مجلفنة أو صناديق للتخلص من الأواني الزجاجية المستعملة. بالإضافة إلى الأواني الزجاجية المختبرية العادية، يتم تزويد المختبرات البكتريولوجية بأنواع خاصة من الأواني الزجاجية: للنمو على الوسائط الصلبة، والمراتب البكتيرية، وما إلى ذلك. وهناك حاجة أيضًا إلى المصابيح المطاطية لامتصاص المواد الخطرة بشكل خاص في الماصات. يجب غسل البكتيريا البكتريولوجية بشكل نظيف وتعقيمها بالمعالجة الحرارية وإغلاقها بسدادات قطنية معقمة. لا ينبغي استخدام المواد الكيميائية في الأطباق، لأن الكميات الضئيلة قد تؤثر على تطور الميكروبات. أهم معدات المختبر البكتريولوجي هي أجهزة تلقيح الكائنات الحية الدقيقة (الحلقات البكتيرية، ماصات باستور، ملاعق زجاجية وبلاتينية). ولإجراء البذر في ظروف معقمة، تم تجهيز المختبرات البكتريولوجية بصناديق زجاجية خاصة مزودة بمصابيح الأشعة فوق البنفسجية (انظر).

يحتاج المختبر البكتريولوجي إلى: ثلاجة لتخزين الأمصال والركائز البيولوجية الأخرى؛ المجهر مع المنور. جهاز الطرد المركزي؛ أو غرفة ترموستاتية لنمو البكتيريا؛ جهاز لرج المخاليط المختلفة؛ ‎جهاز تعقيم بالهواء الجاف (فرن باستور) للتعقيم والأطباق والمعقمات الكهربائية. يجب أن تكون غرف المرافق للعمل مع حيوانات المختبر، وغسل الأطباق وتجفيفها، وتعبئة الوسائط المغذية، وما إلى ذلك، مجهزة بشكل مناسب.

عند العمل في المختبر البكتريولوجي، وخاصة مع الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض، يجب مراعاة القواعد التالية.
1. يجب على جميع الأشخاص الموجودين في المختبر البكتريولوجي ارتداء العباءات.

2. يمنع تناول الطعام والتدخين في المبنى.

3. يجب على كل موظف استخدام مكان عمله الخاص فقط.

4. يجب تنفيذ جميع العمليات وفقًا لقواعد العقم: تتم جميع عمليات البذر بالقرب من لهب الموقد، ويتم نقل السوائل الملوثة على صينية تحتوي على محلول مطهر، وما إلى ذلك.

5. يجب تعقيم أو تدمير كافة المعدات التي لامست مواد معدية.

6. يتم مراعاة جميع المحاصيل وكذلك الحيوانات المصابة وتسجيلها في مجلة باستخدام نموذج خاص.

المختبر البكتريولوجي هو مؤسسة علمية وعملية تقوم بإجراء البحوث الميكروبيولوجية. تقوم المختبرات البكتريولوجية التشخيصية السريرية في المستشفيات، اعتمادًا على ملف تعريف الأخير، بإجراء الدراسات اللازمة لإنشاء أو توضيح التشخيص. تقوم المختبرات البكتريولوجية في المحطات الصحية والوبائية بإجراء فحوصات وقائية للسكان والفحص الصحي والبكتريولوجي للمنتجات الغذائية. تعتبر المختبرات البكتريولوجية متخصصة للغاية وتؤدي وظائف المراقبة، على سبيل المثال، في الشركات التي تنتج المستحضرات البكتيرية. بالإضافة إلى المختبرات الطبية، هناك شبكة من المختبرات البكتريولوجية البيطرية التي تقوم بإجراء الاختبارات التشخيصية والوقائية للحيوانات، ومختبرات بكتريولوجية متخصصة تخدم احتياجات صناعة الأغذية والزراعة وغيرها. ويتم حل المهام البحثية المختلفة بواسطة المختبرات البكتريولوجية في المعاهد البحثية ذات الصلة.

معمل بكتريولوجي كبير يضم: المعمل نفسه، البيئة، غرفة الغسيل، غرفة التحضير، غرفة التعقيم والحظيرة. يجب أن تكون غرفة المختبر البكتريولوجي مشرقة وواسعة. يتم وضع زجاجة بها محلول لتطهير الأيدي فوق حوض المغسلة. طاولات العمل مغطاة بالمشمع أو الزجاج. موقد غاز أو كحول، وعاء للماصات المستعملة بمحلول حمض الكربوليك بنسبة 3٪، وعاء للصوف القطني، حلقة بكتيرية، مجموعة من المعايير البكتيرية، رفوف أنابيب الاختبار، الكوفيت، ملاقط، مقص، مشرط، شرائح و يتم وضع نظارات الغطاء على الطاولة. يجب أن يكون المختبر البكتريولوجي مجهزاً بخزانات للتخلص من الأواني الزجاجية الملوثة. عادةً ما يكون المختبر البكتريولوجي مجهزًا بطاولة خاصة لمستحضرات الصبغة.

أرز. 1. أطباق بيتري.

أرز. 2. فراش لنمو البكتيريا.

أرز. 3. ماصات باستور.

في المختبر البكتريولوجي، بالإضافة إلى الأواني الزجاجية الكيميائية العادية، هناك حاجة إلى أدوات زجاجية خاصة: أطباق بتري زجاجية (الشكل 1) لزراعة البكتيريا على الوسائط الصلبة؛ الحصائر البكتيرية (الشكل 2) للحصول على كميات كبيرة من الكتلة الميكروبية؛ أنابيب رو مع ربطة عنق لزراعة البكتيريا على أسراب البطاطس؛ أنابيب واسرمان بطول 90 ملم وقطر داخلي. 9 - 10 ملم لمراحل RSC ورد فعل التراص؛ أنابيب هطول الأمطار بطول 90 ملم وقطرها. 3-5 ملم؛ الأنابيب البكتيرية لنمو البكتيريا على الوسائط المغذية السائلة والصلبة؛ ماصات باستور (الشكل 3)؛ ماصات موهر لتطعيم المواد السائلة المصابة؛ ماصات أوتوماتيكية أو ماصات مزودة بمصابيح، مما يمنع امتصاص المواد عن طريق الفم. يجب تصفية الأواني الزجاجية المستخدمة في المختبرات البكتريولوجية في محلول حمض الهيدروكلوريك 1-2% وتعقيمها عند درجة حرارة عالية. يتم إجراء التلقيح على الوسائط المغذية الصلبة باستخدام ملاعق زجاجية (الشكل 4) وحلقة بكتيرية (الشكل 5). تنمو البكتيريا في منظمات الحرارة أو الغرف الحرارية.

أرز. 4. ملاعق زجاجية.

أرز. 5. الحلقة البكتيرية.

يجب أن يكون المختبر البكتريولوجي الذي يدرس البكتيريا اللاهوائية مجهزًا باللاهوائيات ومضخات التفريغ، والتي تستخدم أيضًا في الترشيح والترشيح الفائق. للحفاظ على العقم عند العمل مع الثقافات البكتيرية، تم تجهيز المختبرات البكتريولوجية بصناديق زجاجية خاصة. يتم تخزين جميع الوسائط الغذائية والثقافات البكتيرية والأمصال في الثلاجة.

يجب أن يحتوي كل مختبر بكتريولوجي على جهاز طرد مركزي وجهاز اهتزاز (الشكل 6) ومجهر. بالنسبة لمعظم الدراسات، يتم استخدام مجهر MBI-1 مع إضاءة OI-7 وجهاز تباين الطور.

أرز. 6. جهاز الاهتزاز (جهاز شوتيل).

يجب أن يكون المعمل البكتريولوجي مجهزاً بمعدات التعقيم: الأوتوكلاف، جهاز كوخ، فرن باستور، جهاز تخثر المصل. لتعقيم الركائز السائلة، يتم استخدام المرشحات البكتيرية (انظر). يجب أن تحتوي المختبرات البكتريولوجية على أجهزة لتوزيع الوسائط (الشكل 7)، ومجموعات من الكواشف لإجراء بعض التحاليل الكيميائية، بالإضافة إلى مقارنة ميكايليس أو مقياس الجهد لتحديد الرقم الهيدروجيني للوسط.

أرز. 7. جهاز تعبئة الوسائط.

يتم العمل مع الحيوانات في المختبر البكتريولوجي فقط في الحوض (انظر).

أثناء العمل في المختبر البكتريولوجي، يجب مراعاة القواعد التالية: 1) يجب على جميع الموجودين في المختبر ارتداء العباءات. 2) يجب أن يكون لكل موظف مكان عمل؛ 3) ممنوع الأكل والتدخين في المختبر البكتريولوجي. 4) عند العمل مع المواد المعدية، يجب عليك استخدام الأدوات؛ يجب تعقيم الأدوات التي كانت على اتصال مع المواد المعدية؛ 5) عند شفط المواد السائلة، يوصى باستخدام المصابيح؛ يجب أن تكون جميع الماصات موصولة بالصوف القطني؛ 6) يتم نقل السوائل المصابة على وعاء بمحلول مطهر؛ 7) يتم العمل بالمواد المصابة على الموقد، وحرق حواف أنبوب الاختبار، والحلقات، والملاعق، وما إلى ذلك؛ 8) يجب أن يتم وضع علامة على الأطباق التي تحتوي على مواد ملوثة باسم المزرعة ورقمها وتاريخها؛ 9) إذا وصلت المواد المعدية إلى الأشياء المحيطة، فإنهم يقومون بالتطهير - املأ المنطقة بمحلول مطهر وحرقها بمسحة من الكحول المحترق؛ 10) تسجيل المواد والأواني الملوثة ووضعها في الخزانات وتعقيمها في نفس اليوم؛ 11) يتم تخزين الثقافات في أعمدة أجار في أنابيب مختومة مع الملصقات؛ 12) يتم تسجيل جميع المحاصيل وكذلك الحيوانات المصابة في مجلة باستخدام نموذج خاص.

مقدمة

مثل الجزء العام من أي علم آخر، لا يتعامل علم الجراثيم العام مع قضايا محددة (على سبيل المثال، تحديد الأنواع الفردية من البكتيريا)، ولكن مع المشاكل بشكل عام؛ تغطي منهجيته الإجراءات الأساسية المستخدمة على نطاق واسع في مجموعة واسعة من الدراسات المختبرية. لا تهدف هذه الأداة التعليمية إلى تحديد أي مجموعة من الكائنات الحية الدقيقة. هذه هي مهمة المنشورات التالية - في علم الأحياء الدقيقة الخاص والصحي. ومع ذلك، فإن الطرق المعروضة هنا يمكن أن تكون مفيدة في أي مجال حيث تشارك البكتيريا ويمكن تطبيقها على المشاكل العملية التي تنطوي على عزل البكتيريا وكتابتها.

لم يصبح علم الجراثيم علمًا إلا بعد تطوير تقنيات فريدة من نوعها تستمر من خلالها في التأثير والتغلغل في المجالات العلمية اللاحقة مثل علم الفيروسات وعلم المناعة والبيولوجيا الجزيئية. إن تقنية استخدام الثقافات النقية التي طورها ر. كوخ والتفاعلات المناعية والتحليل الكيميائي التي استخدمها لأول مرة ل. باستور لم تفقد أهميتها.

تنعكس منهجية علم الجراثيم العام في هذا المنشور باستخدام بنية نموذجية للكتب المدرسية القياسية في هذا التخصص. ومع ذلك، على عكس ورش العمل المعملية الخاصة بدورة علم الأحياء الدقيقة للجامعات، يتم تقديمها بمزيد من التفصيل في بعض الأقسام وهي لأغراض مرجعية فقط. يأخذ هذا الهيكل في الاعتبار التدريب والتخصص المحدد لعلماء البكتيريا والخبراء البيطريين. وفي كثير من الأحيان يتم عرض المادة بشكل تعسفي، لذلك يتم ذكر بعض الأساليب عدة مرات، وذلك بسبب الرغبة في إثبات ترابطها.

مختبر بكتريولوجي

يتم تنظيم المختبرات البكتريولوجية كوحدات هيكلية كجزء من المختبرات البيطرية الإقليمية والمحلية والمشتركة بين المناطق، وكذلك في هيكل المختبرات البيطرية في المناطق. ويتم تنظيمها أيضًا في مراكز المراقبة الصحية والوبائية، وفي مستشفيات الأمراض المعدية، والمستشفيات العامة، وبعض المستشفيات المتخصصة (على سبيل المثال، في أمراض السل، وأمراض الروماتيزم، والأمراض الجلدية والتناسلية)، وفي العيادات الشاملة. المختبرات البكتريولوجية هي جزء من المؤسسات البحثية المتخصصة. تُستخدم المختبرات البكتريولوجية باستمرار لتأكيد أو إجراء تقييم لمدى ملاءمة اللحوم للأغراض الغذائية وفقًا لـ VSE.

أهداف البحث في المختبرات البكتريولوجية هي:

1. إفرازات من الجسم: البول والغائط والبلغم والصديد، وكذلك الدم والمواد المرضية والجثث.

2. كائنات البيئة الخارجية: الماء والهواء والتربة والغسل من المعدات والأعلاف والمواد الخام التكنولوجية التي يتم الحصول عليها من ذبح حيوانات المزرعة.

3. المنتجات الغذائية وعينات اللحوم ومنتجاتها والحليب ومنتجات الألبان التي يلزم تقييم صلاحيتها للأغراض الغذائية.

مباني المختبرات البكتريولوجية ومعدات أماكن العمل

تتطلب تفاصيل العمل الميكروبيولوجي عزل الغرفة المخصصة للمختبر عن غرف المعيشة ووحدات الغذاء وغيرها من أماكن الإنتاج غير الأساسية.

يشتمل المختبر البكتريولوجي على: غرف معملية للأبحاث البكتريولوجية وغرف المرافق؛ الأوتوكلاف أو التعقيم لتطهير النفايات والأواني الملوثة؛ غرفة غسيل مجهزة لغسل الأطباق. المطبخ البكتريولوجي – لإعداد وتعبئة وتعقيم وتخزين الوسائط المغذية؛ حظيرة لحفظ حيوانات التجارب؛ مواد لتخزين الكواشف الاحتياطية والأطباق والمعدات والمعدات المنزلية.

تعتبر غرف المرافق المدرجة، كوحدات هيكلية مستقلة، جزءًا من المختبرات البكتريولوجية الكبيرة. وفي المختبرات الصغيرة يتم دمج المطبخ البكتريولوجي ومطبخ التعقيم في غرفة واحدة؛ لا توجد غرفة خاصة لحفظ حيوانات التجارب.

تنقسم مباني المختبرات الميكروبيولوجية إلى منطقتين حسب درجة الخطر على الموظفين:

1. المنطقة "المعدية" - غرفة أو مجموعة من غرف المختبرات حيث يتم التعامل مع العوامل البيولوجية المسببة للأمراض وتخزينها؛ ويرتدي الموظفون النوع المناسب من الملابس الواقية.

ثانيا. المنطقة "النظيفة" - المباني التي لا يتم فيها تنفيذ أي عمل باستخدام المواد البيولوجية، ويرتدي الموظفون ملابس شخصية.

يتم تخصيص الغرف الأكثر سطوعًا واتساعًا لغرف المختبر التي يتم فيها إجراء جميع الدراسات البكتريولوجية. الجدران في هذه الغرف، التي يصل ارتفاعها إلى 170 سم من الأرضية، مطلية بألوان فاتحة بالطلاء الزيتي أو مغطاة بالبلاط. الأرضية مغطاة بالريلين أو المشمع. يتيح لك هذا النوع من التشطيب استخدام المحاليل المطهرة عند تنظيف الغرفة.

يجب أن تحتوي كل غرفة على حوض به مياه جارية ورف لزجاجة من المحلول المطهر.

إحدى الغرف مجهزة بصندوق زجاجي - غرفة معزولة بها دهليز (صندوق مسبق) لأداء العمل في ظروف معقمة. يتم وضع طاولة البذر والبراز في الصندوق، ويتم تركيب مصابيح مبيد للجراثيم فوق مكان العمل. يتم وضع خزانة لتخزين المواد المعقمة في غرفة الانتظار. يجب إغلاق نوافذ وأبواب الغرف الواقعة في المنطقة "المعدية". يجب عزل تهوية العادم الموجودة من المنطقة "المعدية" عن أنظمة التهوية الأخرى وتزويدها بمرشحات هواء دقيقة.

تم تجهيز غرفة المختبر بطاولات وخزائن وأرفف من النوع المختبري لتخزين المعدات والأدوات والدهانات والكواشف اللازمة للعمل.

يعد التنظيم الصحيح لمكان العمل لعالم البكتيريا ومساعد المختبر أمرًا مهمًا جدًا للعمل. يتم تثبيت طاولات المختبر بالقرب من النوافذ. عند وضعها، يجب أن تسعى جاهدة لضمان سقوط الضوء أمام الشخص الذي يعمل أو من جانبه، ويفضل أن يكون ذلك على الجانب الأيسر، ولكن ليس بأي حال من الأحوال من الخلف. من المستحسن أن تكون غرف التحليل، وخاصة الفحص المجهري، بها نوافذ موجهة نحو الشمال أو الشمال الغربي، لأن العمل يتطلب ضوءًا منتشرًا. يجب أن تكون الإضاءة السطحية لطاولات العمل 500 لوكس. لسهولة التطهير، يتم تغطية سطح طاولات المختبر بالبلاستيك أو منجد بالحديد. يتم تخصيص مكان عمل منفصل لكل موظف في المختبر بقياس 150 × 60 سم.

جميع أماكن العمل مجهزة بالعناصر اللازمة للعمل البكتريولوجي اليومي، وترد قائمة بها في الجدول 1.

الجدول 1.

العناصر اللازمة للعمل البكتريولوجي

اسم العنصر	كمية تقريبية
1. مجموعة الدهانات والكواشف للرسم
2. الشرائح الزجاجية	25-50
3. قم بتغطية النظارات	25-50
4. نظارات ذات ثقوب	5-10
5. رف أنبوب الاختبار
6. الحلقة البكتيرية
7. ملاعق زجاجية
8. ملاعق معدنية
9. جرة من الصوف القطني
10. الماصات متدرجة إلى 1، 2، 5، 10 مل	25 من كل مجلد
11. ماصات باستور	25-50
12. الملقط والمقص والمشرط	بواسطة 1
13. عبوات المحاليل المطهرة
14. مجهر مزود بإضاءة
15. عدسة مكبرة 5'
16. مزيتة بالزيت الغاطس
17. ورق الترشيح	3-5 أوراق
18. جرة بها محلول مطهر للماصات
19. موقد الكحول أو الغاز
20. تركيب مستحضرات التلوين
21. الساعة الرملية لمدة دقيقة أو دقيقتين	بواسطة 1
22. الكمثرى بأنبوب مطاطي
23. قلم رصاص على الزجاج
24. جرة من القطن والكحول
25. الأدوات المعقمة اللازمة	-

التطهير

التطهير هو تدمير الكائنات الحية الدقيقة في الكائنات البيئية.

في المختبرات الميكروبيولوجية، يتم استخدام تدابير التطهير على نطاق واسع جدا. عند الانتهاء من العمل مع المواد المعدية، يقوم موظفو المختبرات البكتريولوجية بإجراء التطهير الوقائي لأيديهم وأماكن عملهم.

يتم تطهير المواد المرضية المستهلكة (البراز، البول، البلغم، أنواع مختلفة من السوائل، الدم) قبل إلقائها في المجاري.

يتم إنزال ماصات باستور المتدرجة والملاعق الزجاجية والأدوات المعدنية الملوثة بالمواد المرضية أو ثقافة الميكروبات، مباشرة بعد استخدامها، في أوعية زجاجية بمحلول مطهر موجود على الطاولة في كل مكان عمل.

تخضع الشرائح ونظارات التغطية المستخدمة في العمل أيضًا للتطهير الإلزامي، نظرًا لأنه حتى اللطاخة الثابتة والملطخة تحتوي أحيانًا على كائنات حية دقيقة يمكن أن تكون مصدرًا للتلوث داخل المختبر. فقط تلك الأطباق التي نمت فيها الكائنات الحية الدقيقة لا يتم معالجتها بالمطهرات. يتم وضعها في خزانات أو صناديق معدنية، مختومة ومقدمة للتعقيم.

يتم تحديد اختيار المطهر، وتركيز محلوله، والنسبة بين كمية المطهر والمادة التي يتم تطهيرها، وكذلك مدة فترة التطهير وفقًا لشروط محددة، مع الأخذ في الاعتبار، أولاً وقبل كل شيء، الثبات للميكروبات المطهرة، ودرجة التلوث المتوقع، وتركيبة واتساق المادة التي توجد فيها.

تطهير اليدين بعد التعامل مع المواد المعدية وعند ملامستها للجلد.عند الانتهاء من العمل بالمواد المعدية، يتم تطهير الأيدي بشكل وقائي. يتم ترطيب كرة قطنية أو منديل شاش بمحلول كلورامين 1٪، أولاً اليد اليسرى، ثم تُمسح اليد اليمنى بالتسلسل التالي: الجزء الخلفي من اليد، السطح الراحي، المساحات بين الأصابع، أسِرَّة الظفر. وبالتالي، يتم معالجة المناطق الأقل تلوثًا أولاً، ثم الانتقال إلى المناطق الأكثر تلوثًا في الجلد. امسحي يديك لمدة دقيقتين بسدادتين قطنيتين على التوالي. عندما تتلوث الأيدي بمزرعة ميكروب ممرض أو مادة مرضية، يتم أولاً تطهير المناطق الملوثة من الجلد. ولهذا الغرض يتم تغطيتها لمدة 3-5 دقائق بقطن من الصوف المبلل بمحلول كلورامين 1%، ثم يتم إلقاء الصوف القطني في خزان أو دلو به مواد النفايات، وتتم معالجة اليدين بمسحة ثانية في نفس الوقت. الطريقة كما هو الحال أثناء التطهير الوقائي. بعد العلاج بالكلورامين، اغسل يديك بالماء الدافئ والصابون. عند العمل مع البكتيريا التي تشكل الجراثيم، تتم المعالجة اليدوية باستخدام الكلورامين المنشط بنسبة 1٪. في حالة ملامسة المواد المعدية للأيدي، يتم زيادة مدة التعرض للمطهر إلى 5 دقائق.

تعقيم

التعقيم، على عكس التطهير، ينطوي على تدمير جميع الكائنات الحية الدقيقة النباتية والحاملة للأبواغ والمسببة للأمراض وغير المسببة للأمراض الموجودة في الجسم الذي يتم تعقيمه. يتم التعقيم بطرق مختلفة: البخار، والهواء الساخن الجاف، والغليان، والترشيح، وما إلى ذلك. يتم تحديد اختيار طريقة أو أخرى من طرق التعقيم من خلال جودة وخصائص البكتيريا الدقيقة للكائن الذي يتم تعقيمه.

تحضير وتعقيم المعدات المخبرية

قبل التعقيم، يتم غسل وتجفيف الأواني الزجاجية للمختبر. يتم إغلاق أنابيب الاختبار والقوارير والزجاجات والمراتب والقوارير بسدادات من الشاش القطني. ضع أغطية الورق فوق السدادات على كل وعاء (ما عدا أنابيب الاختبار).

يتم تعقيم السدادات المطاطية والفلين والزجاجية في كيس منفصل مربوط برقبة الطبق. يتم تعقيم أطباق بيتري ملفوفة بالورق، 1-10 قطع لكل منها. ماصات باستور 3-15 قطعة. ملفوفة في ورق التغليف. يتم وضع قطعة من الصوف القطني في الجزء العلوي من كل ماصة لمنع المادة من دخول البيئة. عند تغليف الماصات، يجب توخي الحذر الشديد حتى لا تنكسر الأطراف المغلقة للشعيرات الدموية. أثناء التشغيل، تتم إزالة الماصات من الكيس من الطرف العلوي.

يتم إدخال القطن الآمن في الجزء العلوي من الماصات المتدرجة، كما في ماصات باستور، ثم يلف بورق سميك، مقطع مسبقاً إلى شرائح بعرض 2-2.5 سم وطول 50-70 سم، يوضع الشريط على الطاولة، يتم طي الطرف الأيسر ولف طرف الماصة، ثم تدوير الماصة ولف شريط من الورق عليها. لمنع الورقة من أن تتكشف، يتم لف الطرف الآخر أو لصقه. حجم الماصة الملفوفة مكتوب على الورقة. إذا كانت هناك حالات قلم رصاص، فسيتم تعقيم الماصات المتدرجة فيها.

يتم تعقيم الأواني الزجاجية للمختبر:

أ) الحرارة الجافة عند درجة حرارة 180 درجة مئوية و160 درجة مئوية، على التوالي، لمدة ساعة و150 دقيقة.

ب) في الأوتوكلاف عند ضغط 1.5 ضغط جوي. لمدة 60 دقيقة لتدمير البكتيريا البوغية - 90 دقيقة عند 2 أجهزة الصراف الآلي.

تعقيم المحاقن. يتم تعقيم المحاقن بشكل مفكك: بشكل منفصل الأسطوانة والمكبس في محلول 2٪ من بيكربونات الصوديوم لمدة 30 دقيقة. عند العمل مع البكتيريا الحاملة للأبواغ، يتم إجراء التعقيم في الأوتوكلاف عند 132 ± 2 درجة مئوية (2 ضغط جوي) لمدة 20 دقيقة، عند 126 ± 2 درجة مئوية (1.5 ضغط جوي) - 30 دقيقة. يتم تجميع المحقنة المعقمة بعد أن تبرد، ويتم إدخال المكبس في الاسطوانة، ويتم وضع الإبرة، بعد إزالة الشياق منها أولاً. يتم أخذ الإبرة والأسطوانة والمكبس باستخدام ملاقط يتم تعقيمها مع المحقنة.

تعقيم الأدوات المعدنية. يتم تعقيم الأدوات المعدنية (المقص والمشارط والملاقط وغيرها) في محلول بيكربونات الصوديوم 2%، مما يمنع الصدأ وفقدان الحدة. يوصى بلف شفرات المباضع والمقصات بالقطن قبل غمرها في المحلول.

تعقيم الحلقات البكتيرية. يتم تعقيم الحلقات البكتيرية المصنوعة من سلك البلاتين أو النيتشروم في لهب موقد الكحول أو الغاز. تسمى طريقة التعقيم هذه بالتكليس أو الحرق.

يتم وضع الحلقة في وضع أفقي في الجزء السفلي والأبرد من لهب الموقد لمنع تناثر المواد المسببة للأمراض المحروقة. بعد أن تحترق، يتم نقل الحلقة إلى الوضع الرأسي، أولا إلى الأسفل، ثم يتم تسخين الجزء العلوي من السلك إلى اللون الأحمر الساخن ويتم حرق حامل الحلقة. يستغرق التكليس عمومًا من 5 إلى 7 ثوانٍ.

التحضير لتعقيم وتعقيم الورق والشاش والصوف القطني. يتم تعقيم الصوف القطني والشاش وورق الترشيح في فرن جاف عند درجة حرارة 160 درجة مئوية خلال ساعة من اللحظة التي يقرأ فيها مقياس الحرارة درجة الحرارة هذه أو في الأوتوكلاف عند ضغط 1 ATM. في غضون 30 دقيقة.

قبل التعقيم، يتم تقطيع الورق والشاش إلى قطع، ويتم لف الصوف القطني إلى كرات أو سدادات قطنية بالحجم المطلوب. بعد ذلك، يتم لف كل نوع من المواد على حدة، قطعة واحدة أو عدة قطع، بورق سميك. إذا انكسرت العبوة، فيجب تعقيم المادة المعقمة مرة أخرى، لأن عقمها ضعيف.

تعقيم القفازات والمنتجات المطاطية الأخرى. يتم تعقيم المنتجات المطاطية (القفازات والأنابيب وغيرها) الملوثة بالشكل الخضري للميكروبات عن طريق الغليان في محلول بيكربونات الصوديوم بنسبة 2% أو تشغيل البخار لمدة 30 دقيقة؛ عندما تكون ملوثة بالنباتات الدقيقة الحاملة للأبواغ، في الأوتوكلاف عند ضغط 1.5-2 أجهزة الصراف الآلي. لمدة 30 أو 20 دقيقة. قبل التعقيم، يتم رش القفازات المطاطية بالتلك من الداخل والخارج لمنعها من الالتصاق. يتم وضع الشاش بين القفازات. يتم لف كل زوج من القفازات بشكل منفصل بالشاش ويتم وضعه في صناديق بهذا الشكل.

تعقيم الثقافات الميكروبية المسببة للأمراض. يتم وضع أنابيب الاختبار والأكواب التي تحتوي على ثقافات ميكروبية غير ضرورية لمزيد من العمل في خزان معدني، ويتم إغلاق الغطاء وتقديمه للتعقيم. يتم قتل مزارع الميكروبات المسببة للأمراض، ذات الأشكال النباتية، في الأوتوكلاف لمدة 30 دقيقة عند ضغط 1 ATM. يتم تسليم خزانات التعقيم إلى الأوتوكلاف بواسطة شخص معين مقابل التوقيع. يتم تسجيل نظام التعقيم في مجلة خاصة. عند تدمير مزارع الميكروبات من المجموعتين المرضيتين الأولى والثانية، وكذلك المواد الملوثة أو المشتبه في تلوثها بمسببات الأمراض المخصصة لهذه المجموعات، يتم نقل الخزانات التي تحتوي على مواد النفايات على صواني معدنية ذات جوانب عالية بحضور شخص مرافق مرخص له العمل مع المواد المعدية.

أنواع التعقيم

التعقيم بالغليان. ويتم التعقيم بالغليان في جهاز التعقيم. يُسكب الماء المقطر في جهاز التعقيم، لأن ماء الصنبور يشكل ترسبات. (يتم غمر الأجسام الزجاجية في الماء البارد، والأشياء المعدنية في الماء الساخن مع إضافة بيكربونات الصوديوم). يتم غلي العناصر المراد تعقيمها على نار خفيفة لمدة 30-60 دقيقة. تعتبر بداية التعقيم هي لحظة غليان الماء في جهاز التعقيم. في نهاية الغليان، يتم أخذ الأدوات بملاقط معقمة، والتي يتم غليها مع أشياء أخرى.

التعقيم بالحرارة الجافة. ويتم التعقيم بالحرارة الجافة في فرن باستور. توضع المادة المعدة للتعقيم على الرفوف بحيث لا تتلامس مع الجدران. يتم إغلاق الخزانة ثم يتم تشغيل التدفئة. مدة التعقيم عند درجة حرارة 150 درجة مئوية هي ساعتان، عند 165 درجة مئوية - ساعة واحدة، عند 180 درجة مئوية - 40 دقيقة، عند 200 درجة مئوية - 10-15 دقيقة (عند 170 درجة مئوية لف الورق والصوف القطني أصفر، وفي درجات حرارة أعلى متفحمة). تعتبر بداية التعقيم هي اللحظة التي تصل فيها درجة الحرارة في الفرن إلى الارتفاع المطلوب. في نهاية فترة التعقيم، يتم إيقاف تشغيل الفرن، ولكن لا يتم فتح أبواب الخزانة حتى تبرد تمامًا، نظرًا لأن الهواء البارد الذي يدخل إلى الخزانة يمكن أن يسبب تشققات في الأطباق الساخنة.

التعقيم بالبخار تحت الضغط. يتم إجراء التعقيم بالبخار تحت الضغط في الأوتوكلاف. يتكون الأوتوكلاف من غلايتين يتم إدخال أحدهما في الآخر، وغلاف وغطاء. تسمى الغلاية الخارجية بغرفة بخار الماء، وتسمى الغلاية الداخلية بغرفة التعقيم. يتم توليد البخار في غلاية بخار الماء. توضع المادة المراد تعقيمها في المرجل الداخلي. توجد ثقوب صغيرة في الجزء العلوي من غلاية التعقيم يمر من خلالها البخار من غرفة بخار الماء. يتم تثبيت غطاء الأوتوكلاف بإحكام على الغلاف. بالإضافة إلى الأجزاء الرئيسية المذكورة، يحتوي الأوتوكلاف على عدد من الأجزاء التي تنظم تشغيله: مقياس الضغط، زجاج عداد المياه، صمام الأمان، المخرج، صمامات الهواء والتكثيف. يتم استخدام مقياس الضغط لتحديد الضغط الناتج في غرفة التعقيم. يعتبر الضغط الجوي الطبيعي (760 ملم زئبقي) صفرًا، وبالتالي، في الأوتوكلاف الخامل، تكون إبرة قياس الضغط عند الصفر. هناك علاقة معينة بين قراءات مقياس الضغط ودرجة الحرارة (الجدول 2).

الجدول 2.

العلاقة بين قراءات مقياس الضغط ودرجة حرارة غليان الماء

يحدد الخط الأحمر الموجود على مقياس الضغط الحد الأقصى لضغط التشغيل المسموح به في الأوتوكلاف. يعمل صمام الأمان على الحماية من تراكم الضغط الزائد. يتم ضبطه على ضغط معين، أي الضغط الذي يجب إجراء التعقيم عنده؛ عندما تعبر إبرة مقياس الضغط الخط، يفتح صمام الأوتوكلاف تلقائيًا ويطلق البخار الزائد، وبالتالي يبطئ الارتفاع الإضافي في الضغط.

يوجد على الجدار الجانبي للأوتوكلاف زجاج لقياس الماء يوضح مستوى الماء في غلاية بخار الماء. يوجد خطان أفقيان على الأنبوب الزجاجي لعداد المياه - السفلي والعلوي، يشيران إلى مستويات المياه السفلية والعلوية المسموح بها في غرفة بخار الماء، على التوالي. تم تصميم صمام الهواء لإزالة الهواء من غرف التعقيم وبخار الماء في بداية التعقيم، نظرًا لأن الهواء، كونه موصلًا سيئًا للحرارة، يعطل نظام التعقيم. يوجد في الجزء السفلي من الأوتوكلاف صنبور تكثيف لتحرير غرفة التعقيم من المكثفات المتكونة أثناء فترة تسخين المادة المعقمة.

قواعد العمل مع الأوتوكلاف. قبل البدء في العمل، فحص الأوتوكلاف ومعدات التحكم. في الأوتوكلاف مع التحكم التلقائي بالبخار، يتم ضبط الأسهم الموجودة على مقياس ضغط الفراغ الكهربائي لغرفة بخار الماء وفقًا لوضع التعقيم: يتم ضبط السهم السفلي على 0.1 ATM. السفلي والعلوي - بمقدار 0.1 أجهزة الصراف الآلي. فوق ضغط التشغيل، تمتلئ غرفة بخار الماء بالماء حتى العلامة العليا لزجاج القياس. خلال فترة الملء بالماء، يظل الصمام الموجود على الأنبوب الذي يدخل من خلاله البخار إلى الغرفة مفتوحًا للسماح بخروج الهواء بحرية من المرجل. يتم تحميل غرفة التعقيم في الأوتوكلاف بالمواد المراد تعقيمها. بعد ذلك، يتم إغلاق غطاء (أو باب) الأوتوكلاف، ويتم تثبيته بإحكام بقفل مركزي أو براغي؛ لتجنب التشويه، قم بربط البراغي بالعرض (على طول القطر). ثم قم بتشغيل مصدر التسخين (التيار الكهربائي، البخار)، وإغلاق الصمام الموجود على الأنبوب الذي يصل مصدر البخار بغرفة التعقيم. مع بداية تكوين البخار وخلق الضغط في غرفة بخار الماء، يتم إجراء التطهير (إزالة الهواء من غلاية التعقيم). يتم تحديد طريقة إزالة الهواء من خلال تصميم الأوتوكلاف. في البداية، يخرج الهواء بأجزاء منفصلة، ​​ثم يظهر تيار سلس ومستمر من البخار، مما يشير إلى إزاحة الهواء بالكامل من غرفة التعقيم. بعد إزالة الهواء، يتم إغلاق الصنبور، وتبدأ الزيادة التدريجية في الضغط في غرفة التعقيم.

تعتبر بداية التعقيم هي اللحظة التي تظهر فيها إبرة مقياس الضغط الضغط المحدد. بعد ذلك، يتم تقليل شدة التسخين بحيث يظل الضغط في الأوتوكلاف عند نفس المستوى للوقت المطلوب. في نهاية فترة التعقيم، يتم إيقاف التدفئة. أغلق الصمام الموجود في خط الأنابيب الذي يزود غرفة التعقيم بالبخار، وافتح الصمام الموجود على أنبوب التكثيف (أسفل) لتقليل ضغط البخار في الغرفة. بعد أن تنخفض إبرة قياس الضغط إلى الصفر، قم بفك أجهزة التثبيت ببطء وافتح غطاء الأوتوكلاف.

يتم تحديد درجة الحرارة ومدة التعقيم من خلال نوعية المادة التي يتم تعقيمها وخصائص الكائنات الحية الدقيقة المصابة بها.

يتم التحكم في درجة الحرارة في غرفة التعقيم بشكل دوري باستخدام الاختبارات البكتريولوجية. يتم إنتاج الاختبارات الحيوية بواسطة المختبرات البكتريولوجية التابعة لمركز العلوم الحساسة. إذا لم يتم اجتياز هذه الاختبارات، يتم فحص الحالة الفنية للأوتوكلاف.

التعقيم بالبخار المتدفق. يتم إجراء التعقيم بالبخار المتدفق في جهاز البخار المتدفق من Koch أو في الأوتوكلاف مع فك الغطاء وصمام المخرج مفتوحًا. جهاز كوخ عبارة عن أسطوانة معدنية مجوفة ذات قاع مزدوج. يتم ملء المساحة بين الصفيحتين العلوية والسفلية بنسبة 2/3 بالماء (يوجد صنبور لتصريف الماء المتبقي بعد التعقيم). يحتوي غطاء الجهاز على فتحة في المنتصف لمقياس الحرارة وعدة فتحات صغيرة لخروج البخار. يتم تحميل المادة المراد تعقيمها بشكل غير محكم في حجرة الجهاز لضمان أقصى قدر من الاتصال بالبخار. تعتبر بداية التعقيم هي الوقت من لحظة غليان الماء ودخول البخار إلى غرفة التعقيم. في جهاز البخار السائل، يتم تعقيم الوسائط المغذية بشكل أساسي، والتي تتغير خصائصها عند درجات حرارة أعلى من 100 درجة مئوية. وينبغي تكرار عملية التعقيم بالبخار المتدفق، لأن التسخين مرة واحدة عند درجة حرارة 100 درجة مئوية لا يضمن التطهير الكامل. وتسمى هذه الطريقة بالتعقيم التجزيئي: حيث تتم معالجة المادة المعقمة بالبخار المتدفق لمدة 30 دقيقة يومياً لمدة 3 أيام. في الفترات الفاصلة بين عمليات التعقيم، يتم الاحتفاظ بالمادة في درجة حرارة الغرفة حتى تنبت الجراثيم إلى أشكال نباتية، والتي تموت أثناء التسخين اللاحق.

Tyndalization. Tyndalization هو تعقيم جزئي باستخدام درجات حرارة أقل من 100 درجة مئوية، اقترحه Tyndall. يتم تسخين المادة المراد تعقيمها في حمام مائي مزود بمنظم حرارة لمدة ساعة عند درجة حرارة 60-65 درجة مئوية لمدة 5 أيام أو عند 70-80 درجة مئوية لمدة 3 أيام. في الفترات الفاصلة بين التسخين، يتم الاحتفاظ بالمادة المعالجة عند درجة حرارة 25 درجة مئوية حتى تنبت الجراثيم إلى أشكال نباتية، والتي تموت أثناء التسخين اللاحق. يستخدم التندال لتخصيب الوسائط المغذية التي تحتوي على البروتين.

التعقيم الميكانيكي باستخدام المرشحات البكتيرية. تُستخدم المرشحات البكتيرية لتحرير السائل من البكتيريا الموجودة فيه، وكذلك لفصل البكتيريا عن الفيروسات والعاثيات والسموم الخارجية. لا يتم الاحتفاظ بالفيروسات بواسطة المرشحات البكتيرية، وبالتالي لا يمكن اعتبار الترشيح الفائق بمثابة تعقيم بالمعنى المقبول للكلمة. لتصنيع المرشحات الفائقة، يتم استخدام مواد مسامية دقيقة (الكاولين، الأسبستوس، النيتروسليلوز، وما إلى ذلك) التي يمكن أن تحبس البكتيريا.

مرشحات الأسبستوس (مرشحات سيتز) عبارة عن ألواح من الأسبستوس بسمك 3-5 مم وقطر 35 و140 مم لتصفية الكميات الصغيرة والكبيرة من السوائل. في بلدنا، يتم تصنيع مرشحات الأسبستوس في علامتين تجاريتين: "F" (الترشيح)، الذي يحتفظ بالجزيئات العالقة ولكنه يسمح للبكتيريا بالمرور، و"SF" (التعقيم)، وهو أكثر كثافة، ويحتفظ بالبكتيريا. قبل الاستخدام، يتم تركيب مرشحات الأسبستوس في أجهزة التصفية ويتم تعقيمها معًا في الأوتوكلاف. يتم استخدام مرشحات الأسبستوس مرة واحدة. المرشحات الغشائية الفائقة مصنوعة من النيتروسليلوز وهي عبارة عن أقراص بيضاء يبلغ قطرها 35 ملم وسمكها 0.1 ملم.

تختلف المرشحات البكتيرية في حجم المسام ويتم تحديدها بأرقام تسلسلية (الجدول 3).

الجدول 3.

المرشحات البكتيرية

قبل الاستخدام مباشرة، يتم تعقيم المرشحات الغشائية بالغليان. توضع المرشحات في الماء المقطر، وتسخن إلى درجة حرارة 50-60 درجة مئوية، لمنعها من الالتواء، وتغلى على نار خفيفة لمدة 30 دقيقة، مع تغيير الماء 2-3 مرات. لتجنب التلف، تتم إزالة المرشحات المعقمة من جهاز التعقيم باستخدام ملاقط ملتهبة ومبردة ذات أطراف ناعمة.

لتصفية السوائل، يتم تركيب المرشحات البكتيرية في أجهزة ترشيح خاصة، على وجه الخصوص، مرشح Seitz.

يتكون من جزأين: جزء علوي على شكل أسطوانة أو قمع، وجزء سفلي داعم للجهاز، مع ما يسمى بطاولة الترشيح المصنوعة من شبكة معدنية أو لوحة سيراميك نظيفة، يوضع عليها غشاء أو الأسبستوس يتم وضع الفلتر . الجزء الداعم من الجهاز له شكل قمع، الجزء المستدق منه يقع في السدادة المطاطية لعنق قارورة بنسن. في حالة العمل، يتم تثبيت الجزء العلوي من الجهاز على الجزء السفلي بمسامير. قبل بدء الترشيح، يتم ملء تقاطعات أجزاء مختلفة من التثبيت بالبارافين لإنشاء الختم. يتم توصيل أنبوب مخرج القارورة بأنبوب مطاطي سميك الجدران بمضخة ماء أو زيت أو دراجة. بعد ذلك، يتم سكب السائل المفلتر في أسطوانة أو قمع الجهاز ويتم تشغيل المضخة، مما يخلق فراغًا في وعاء الاستقبال. ونتيجة لفرق الضغط الناتج، يمر السائل المرشح عبر مسام المرشح إلى جهاز الاستقبال. تبقى الكائنات الحية الدقيقة على سطح المرشح.

تحضير المسحات

لدراسة الكائنات الحية الدقيقة في شكل ملون، يتم عمل مسحة على شريحة زجاجية، وتجفيفها، وتثبيتها، ثم صبغها.

يتم توزيع مادة الاختبار في طبقة رقيقة فوق سطح شريحة زجاجية منزوعة الشحوم جيدًا.

يتم تحضير المسحات من الثقافات الميكروبية والمواد المرضية (البلغم، القيح، البول، الدم، وما إلى ذلك) ومن أعضاء الجثث.

يتم تحديد تقنية تحضير المسحات حسب طبيعة المادة التي يتم فحصها.

تحضير المسحات من المزارع الميكروبية باستخدام وسط غذائي سائل ومن مادة مرضية سائلة (البول، السائل النخاعي، إلخ). يتم تطبيق قطرة صغيرة من سائل الاختبار بحلقة بكتيرية على شريحة زجاجية، وباستخدام حركات دائرية، يتم توزيع الحلقات في طبقة متساوية على شكل دائرة بقطر عملة معدنية.

تحضير مسحات الدم. يتم وضع قطرة من الدم على الشريحة الزجاجية بالقرب من أحد طرفيها. أما الزجاج الثاني - الأرضي - والذي يجب أن يكون أضيق من زجاج الجسم، فيوضع على الأول بزاوية 45 درجة ويوضع على نقطة الدم حتى يلامسها. بعد انتشار الدم على طول الحافة المصقولة، يتم إجراء حركة انزلاقية بالزجاج من اليمين إلى اليسار، وتوزيع الدم بالتساوي في طبقة رقيقة على كامل سطح الزجاج. يعتمد سمك السكتة الدماغية على الزاوية بين النظارات: كلما كانت الزاوية أكثر حدة، كانت السكتة الدماغية أرق. اللطاخة المعدة بشكل صحيح لها لون وردي فاتح وبنفس السماكة في جميع أنحاءها.

تحضير قطرة سميكة. يتم وضع قطرة من الدم على منتصف الشريحة باستخدام ماصة باستور، أو يتم تطبيق الزجاج مباشرة على قطرة الدم البارزة. يتم تلطيخ الدم المطبق على الزجاج بحلقة بكتيرية بحيث يتوافق قطر اللطاخة الناتجة مع حجم العملة المعدنية. يُترك الكوب في وضع أفقي حتى يجف الدم. يتم توزيع الدم في "القطرة السميكة" بشكل غير متساو، مما يشكل حافة غير مستوية.

تحضير مسحة من مادة لزجة (البلغم، القيح). يتم تغطية البلغم أو القيح المطبق على الشريحة الأقرب إلى الحافة الضيقة بشريحة أخرى. يتم ضغط النظارات قليلاً على بعضها البعض.

بعد ذلك، يتم إمساك الأطراف الحرة للزجاج بأصابع 1 و 2 من كلتا اليدين وتحريكها في اتجاهين متعاكسين بحيث تتناسب كلا النظارتين بإحكام مع بعضهما البعض عند التحرك. والنتيجة هي مسحات بمواد موزعة بالتساوي تشغل مساحة كبيرة.

تحضير مسحات من الثقافات من الوسائط المغذية الصلبة. يتم وضع قطرة ماء في منتصف شريحة زجاجية نظيفة ومدهونة جيداً، ويتم إدخال حلقة بكتيرية تحتوي على كمية صغيرة من المزرعة الميكروبية محل الدراسة، بحيث تصبح قطرة السائل غائمة قليلاً. بعد ذلك، يتم حرق المادة الميكروبية الزائدة الموجودة في الحلقة في اللهب ويتم تحضير اللطاخة وفقًا للطريقة الموضحة أعلاه.

تحضير المسحات من الأعضاء والأنسجة. ولغرض التطهير، يتم كي سطح العضو بفك ملقط ساخن، ويتم عمل شق في هذا المكان ويتم قطع قطعة صغيرة من الأنسجة من الأعماق بمقص مدبب، توضع بين شريحتين زجاجيتين. . اتبع بعد ذلك بنفس الطريقة المتبعة عند تحضير مسحة من القيح والبلغم. إذا كانت أنسجة العضو كثيفة، يتم إجراء كشط من عمق الشق بالمشرط. يتم توزيع المادة التي تم الحصول عليها عن طريق الكشط في طبقة رقيقة على سطح الزجاج باستخدام مشرط أو حلقة بكتيرية.

ولدراسة الموقع النسبي لعناصر الأنسجة والكائنات الحية الدقيقة الموجودة فيها، يتم إجراء مسحات بصمات الأصابع. للقيام بذلك، يتم التقاط قطعة صغيرة من الأنسجة المقطوعة من منتصف العضو باستخدام ملاقط وتطبيقها عدة مرات على التوالي مع السطح المقطوع على شريحة زجاجية، وبالتالي الحصول على سلسلة من بصمات المسحات.

تجفيف وتثبيت المسحات. يتم تجفيف اللطاخة المحضرة على شريحة زجاجية في الهواء وتثبيتها بعد التجفيف الكامل. عند التثبيت، يتم تثبيت اللطاخة على سطح الشريحة الزجاجية، وبالتالي، أثناء تلطيخ المستحضر اللاحق، لا يتم غسل الخلايا الميكروبية. بالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا الميكروبية المقتولة تصبغ بشكل أفضل من الخلايا الحية.

هناك طريقة فيزيائية للتثبيت، والتي تعتمد على تأثير ارتفاع درجة الحرارة على الخلية الميكروبية، والطرق الكيميائية، والتي تنطوي على استخدام العوامل التي تسبب تخثر البروتينات. لا تسجل المسحات التي تحتوي على مسببات الأمراض من المجموعات المسببة للأمراض من الأول إلى الثاني على اللهب.

الطريقة الفيزيائية للتثبيت. يتم أخذ شريحة التحضير باستخدام ملاقط أو أصابع I و II من اليد اليمنى بواسطة الأضلاع بضربة لأعلى وتحريكها بسلاسة 2-3 مرات فوق الجزء العلوي من لهب الموقد. يجب ألا تستغرق عملية التثبيت بأكملها أكثر من ثانيتين. يتم التحقق من موثوقية التثبيت من خلال التقنية البسيطة التالية: يتم تطبيق السطح الخالي من اللطاخة لشريحة زجاجية على السطح الخلفي لليد اليسرى. عندما يتم إصلاح اللطاخة بشكل صحيح، يجب أن يكون الزجاج ساخنا، ولكن لا يسبب حرقان.

طريقة التثبيت الكيميائي. ولتثبيت المسحات تستخدم أيضاً المواد الكيميائية والمركبات المذكورة في الجدول رقم 4.

الجدول 4.

مواد التثبيت الكيميائي

يتم غمر الشريحة ذات اللطاخة المجففة في زجاجة تحتوي على عامل تثبيت ثم يتم تجفيفها في الهواء.

ضربات التلوين

تقنية الرسم بالمسحة. لتلوين المسحات، يتم استخدام محاليل الطلاء أو ورق التلوين، كما اقترح A.I. سينيف. كانت بساطة الإعداد وسهولة الاستخدام بالإضافة إلى القدرة على تخزين ورق الحبر لفترة طويلة إلى أجل غير مسمى الأساس لاستخدامها على نطاق واسع في طرق التلوين المختلفة.

ضربات التلوين باستخدام ورق الحبر. توضع بضع قطرات من الماء على المستحضر المجفف والثابت، وتوضع قطع ملونة من الورق بقياس 2×2 سم، ويجب أن يظل الورق رطباً ومتماسكاً بإحكام على سطح الزجاج طوال فترة الصبغ. عند التجفيف، يتم ترطيب الورق بالإضافة إلى ذلك بالماء. يتم تحديد مدة تلطيخ اللطاخة بواسطة طريقة التلوين. في نهاية الصباغة، تتم إزالة الورق بعناية باستخدام الملقط، ويتم غسل اللطاخة بماء الصنبور وتجفيفها في الهواء أو باستخدام ورق الترشيح.

تلطيخ المسحات بمحلول الصبغة. يتم تطبيق الصبغة على المستحضر المجفف والثابت باستخدام ماصة بكمية تغطي اللطاخة بأكملها. عند تلطيخ المسحات باستخدام محاليل الأصباغ المركزة (Ziehl carbol fuchsin أو الجنطيانا الكاربوليك أو البنفسج البلوري)، يتم إجراء التلوين من خلال ورق الترشيح الذي يحتفظ بجزيئات الصبغة: يتم وضع شريط من ورق الترشيح على مسحة ثابتة ويسكب محلول الصبغة عليها. .

للفحص المجهري، يتم صبغ المسحات المحضرة، المجففة والثابتة. يمكن أن يكون التلوين بسيطًا أو معقدًا. تتضمن اللوحة البسيطة وضع طلاء واحد على اللطاخة لفترة زمنية معينة. في أغلب الأحيان، من أجل تلطيخ بسيط، يتم استخدام الكحول والماء (1:10) فايفر فوشسين، وميثيلين ليفلر الأزرق والسافرانين. يستخدم الأيوسين، مثل الطلاء الحمضي، فقط لتلوين السيتوبلازم في الخلايا وتلوين الخلفية. حمض الفوشين غير مناسب تمامًا لتلوين البكتيريا.

يتطلب العمل مع مسببات الأمراض المعدية أن تكون مباني المختبر موجودة في مبنى منفصل أو معزولة عن أجنحة المستشفى ووحدات الطعام. يجب أن يكون للمختبرات التشخيصية مدخلين: أحدهما للموظفين والآخر لتسليم المواد للاختبار. يُسمح بتلقي المواد من خلال نافذة النقل. يتم تقسيم مباني المختبر إلى مناطق "ملوثة" و"نظيفة" وتقع أثناء إجراء الاختبارات.

تشمل المنطقة "النظيفة" للمختبر ما يلي:

1. غرفة للملابس الخارجية.
2. غرفة العمل التحضيري (غرفة التحضير، غرفة الغسيل لتحضير وتعبئة الوسائط الغذائية، الخ)
3. تعقيم.
4. غرفة بها ثلاجة لتخزين الوسائط الثقافية والمستحضرات التشخيصية.
5. غرفة للراحة وتناول الطعام.
6. غرفة للعمل مع الوثائق.
7. غرف المرافق.
8. الحمام.

يتم وضع ما يلي في المنطقة "المعدية":

1.غرفة لتلقي وتسجيل المواد المقدمة للبحث.

3. غرف إجراء الأبحاث البكتريولوجية.

4. غرف إجراء الدراسات المصلية.

5. غرفة للفحص المجهري التلألؤ.

6. غرفة للعمل في مجال علم الحيوان.

7. غرفة الترموستات والأوتوكلاف.

تم تجهيز المباني التي يتم فيها العمل مع الكائنات الحية بمصابيح مبيد للجراثيم.

مهمة مختبر الميكروبيولوجي الطبي - تشخيص الأمراض المعدية. للقيام بذلك، يتم عزل العامل الممرض وتحديد الاستجابة المناعية للجسم لإدخال الكائنات الحية الدقيقة (التشخيص المصلي). بالإضافة إلى ذلك، يتم تحديد ناقلات الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض (المسببة للأمراض). هناك مختبرات تقوم بإجراء الدراسات الفيروسية. في المختبرات الصحية والبكتريولوجية الخاصة، يتم إجراء البحوث لتحديد درجة التلوث الميكروبي للبيئة الخارجية والأشياء المختلفة.

غرفة المختبرمصممة للبحوث الميكروبيولوجية. يجب أن تكون فسيحة ومشرقة. الجدران مطلية بطلاء زيتي خفيف، والأرضية مغطاة بمشمع، وطاولات المختبر مغطاة بالبلاستيك أو الزجاج، وهو مناسب للتنظيف الرطب والتطهير. غرفة المختبر مجهزة بطاولات عمل للطبيب ومساعد المختبر، ومكان لمستحضرات الصبغ، وثرموستات، وثلاجة، وجهاز طرد مركزي، ومجهر، وخزائن، ومغسلة مزودة بإمدادات المياه الساخنة والباردة، وموقد غاز (إذا كان هناك لا يوجد غاز، فهي تعمل مع مواقد الكحول).

يتم تحديد عدد غرف المختبر حسب حجم العمل المختبري. تحتوي المختبرات الكبيرة على غرف منفصلة للعمل مع أنواع مختلفة من مسببات الأمراض.

يتم وضع سطح المكتب بالقرب من النافذة بحيث يسقط الضوء من الجانب أو مباشرة. يتم وضع الموقد والحلقات البكتريولوجية والجرار بمحلول مطهر والصوف القطني على الطاولة.

قبل البدء في العمل، يتم وضع كل ما هو ضروري للدراسة على الطاولة. يتم تثبيت الموقد على مسافة تساوي ساعد العامل، أي في وضع يلغي الحركات غير الضرورية أثناء العمل. يتم ضبط حجم اللهب الموجود في الموقد والتوهج الصحيح قبل بدء العمل.

يجب أن تكون درجة الحرارة في منظم الحرارة أثناء البحث الروتيني 37 درجة مئوية. في المختبرات الكبيرة يمكن تجهيز غرفة حرارية خاصة. يتم تسجيل درجات الحرارة يوميا.

أرز. 1 فرن تجفيف

يتم حفظ بعض الوسائط المغذية والمستحضرات التشخيصية والدم والصفراء وما إلى ذلك في الثلاجة.

يتم استخدام جهاز الطرد المركزي لفصل الجزيئات الكثيفة من السائل (على سبيل المثال، خلايا الدم الحمراء من المصل).

تحتوي الخزانات على حوامل ثلاثية القوائم، وأطباق، ووسائط مغذية جافة، وكواشف، وما إلى ذلك.

بالقرب من الحوض يجب أن يكون هناك وعاء به محلول مطهر لعلاج الأيدي ومجموعة إسعافات أولية تحتوي على مجموعة من عناصر الإسعافات الأولية.

الملاكمة عبارة عن غرفة معزولة تمامًا لإجراء الأعمال الميكروبيولوجية في ظل ظروف تتطلب عقمًا خاصًا. يتم إجراء عملية تخصيب الهواء باستخدام مصابيح مبيد للجراثيم. يعد توفير الهواء المطهر بدرجة حرارة ورطوبة معينة داخل الصندوق من خلال تهوية الإمداد والعادم أفضل طريقة لضمان الظروف اللازمة للعمل. عادة ما يعمل شخصان في الصندوق. يدخلون الصندوق من خلال الصندوق الأمامي، حيث يغيرون الملابس (رداء، نعال، قبعة، قناع) ويدخلون الصندوق من الباب الثاني.

في الملاكمة لا يوجد كلام ويتم تجنب الحركات غير الضرورية.

يجب أن تكون غرفة تحضير الوسائط المغذية بجوار غرفة الغسيل والتعقيم. يجب أن تحتوي هذه الغرفة على حوض مزود بالمياه الساخنة والباردة، وجهاز تقطير، وموقد (غاز أو كهربائي)، وخزائن أو رفوف لتخزين الوسائط المغذية الجافة، والكواشف الكيميائية، والأواني المعقمة.

غسل– غرفة لغسل وتجهيز الأطباق والتي يجب أن تحتوي على مغسلة (بماء بارد وساخن) وموقد. غرفة الغسيل مجهزة بطاولات ورفوف ومعدات لغسل الصحون: منظفات وفرش وخرق.

تحتوي غرفة التعقيم على أجهزة لتعقيم الأطباق النظيفة ووسائط الثقافة وتطهير النفايات: الأوتوكلاف وخزائن التجفيف وما إلى ذلك.

إذا كانت هناك غرفة تحضير منفصلة، ​​يتم استخدامها للتحضير وتغليف الأطباق وغيرها من الأعمال المساعدة.

في السجل أو جزء من المبنى الذي يحل محله، يتم استلام المواد الواردة للبحث وتسجيلها وإصدار نتائج البحوث الميكروبيولوجية.

الحظيرة- غرفة لحفظ حيوانات التجارب، متوفرة فقط في المختبرات الكبيرة.

تاريخ المختبر

يعود تاريخ المختبر إلى تأسيس عيادة الأمراض الجلدية، عندما تم في عام 1911 تنظيم مختبر في عيادة الأمراض الجلدية بجامعة موسكو. تم تعيين المقيم N. A. Chernogubov كأول مساعد مختبر للمختبر.

في عام 1930، ترأس المختبر جي في فيجودتشيكوف، الذي أسس قسم البكتيريا في عام 1926. في عام 1970 أصبح المختبر جزءاً من المختبر التشخيصي السريري المركزي.

حاليًا، هي وحدة التشخيص الهيكلي لمجمع المختبر ونقل الدم التابع للمركز السريري لجامعة موسكو الطبية الحكومية الأولى التي سميت باسمها. آي إم سيشينوف.

يعد المختبر البكتريولوجي السريري أحد أكبر مختبرات الأحياء الدقيقة السريرية في موسكو.

يرأس المختبر طبيب من أعلى فئة، مرشح للعلوم الطبية
أولغا ألكسيفنا موروزوفا، هاتف: 8-499-245-38-71

تكوين الموظفين

يتكون المختبر من :

• 9 علماء بكتيريا، منهم 6 مؤهلين تأهيلا عاليا، 2 دكتوراه.
• 11 مساعد مختبر طبي 5 منهم على أعلى فئة التأهيل.

جميع الطاقم الطبي والتمريضي معتمدون لممارسة الطب في تخصصهم.

هيكل المختبر

يتضمن هيكل المختبر المجموعات الوظيفية التالية:

• دراسة البكتيريا الدقيقة للعمليات الالتهابية.
• الالتهابات المعوية.
• الالتهابات المحمولة جوا.
• الصحية والبكتريولوجية.
• التشخيص المختبري للأمراض الجلدية والتناسلية

يجري المختبر دراسات تشخيصية ووقائية ميكروبيولوجية للمواد المأخوذة من المرضى الداخليين والخارجيين في المستشفيات الجامعية في ديفيتشي بول ومركز التشخيص السريري والأقسام المشتركة بين العيادات. يتم تنفيذ قدر كبير من العمل في مجال المراقبة الصحية والبكتريولوجية في عيادات الجامعة. الأعمال التعاقدية والتجارية جارية.

معدات المختبرات.

تم تجهيز المختبر بالمعدات المخبرية التحليلية والعامة الحديثة:

• نظام آلي لتحضير وتعبئة الوسائط المغذية "MasterClave 09, APC 320/90" (AES، فرنسا)،
• خزانات التدفق الصفحي من فئة السلامة البيولوجية II NU-437 (NuAire، الولايات المتحدة الأمريكية)،
• حاضنات ثاني أكسيد الكربون NU-5500 (نوير، الولايات المتحدة الأمريكية)،
• منظمات الحرارة MIR 262 (سانيو، اليابان)،
• الأوتوكلاف MLS (سانيو، اليابان)،
• معقمات الهواء الجاف FED 115 (بيندر، ألمانيا).

لتحديد أنواع الكائنات الحية الدقيقة المعزولة وتحديد حساسيتها للأدوية المضادة للبكتيريا، تم استخدام محلل ميكروبيولوجي تلقائي "WalkAway 96 Plus" (سيمنز، ألمانيا) ومطياف الكتلة MALDI-TOF عالي الدقة والأداء (بروكر دالتونيك، ألمانيا). مستخدم. لكل من سلالات البكتيريا المعوية المعزولة، يتم إجراء اختبار لوجود إنزيمات ب لاكتاماز ممتدة الطيف (ESBLs). لفحص عينات الدم للتأكد من العقم، يتم استخدام محلل ثقافة الدم البكتريولوجية “Bactec 9050” (بيكتون ديكنسون، الولايات المتحدة الأمريكية). يتم زراعة عينات لوجود العدوى اللاهوائية في اللاهوائيات باستخدام وسائط مغذية خاصة مستوردة.

جميع طرق البحث والكواشف المستخدمة معتمدة.

يتم جمع عينات المواد السريرية فقط في حاويات بلاستيكية معقمة يمكن التخلص منها.
يدير المختبر برنامج شبكة احترافي لمراقبة الأبحاث الميكروبيولوجية "Microbe-2"، والذي يسمح لك بتحليل النتائج التي تم الحصول عليها، وتحديد نشاط المضادات الحيوية، والبنية المسببة لعلم تصنيف التهابي معين، وتحديد سلالات المستشفى.

النشاط العلمي.

يتم التعبير عن خصوصية مختبر علم الأحياء الدقيقة السريري في الطلب الكبير على مواد عمله في البحث العلمي للأطباء. ونتيجة للتعاون مع الأقسام السريرية، أصبح لدى المختبر ما لا يقل عن 4 منشورات سنويا.

المختبر مرخص ومشارك في النظام الفيدرالي لتقييم الجودة الخارجية.
رقم الترخيص FS-77-01-007170 بتاريخ 16 سبتمبر 2015

يجب على موظفي المختبر الالتزام بالقواعد التالية:

1. يُسمح لك بالعمل بملابس خاصة - رداء وقبعة. في الملاكمة، يرتدون ثوبًا معقمًا وقناعًا وقبعة، وإذا لزم الأمر، يرتدون قفازات مطاطية ونظارات واقية. تأكد من تغيير حذائك.

2. يمنع الخروج من المختبر بالعباءة أو وضع الملابس الخارجية فوقها.

3. يمنع التدخين والأكل في المختبر.

4. يجب اعتبار جميع المواد التي تدخل المعمل للتحليل ملوثة. ولذلك، يجب توخي الحذر عند تفريغ المواد. يجب مسح الحاويات من الخارج بمحلول مطهر ووضعها على صواني أو في الكوفيت.

5. في حالة وصول المادة الملوثة إلى الرداء أو اليدين أو الطاولة أو الأحذية، يجب إجراء التطهير وإبلاغ رئيس المختبر بذلك.

6. يجب تدمير المواد الملوثة بواسطة التعقيم. يتم تطهير الأدوات وكذلك سطح طاولة العمل بعد العمل.

7. يمنع إخراج المعدات والمخزون والمواد من المختبر دون تطهيرها أولاً.

8. يتم تطهير الماصات والشرائح وأكواب التغطية وغيرها من الأواني الزجاجية المستعملة عن طريق غمرها في محلول مطهر.

9. عند الانتهاء من العمل، يتم ترتيب مكان العمل وتطهيره بالكامل. يتم تخزين ثقافات الكائنات الحية الدقيقة اللازمة لمزيد من العمل في الثلاجة.

يتم الاحتفاظ بالوثائق التالية في المختبر البكتريولوجي:

1. كتاب حصر سلالات الثقافات المتحفية.

2. مجلة حركة المواد في المختبر.

3. سجل تعقيم وتدمير المواد المصابة.

4. سجل حيوانات التجارب المصابة.

5. مجلة الأبحاث (الخبرة).

تصنيف الكائنات الحية الدقيقة

التصنيف هو توزيع الكائنات الحية على أساس خصائصها المشتركة إلى مجموعات أو أصناف. يعتمد التصنيف على الخصائص الخارجية للكائنات الحية (النمط الظاهري) والخصائص الجينية للكائنات الحية (النمط الجيني).

ينقسم عالم الكائنات الحية الدقيقة حاليًا إلى الأشكال التالية:

1. الأشكال غير الخلوية:

أشباه الفيروسات.

2. الأشكال الخلوية:

2.1. بدائيات النوى:

اِختِصاص بكتيريا:

البكتيريا ذات جدار الخلية الرقيق (سلبية الجرام)؛

البكتيريا ذات جدار الخلية السميك (إيجابية الجرام)؛

البكتيريا التي ليس لها جدار خلوي (الميكوبلازما).

اِختِصاص العتيقة:

العتائق.

2.2. حقيقيات النواة:

الكائنات الاوليه؛

تستخدم الفئات التصنيفية التالية في تصنيف الميكروبات: المملكة، التقسيم، الطبقة، الرتبة، العائلة، الجنس، النوع. الوحدة التصنيفية الأساسية هي الأنواع. تتم تسمية الكائنات الحية الدقيقة وفقًا لقواعد المدونة الدولية لتسميات البكتيريا. لتعيين الأنواع البكتيرية، تم اعتماد تسمية مزدوجة (ثنائية)، اقترحها كارل لينيوس في القرن الثامن عشر. وفقًا للتسمية، بالأحرف اللاتينية يُكتب اسم الجنس (الاسم العام) أولاً بحرف كبير، ثم يُكتب اسم النوع (الاسم المحدد) بحرف صغير. في النص، العنوان بأكمله مكتوب بخط مائل. إذا تم تحديد الكائنات الحية الدقيقة فقط للجنس، فسيتم كتابة كلمة sp بدلاً من اسم النوع. (النوع - النوع). تتم الإشارة إلى الانتماء العام للميكروب من خلال بعض الخصائص المورفولوجية أو اسم العالم الذي اكتشف الميكروب، ويتم الإشارة إلى الانتماء النوعي إما عن طريق نوع المستعمرة أو موطن الكائن الدقيق. على سبيل المثال، تشير الإشريكية القولونية إلى أن الميكروب تم اكتشافه بواسطة T. Escherich، ويعيش الميكروب في الأمعاء. يتم تنظيم تكوين واستخدام الأسماء العلمية للكائنات الحية الدقيقة من خلال المدونة الدولية لتسميات البكتيريا، والمدونة الدولية لتسميات النباتات (الفطريات)، والمدونة الدولية لتسميات الحيوان (الأوالي) وقرارات اللجنة الدولية لتصنيف الفيروسات.

البكتيريا متغيرة للغاية. للتمايز داخل النوع من البكتيريا التي تختلف في خاصية معينة، يتم استخدام مفهوم "المتغير" (المختصر بـ "var"). هناك متغيرات تختلف في الخصائص المستضدية ( serovars) ، المتغيرات المقاومة للبكتيريا ( phageware)، وكذلك المتغيرات التي تختلف في الكيمياء الحيوية ( كيميائي) ، الخصائص البيولوجية أو الثقافية ( biovars).

في علم الأحياء الدقيقة، يتم استخدام المصطلحات المتخصصة: الثقافة النقية، الثقافة المختلطة، السلالة، الاستنساخ.

ثقافةعبارة عن مجموعة من الكائنات الحية الدقيقة التي يتم زراعتها على وسط غذائي صلب أو سائل في المختبر. تسمى ثقافة الكائنات الحية الدقيقة التي تتكون من أفراد من نوع واحد بالثقافة النقية. المزرعة المختلطة عبارة عن خليط من الكائنات الحية الدقيقة من أنواع مختلفة نمت في وسط غذائي عندما يتم تلقيح المادة قيد الدراسة أو عندما تدخل أنواع أخرى من الكائنات الحية الدقيقة من البيئة الخارجية إلى وسط غذائي محصن بنوع واحد من الميكروبات.

أَضْنَى(ألمانية) السداة– تحدث) عبارة عن مزرعة نقية لنوع معين من الكائنات الحية الدقيقة، معزولة عن المادة قيد الدراسة، مأخوذة في لحظة معينة من كائن معين.

استنساخ(اليونانية استنساخ– الطبقات) هو ذرية (ثقافة) خلية أم واحدة (جسيم فيروسي) لنوع معين من الكائنات الحية الدقيقة.