دراسة تأثير خلايا الكبد على الخلايا الجذعية. الخلايا البطانية وخلايا كوبفر وإيتو حول علاج أمراض الأعضاء

يمكن تحقيق الاتصال بين الخلايا عن طريق إفراز نظير الصماء والاتصالات المباشرة من خلية إلى أخرى. من المعروف أن الخلايا المحيطة بالجيبية الكبدية (HPC) تنشئ مكانة إقليمية للخلايا الجذعية وتحدد تمايزها. وفي الوقت نفسه، لا يزال HPC يتميز بشكل سيئ على المستوى الجزيئي والخلوي.

كان الهدف من المشروع هو دراسة التفاعلات بين الخلايا المحيطة بالجيوب الكبدية لدى الفئران والخلايا الجذعية المختلفة مثل جزء الخلايا وحيدة النواة من دم الحبل السري البشري (UCB-MC) والخلايا اللحمية الوسيطة متعددة القدرات المشتقة من نخاع عظم الفئران (BM-MMSC).

المواد والأساليب. الفئران BM-MSC وHPC، تم اشتقاق خلايا UCB-MC البشرية باستخدام التقنيات القياسية. لدراسة تنظيم HPC نظير الصماوي، شاركنا في زراعة خلايا UCB-MC أو BM-MMSC مع HPC باستخدام غرف Boyden ووسائط خلايا HPC المكيفة. تمت مشاركة الخلايا ذات العلامات التفاضلية وتم ملاحظة تفاعلاتها بواسطة الفحص المجهري الفلوري على النقيض من الطور والكيمياء المناعية.

نتائج. خلال الأسبوع الأول من الزراعة كان هناك تألق ذاتي لفيتامين A بسبب قدرة PHC على تخزين الدهون. أثبتت BM-MMSC جدوى عالية في جميع النماذج الثقافية المشتركة. بعد يومين من الحضانة في الثقافة المشتركة للوسائط المكيفة لـ BM-MMSC مع HPC لاحظنا تغيرات في شكل MMSC - لقد انخفض حجمها وأصبحت براعمها أقصر. كان التعبير عن α-Smooth Muscle Actin وdesmin مشابهًا للأرومة الليفية العضلية - وهو شكل وسيط من استزراع خلايا إيتو في المختبر. قد تكون هذه التغييرات بسبب تحفيز نظير الصماوي بواسطة HPC. وقد لوحظ التأثير الأكثر عمقًا لـ HPC على خلايا UCB-MC في ثقافة الاتصال المشتركة، وبالتالي من المهم لخلايا UCB-MC إنشاء اتصالات مباشرة من خلية إلى أخرى للحفاظ على قدرتها على البقاء. لم نلاحظ أي اندماج للخلايا بين خلايا HPC /UCB وHPC /BM-MMSC في الثقافات المشتركة. وفي تجاربنا الإضافية نخطط لدراسة عوامل النمو التي تنتجها HPC للتمايز الكبدي للخلايا الجذعية.

مقدمة.

ذات أهمية خاصة بين تنوع خلايا الكبد الخلايا المحيطة بالجيبية الكبدية (خلايا إيتو). بفضل إفراز عوامل النمو ومكونات المصفوفة بين الخلايا، فإنها تخلق بيئة دقيقة لخلايا الكبد، وقد أظهر عدد من الدراسات العلمية قدرة الخلايا النجمية الكبدية على تكوين بيئة دقيقة للخلايا السلفية (بما في ذلك الخلايا المكونة للدم) والتأثير على تكوينها. التمايز إلى خلايا الكبد. قد تحدث التفاعلات من خلية إلى أخرى لهذه المجموعات الخلوية من خلال إفراز نظير الصماوي لعوامل النمو أو الاتصالات المباشرة من خلية إلى أخرى، ولكن الأساس الجزيئي والخلوي لهذه العمليات لا يزال غير مفهوم بشكل جيد.

الغرض من الدراسة.

دراسة آليات التفاعل خلايا إيتو مع الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSC) والخلايا الوسيطة (MMSC).تحت ظروف المختبر.

المواد والأساليب.

تم عزل خلايا إيتو من كبد الفئران بطريقتين إنزيميتين مختلفتين. وفي الوقت نفسه، تم الحصول على MMSCs اللحمية من نخاع عظم الفئران. تم عزل الجزء الوحيد النواة من الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري البشري. تمت دراسة تأثيرات نظير الصماوي لخلايا إيتو من خلال زراعة الخلايا MMSCs وHSCs في الوسط الذي نمت فيه خلايا إيتو، ومن خلال المشاركة في زراعة الخلايا المفصولة بغشاء نصف منفذ. تمت دراسة تأثير الاتصالات بين الخلايا أثناء زراعة الخلايا المشتركة. للحصول على تصور أفضل، تم تصنيف كل مجموعة بعلامة فلورسنت فردية. تم تقييم مورفولوجيا الخلية عن طريق تباين الطور والمجهر الفلوري. تمت دراسة الخصائص المظهرية للخلايا المستنبتة باستخدام التحليل الكيميائي المناعي.

نتائج.

في غضون أسبوع بعد عزل الخلايا المحيطة بالجيبية، لاحظنا قدرتها على الفلورسنت الذاتي بسبب قدرتها على تراكم الدهون. بعد ذلك، دخلت الخلايا مرحلة متوسطة من نموها واكتسبت شكلًا نجميًا. في المراحل الأولية للزراعة المشتركة لخلايا إيتو مع نخاع عظم الفئران MMSCs، تم الحفاظ على جدوى MMSCs في جميع خيارات الزراعة. في اليوم الثاني، عندما تمت زراعة MMSCs في وسط زراعة خلايا Ito، حدث تغيير في شكل MMSCs - فقد انخفض حجمها، واختصرت عملياتها. زاد التعبير عن الأكتين والعضلات الملساء ألفا في MMSCs، مما يشير إلى تشابهها المظهري مع الخلايا الليفية العضلية، وهي مرحلة نمو وسيطة لخلايا إيتو المنشطة في المختبر. تشير بياناتنا إلى تأثير عوامل نظير الصماء التي تفرزها خلايا إيتو على خصائص MMSCs في الثقافة.

استنادًا إلى الزراعة المشتركة للخلايا الجذعية المكونة للدم مع خلايا إيتو، فقد تبين أن الخلايا الجذعية المكونة للدم تحتفظ بقدرتها على البقاء فقط أثناء الزراعة المشتركة مع خلايا إيتو. وفقا لتحليل الفلورسنت للثقافات المختلطة، لم يتم الكشف عن ظاهرة اندماج الخلايا من مجموعات سكانية مختلفة.

الاستنتاجات. للحفاظ على حيوية الخلايا الجذعية المكونة للدم، يعد وجود اتصالات مباشرة بين الخلايا مع خلايا إيتو عاملاً حاسماً. وقد لوحظ تنظيم الباراسرين فقط عندما تم استزراع MMSCs في الوسط المغذي الذي نمت فيه خلايا إيتو. ومن المخطط دراسة تأثير عوامل محددة تنتجها خلايا إيتو على التمييز بين HSCs و MMSCs في زراعة الخلايا في الدراسات التالية.

شافيجولينا إيه كيه، تروندين إيه إيه، شيخوتدينوفا إيه آر، كاليجين إم إس، غازيزوف آي إم، ريزفانوف إيه إيه، جوميروفا إيه إيه، كياسوف إيه بي.
المؤسسة التعليمية الحكومية للتعليم المهني العالي "جامعة كازان الطبية الحكومية التابعة للوكالة الفيدرالية للصحة والتنمية الاجتماعية"

1

تم إجراء تحليل البنية التحتية والكيميائية المناعية والمورفومترية لسكان خلايا الكبد النجمية في ديناميكيات تطور التليف وتليف الكبد من أصل فيروسي معدي. تم الكشف عن التنشيط الليفي للخلايا النجمية الكبدية، والذي يتميز بانخفاض قطرات الدهون والتعبير المتزامن عن الخصائص الشبيهة بالخلايا الليفية - وهو تفاعل كيميائي مناعي إيجابي للعضلات الملساء ألفا أكتين، وتضخم الشبكة السيتوبلازمية الحبيبية والتكوين المحيط بالخلية للعديد من الكولاجين. ألياف ليفية. لقد ثبت أنه على الرغم من الانخفاض التدريجي في الكثافة العددية للخلايا النجمية المحتوية على الدهون أثناء تطور التليف، إلا أن الحاجة إلى الحفاظ على وظيفة ترسيب الريتينويد تظل قائمة: في تليف الكبد، تم العثور على الخلايا النجمية المحتوية على الدهون في الخلايا الليفية. الحاجز وداخل الفصيصات. وخلص إلى أن الخلايا النجمية الكبدية هي مجموعة غير متجانسة متعددة الأشكال مع مجموعة واسعة من النشاط الوظيفي.

التكاثر الليفي

خلايا الكبد النجمية

البنية التحتية

الكيمياء المناعية

1. Balabaud C.، Bioulac-Sage P.، Desmouliere A. دور الخلايا النجمية الكبدية في تجديد الكبد // J. Hepatol. – 2004. – المجلد. 40. – ص1023–1026.

2. برانداو دي إف، رامالهو إل إن زد، رامالهو إف إس. تليف الكبد والخلايا النجمية الكبدية // Acta Cirúrgica Brasileira. – 2006. – المجلد. 21. – ص54–57.

3. ديسميت في.جي.، جربر إم.، هوفناجل جي.إتش. تصنيف التهاب الكبد المزمن: التشخيص والدرجات والتدريج // أمراض الكبد. – 1994. – المجلد. 19. – ص 1523-1520.

4. غابيلي إي.، برينر دي.إيه.، ريب آر.إيه. تليف الكبد: إشارات تؤدي إلى تضخيم الخلية النجمية الكبدية الليفية // الأمامية. بيوسك. – 2003. – المجلد. 8. – ص 69 – 77.

5. جيرتس أ. حول أصل الخلايا النجمية: الأديم المتوسط، الأديم الباطن، الأديم الظاهر العصبي؟ // جي هيباتول. – 2004. – المجلد. 40. – ص 331 – 334.

6. جوتيريز-رويز إم سي، جوميز-كويروز إل.إي. تليف الكبد: البحث عن إجابات لنموذج الخلية // الكبد المتدرب. – 2007. – المجلد. 10. – ص 434 – 439.

7. كيسيليفا ت.، برينر د.أ. دور الخلايا النجمية الكبدية في التليف وعكس التليف // J. Gastroenterol. هيباتول. – 2007. – المجلد. 22.- ص73-س78.

8. رايدر إس.دي. تطور التليف الكبدي لدى مرضى التهاب الكبد C: دراسة خزعة الكبد المتكررة المحتملة // القناة الهضمية. – 2004. – المجلد. 53. – ص 451 – 455.

9. شوبان د.، أفضل ن.ح. تليف الكبد // لانسيت. – 2008. – المجلد. 371. - ص 838-851.

10. Senoo H. هيكل ووظيفة الخلايا النجمية الكبدية // ميد. الإلكترون. ميكروسك. – 2004. – المجلد. 37. – ص3–15.

تتوضع خلايا الكبد النجمية (الخلايا الشحمية، وخلايا إيتو، وخلايا الكبد المتراكمة للدهون) في الفراغات الموجودة بين خلايا الكبد والبطانة البطانية للجيوب الأنفية وتلعب دورًا رائدًا في تنظيم توازن الريتينويد، حيث تترسب ما يصل إلى 80٪ من فيتامين أ. مساحة Disse هي المنطقة ذات المسؤولية الوظيفية الأكبر، حيث توفر التبادل عبر الجيوب الأنفية. لقد ثبت في النماذج التجريبية وفي زراعة الخلايا أن الخلايا النجمية الكبدية تتمايز إلى قطرات دهنية كبيرة من السيتوبلازم تحتوي على فيتامين أ؛ يتم تفسير هذا النمط الظاهري على أنه "يستريح".

يتم إيلاء أهمية متزايدة لدور الخلايا النجمية في تطور تليف الكبد وتليف الكبد. عند تلقي المحفزات الليفية، "تتمايز" الخلايا النجمية "المستقرة" إلى النمط الظاهري الشبيه بالأرومة الليفية العضلية وتبدأ في إنتاج الكولاجين والبروتيوغليكان ومكونات أخرى من المصفوفة خارج الخلية. يحد التليف على مستوى الأوردة المركزية أو الجيوب الأنفية أو الأوعية البابية من ديناميكا الدم الطبيعية للكبد، مما يؤدي إلى انخفاض في الحمة الأيضية الفعالة، وبالتالي ارتفاع ضغط الدم البابي والتحويل البابي الجهازي. يؤدي تراكم الأنسجة الضامة في مساحات Disse إلى تعطيل حركة التمثيل الغذائي الطبيعية بين الدم وخلايا الكبد، مما يتداخل مع تصفية الجزيئات الكبيرة المنتشرة، ويغير التفاعلات بين الخلايا، ويؤدي إلى خلل في خلايا الكبد.

هناك آراء متضاربة حول ما إذا كانت الخلايا النجمية المنشطة قادرة على العودة إلى النمط الظاهري الهادئ. تم الحصول على أدلة على أن الخلايا النجمية الكبدية الليفية يمكنها تحييد عملية التنشيط جزئيًا، على سبيل المثال، عند تعرضها للريتينويدات أو عند التفاعل مع مكونات المصفوفة خارج الخلية، بما في ذلك الكولاجين الليفي من النوع الأول أو مكونات الغشاء القاعدي. يكمن حل هذه المشكلة في قلب مشكلة انعكاس التليف وتطوير الأساليب العلاجية لعلاج تليف الكبد.

الغرض من الدراسة- إجراء دراسة شاملة للخصائص الهيكلية والوظيفية لخلايا الكبد النجمية في ديناميات التغيرات الليفية في نموذج لعدوى فيروس التهاب الكبد الوبائي المزمن.

المواد وطرق البحث

تم إجراء دراسة بصرية ضوئية ومجهرية إلكترونية ومورفومترية شاملة لعينات خزعة الكبد من الإصابة بفيروس التهاب الكبد الوبائي المزمن في مراحل مختلفة من التغيرات التليفية (100 عينة مقسمة إلى 4 مجموعات متساوية حسب شدة التليف). من المهم أن نلاحظ أن الخلايا النجمية المحتوية على الدهون هي أفضل تصور على المقاطع شبه الرقيقة، في حين أن الخلايا النجمية الليفية هي أفضل تصور فقط على المقاطع سامسونج أو عن طريق التصوير المناعي.

تم إصلاح عينات الكبد في محلول بارافورمالدهيد 4٪ مبرد إلى 4 درجات مئوية، وتم تحضيره في محلول فوسفات ميلونيج (الرقم الهيدروجيني 7.2-7.4)؛ تم تلطيخ أقسام البارافين بالهيماتوكسيلين ويوزين بالاشتراك مع تفاعل بيرلز، وفقًا لفان جيسون مع تلطيخ إضافي للألياف المرنة باستخدام ريسورسينول فوكسين من Weigert، وتم إجراء تفاعل CHIC. تم تلطيخ المقاطع شبه الرقيقة بكاشف شيف وAzure II. أجريت الدراسة باستخدام المجهر العالمي Leica DM 4000B (ألمانيا). تم التقاط الصور المجهرية باستخدام كاميرا Leica DFC 320 الرقمية وبرنامج كمبيوتر Leica QWin. تم فحص مقاطع سامسونج، على النقيض من خلات اليورانيل وسيترات الرصاص، في المجهر الإلكتروني JEM 1010 عند جهد متسارع قدره 80 كيلو واط.

تم تحديد مرحلة تليف الكبد على مقياس مكون من 4 نقاط، بدءًا من التليف البابي (المرحلة الأولى) إلى تليف الكبد مع تكوين الحاجز الوعائي البابي المركزي والتحول العقدي للحمة. تم التعرف على الخلايا النجمية الكبدية وغيرها من العناصر الخلوية المنتجة للمصفوفة في ديناميكيات تطور التليف من خلال التعبير عن العضلات الملساء α-actin.

تم اختبار تعبير العضلات الملساء α-actin في الخلايا المنتجة لمصفوفة الكبد باستخدام طريقة المناعية غير المباشرة المكونة من خطوتين مع نظام تصوير منتج التحكم السلبي بالستربتافيدين-البيوتين. تم استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للعضلات الملساء α-actin (NovoCastra Lab. Ltd، UK) عند التخفيف بنسبة 1:25 كأجسام مضادة أولية؛ كأجسام مضادة ثانوية - أجسام مضادة بيولوجية عالمية. تم تصور منتجات التفاعل الكيميائي المناعي باستخدام ديامينوبنزيدين، ثم تم تلوين المقاطع باستخدام هيماتوكسيلين ماير. تم تقييم الكثافة العددية للخلايا النجمية المحتوية على الدهون على مقاطع شبه رفيعة لكل وحدة مجال رؤية تساوي 38000 ميكرومتر. وعند معالجة البيانات إحصائياً تم استخدام اختبار الطالب؛ تعتبر الاختلافات في المعلمات المقارنة مهمة إذا كان احتمال الخطأ P أقل من 0.05.

نتائج البحث ومناقشته

مع الحد الأدنى من التغييرات الليفية في كبد المرضى الذين يعانون من التهاب الكبد الوبائي المزمن C، كقاعدة عامة، يتم العثور على عدد كبير إلى حد ما من الخلايا النجمية، والتي تكون مرئية بوضوح فقط في الأقسام شبه الرفيعة والرقيقة للغاية ويتم تمييزها في مساحات Disse بسبب وجود قطرات دهنية كبيرة في السيتوبلازم. إن تحول الخلايا النجمية من الخلايا "المستقرة" التي تحتوي على الرتينوئيدات إلى الخلايا الليفية يكون مصحوبًا بانخفاض تدريجي في عدد قطرات الدهون. وفي هذا الصدد، يمكن تحديد العدد الحقيقي للخلايا النجمية باستخدام دراسة مجهرية إلكترونية وكيميائية مناعية شاملة.

في المراحل الأولية من التليف (0، I) في التهاب الكبد المزمن C، عند دراسة المقاطع شبه الرقيقة، تم تمييز عدد خلايا الكبد النجمية من خلال تعدد الأشكال الواضح - حيث تباين حجم وشكل وعدد قطرات الدهون وخصائصها الصبغية بشكل حاد : الاختلافات في الأسميوفيلية للمواد المحتوية على الدهون في الخلايا المختلفة. كانت الكثافة العددية لخلايا الكبد النجمية، والتي تم تصورها في الاستعدادات من خلال وجود قطرات الدهون السيتوبلازمية، 5.01 ± 0.18 لكل وحدة مجال رؤية.

ترتبط ميزات البنية التحتية للخلايا النجمية بعدم تجانس كثافة الإلكترون لقطرات الدهون ليس فقط داخل خلية واحدة، ولكن أيضًا بين الخلايا الشحمية المختلفة: على خلفية الركيزة الدهنية الشفافة للإلكترون، برزت حافة هامشية أكثر محبة للأوسميوفيلية؛ بالإضافة إلى ذلك، كانت النوى متعددة الأشكال بشكل حاد، وتباين طول العمليات السيتوبلازمية. من بين ميزات البنية التحتية للخلايا النجمية المحتوية على الدهون، إلى جانب وجود قطرات دهنية، يمكن ملاحظة وجود كمية صغيرة جدًا من المصفوفة السيتوبلازمية، فقيرة في العضيات الغشائية، بما في ذلك الميتوكوندريا، وبالتالي، على ما يبدو، يسمى هذا النمط الظاهري للخلايا الشحمية " يستريح" أو "السلبي".

في مراحل التليف II و III، اكتسبت البنية التحتية لمعظم الخلايا النجمية ما يسمى بالنمط الظاهري المختلط أو الانتقالي - وهو الوجود المتزامن للخصائص المورفولوجية لكل من الخلايا المحتوية على الدهون والخلايا الشبيهة بالألياف الليفية. في مثل هذه الخلايا الشحمية، كان للنواة غزوات عميقة للنوية، ونوية أكبر، وحجم متزايد من السيتوبلازم الذي يحتفظ بقطرات الدهون. وفي الوقت نفسه، زاد بشكل حاد عدد الميتوكوندريا والريبوسومات الحرة والبوليزومات والأنابيب في الشبكة السيتوبلازمية الحبيبية. كقاعدة عامة، كان هناك اتصال غشائي بين قطرات الدهون والميتوكوندريا، مما يشير إلى "استخدام" الدهون. في العديد من الخلايا، تتحلل قطرات الدهون عن طريق تكوين جسيمات البلعمة الذاتية، والتي يتم التخلص منها بعد ذلك عن طريق الإخراج الخلوي. وفي بعض الحالات، لوحظ تكاثر الخلايا النجمية ذات النمط الظاهري المختلط.

تتميز الخلايا النجمية المنتجة للمصفوفة، والأكثر عددًا في مرحلة تليف الكبد، بالغياب التام للحبيبات الدهنية، وشكل يشبه الخلايا الليفية، ومقصورة تصنيع البروتين المتطورة، وتشكيل هياكل ليفية مقلصة في السيتوبلازم؛ تم تحديد العديد من حزم ألياف الكولاجين ذات التصدعات العرضية المحددة حول الخلايا في مساحات Disse.

بشكل عام، مع تطور التهاب الكبد المزمن C، المصحوب بالتليف الليفي حول الجيوب الأنفية، كانت هناك علامات مورفولوجية لتنشيط الخلايا النجمية للكبد، وتحولها من ما يسمى بالخلايا "السلبية"، التي تتراكم فيتامين أ، إلى خلايا ليفية ومتكاثرة.

في مرحلة التحول إلى تليف الكبد، كان هناك انخفاض كبير في الكثافة العددية للخلايا النجمية المحتوية على الدهون، مما يشير إلى تحولها الليفي. ومع ذلك، مع تليف الكبد الثابت، في حالات معزولة كانت هناك مناطق من حمة الكبد تحتوي على خلايا نجمية تحتوي على الدهون المحيطة بالجيبيات. بالإضافة إلى ذلك، في إحدى العينات، تم العثور على العديد من الخلايا الشحمية في الأنسجة الليفية المحيطة بالباب، مما يشير على الأرجح إلى الدور الهام للخلايا النجمية في استقلاب الرتينوئيدات في الجسم، حتى في مرحلة تليف الكبد. بالإضافة إلى ذلك، يبدو أن الخلايا النجمية لديها عدد من الوظائف الأخرى، فهي توجد أيضًا في الأعضاء خارج الكبد مثل البنكرياس والرئتين والكليتين والأمعاء، ويُعتقد أن الخلايا النجمية الكبدية وخارج الكبد تشكل نظام الخلايا النجمية المنتشرة في الجسم. الجسم، على غرار نظام APUD. على سبيل المثال، على الرغم من ارتباط الخلايا النجمية الليفية بتليف الكبد، فإن تنشيطها قد يلعب دورًا مفيدًا في حالات الإصابة الحادة لأنه يؤدي إلى تكوين دائرة انسجة مناسبة لتجديد الخلايا المتني.

كان لشدة التليف المحيط بالكبد في عدوى التهاب الكبد الوبائي المزمن، وفقًا للتحليل المورفومتري، علاقة عكسية كبيرة مع الكثافة العددية للخلايا النجمية المحتوية على الدهون - في المرحلة الثالثة من التليف وفي تليف الكبد كانت 0.20 ± 0.03 لكل وحدة بصرية المجال، وهو أقل أهمية (ص< 0,05), чем на стадиях фиброза 0 - I (5,01 ± 0,18) и II (2,02 ± 0,04).

قمنا باختبار النشاط الليفي لخلايا الكبد المنتجة للمصفوفة باستخدام دراسة كيميائية مناعية للتعبير عن ألفا أكتين في العضلات الملساء. تم العثور على منتجات التفاعل الكيميائي المناعي بكثافة متفاوتة في السيتوبلازم للخلايا النجمية المنشطة المترجمة داخل الفصيصات الكبدية. ولوحظ تعبير مهم بشكل خاص عن العضلات الملساء α-actin في سيتوبلازم الخلايا الليفية والخلايا الليفية العضلية في مناطق البوابة وخلايا العضلات الملساء الوعائية والخلايا الليفية العضلية حول الأوردة المركزية.

معظم البيانات المتعلقة بالآليات الخلوية للتليف تأتي من الدراسات التي أجريت على الخلايا النجمية الكبدية، ولكن من الواضح أن الخلايا المختلفة المنتجة للمصفوفة (لكل منها موقع متميز ونمط ظاهري كيميائي مناعي وبنية تحتية) تساهم في تطور تليف الكبد. وهي تشمل الخلايا الليفية والخلايا الليفية العضلية في المسالك البوابية، وخلايا العضلات الملساء الوعائية والخلايا الليفية العضلية حول الأوردة المركزية، والتي يتم تنشيطها في حالات تلف الكبد المزمن.

خاتمة

وقد تم إثبات دور الخلايا النجمية الكبدية في تطور تليف الأعضاء في التهاب الكبد المزمن C. ومع تقدم التليف، تنخفض الكثافة العددية للخلايا النجمية المحتوية على الدهون بشكل ملحوظ، في حين يحتفظ جزء من السكان بما يسمى النمط الظاهري "الراحة". للقيام بوظيفة التمثيل الغذائي. تتميز الخلايا النجمية الكبدية "الشبيهة بالليفية العضلية" في حالة من التنشيط الليفي بالسمات الهيكلية والوظيفية التالية: انخفاض في عدد قطرات الدهون واختفاءها لاحقًا، وتضخم الشبكة السيتوبلازمية الحبيبية والميتوكوندريا، والتكاثر البؤري، والتعبير الكيميائي المناعي من الخصائص الشبيهة بالخلايا الليفية، بما في ذلك العضلات الملساء ألفا أكتين، وتكوين ألياف الكولاجين المحيطة بالخلية في مساحات ديس.

وبالتالي، فإن الخلايا النجمية الكبدية ليست مجموعة ساكنة، ولكنها مجموعة ديناميكية تشارك بشكل مباشر في إعادة تشكيل المصفوفة المحيطة بالكبد داخل الفصيصات.

المراجعون:

Vavilin V.A.، دكتوراه في العلوم الطبية، أستاذ، رئيس. مختبر استقلاب الدواء، معهد أبحاث البيولوجيا الجزيئية والفيزياء الحيوية، فرع سيبيريا للأكاديمية الروسية للعلوم الطبية، نوفوسيبيرسك؛

Kliver E.E.، دكتوراه في العلوم الطبية، باحث رئيسي في مختبر علم الأمراض والمجهر الإلكتروني، معهد نوفوسيبيرسك لأبحاث أمراض الدورة الدموية الذي سمي على اسم الأكاديمي E.N. مشالكين وزارة الصحة والتنمية الاجتماعية في الاتحاد الروسي، نوفوسيبيرسك.

تم استلام العمل من قبل المحرر في 15 أغسطس 2011.

الرابط الببليوغرافي

Postnikova O.A.، Nepomnyashchikh D.L.، Aidagulova S.V.، Vinogradova E.V.، Kapustina V.I.، Nokhrina Zh.V. الخصائص الهيكلية والوظيفية لخلايا الكبد النجمية في ديناميات التليف // بحث أساسي. – 2011. – رقم 10-2. – ص359-362;
عنوان URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28817 (تاريخ الوصول: 30/01/2020). نلفت انتباهكم إلى المجلات التي تصدرها دار النشر "أكاديمية العلوم الطبيعية"

الخلايا النجمية

أعلاه، تمثيل تخطيطي لخلية إيتو (HSC) المجاورة لخلايا الكبد القريبة (PCs)، أسفل الخلايا الظهارية الجيبية الكبدية (ECs). S - الكبد الجيوب الأنفية. KC - خلية كوبفر. أسفل اليسار - خلايا إيتو في الثقافة تحت المجهر الضوئي. أسفل اليمين - يكشف المجهر الإلكتروني عن العديد من الفجوات الدهنية (L) لخلايا إيتو (HSCs) التي تخزن الرتينوئيدات.

خلايا إيتو(مرادفات: خلية نجمية الكبد, خلية تخزين الدهون, خلية شحمية، إنجليزي الخلية النجمية الكبدية، HSC، خلية إيتو، خلية إيتو ) - الخلايا الحوطية الموجودة في الحيز المحيط بالجيبية من الفصيص الكبدي، قادرة على العمل في حالتين مختلفتين - هادئو مفعل. تنشيط خلايا ايتوتلعب دورًا رئيسيًا في التكوّن الليفي - تكوين أنسجة ندبية في تلف الكبد.

في الكبد السليم، توجد الخلايا النجمية حالة الهدوء. في هذه الحالة، تحتوي الخلايا على عدة نتوءات تغطي الشعيرات الدموية الجيبية. من السمات المميزة الأخرى للخلايا وجود احتياطيات فيتامين أ (الريتينويد) في السيتوبلازم على شكل قطرات دهنية. تشكل خلايا إيتو الهادئة 5-8% من جميع خلايا الكبد.

تنقسم نتائج خلايا إيتو إلى نوعين: محيط بالجيب(تحت البطانية) و بين الخلايا. الأول يخرج من جسم الخلية ويمتد على طول سطح الشعيرات الدموية الجيبية، ويغطيها بفروع رفيعة تشبه الأصابع. النتوءات المحيطة بالجيبية مغطاة بزغابات قصيرة ولها براعم دقيقة طويلة مميزة تمتد أكثر على طول سطح الأنبوب البطاني الشعري. تنقسم الإسقاطات بين الخلايا الكبدية، بعد التغلب على صفيحة خلايا الكبد والوصول إلى الجيوب الأنفية المجاورة، إلى عدة نتوءات حول الجيوب الأنفية. وهكذا، في المتوسط، تغطي خلية إيتو أكثر بقليل من اثنين من الجيوب الأنفية المتجاورة.

عندما يتضرر الكبد، تصبح خلايا إيتو حالة تفعيلها. يتميز النمط الظاهري المنشط بالتكاثر، والانجذاب الكيميائي، والانقباض، وفقدان مخازن الريتينويد، وتكوين خلايا تشبه الخلايا الليفية العضلية. تُظهر الخلايا النجمية الكبدية المنشطة أيضًا مستويات متزايدة من الجينات الجديدة مثل α-SMA، والكيموكينات، والسيتوكينات. يشير التنشيط إلى بداية المرحلة المبكرة من التكوّن الليفي ويسبق زيادة إنتاج بروتينات ECM. تتميز المرحلة الأخيرة من شفاء الكبد بزيادة موت الخلايا المبرمج لخلايا إيتو المنشطة، ونتيجة لذلك انخفض عددها بشكل حاد.

يتم استخدام تلطيخ كلوريد الذهب لتصور خلايا إيتو تحت المجهر. لقد ثبت أيضًا أن العلامة الموثوقة لتمييز هذه الخلايا عن الخلايا الليفية العضلية الأخرى هي تعبيرها عن بروتين ريلين.

قصة

روابط

• Young-O Queon، Zachary D. Goodman، Jules L. Dienstag، Eugene R. Schiff، Nathaniel A. Brown، Elmar Burkhardt، Robert Schoonhoven، David A. Brenner، Michael W. Fried (2001) انخفاض التكوّن الليفي: دراسة كيميائية مناعية لـ خزعات مقترنة بخلايا الكبد بعد العلاج باللاميفودين في المرضى الذين يعانون من التهاب الكبد المزمن B. مجلة علم أمراض الدم 35؛ 749-755. - ترجمة مقال في مجلة "العدوى والعلاج المضاد للميكروبات" المجلد 04/ن 3/2002 على موقع Consilium-Medicum.
• بوبر H: توزيع فيتامين (أ) في الأنسجة كما يكشف عن طريق الفحص المجهري الفلوري. القس فيزيول 1944، 24: 205-224.

ملحوظات

مؤسسة ويكيميديا. 2010.

تعرف على "الخلايا النجمية" الموجودة في القواميس الأخرى:

الخلايا - احصل على قسيمة خصم عاملة من Akademika Gallery Cosmetics أو قم بشراء خلايا مربحة مع توصيل مجاني للبيع في Gallery Cosmetics

أعلاه، تمثيل تخطيطي لخلية إيتو (HSC) المجاورة لخلايا الكبد القريبة (PCs)، أسفل الخلايا الظهارية الجيبية الكبدية (ECs). الجيوب الأنفية في الكبد. خلية كيه سي كوبفر. أسفل اليسار خلايا إيتو في الثقافة تحت المجهر الضوئي... ويكيبيديا

الخلايا العصبية- الخلايا العصبية، العناصر الرئيسية للنسيج العصبي. اكتشفه N. K. Ehrenberg ووصفه لأول مرة في عام 1833. بيانات أكثر تفصيلاً عن N. to مع الإشارة إلى شكلها ووجود عملية أسطوانية محورية وكذلك ... ... الموسوعة الطبية الكبرى

الخلايا العصبية الكبيرة في القشرة المخيخية (انظر المخيخ) (م)، والتي تمتد محاورها إلى ما وراء حدودها؛ تم وصفه في عام 1837 بواسطة يا إي بوركين. من خلال P. k يتم تحقيق التأثيرات القيادية للقشرة M على المراكز الحركية التابعة لها (نوى M والنواة الدهليزية). ش... ... الموسوعة السوفيتية الكبرى

أو فئة Gephyrei من الشعبة الفرعية Vermiformes أو Vermidea، وهو نوع من الديدان أو Vermes. الحيوانات التي تنتمي إلى هذه الفئة هي أشكال بحرية حصرية تعيش في طين ورمال البحار الدافئة والباردة. تم إنشاء فئة النجمة Ch. بواسطة Quatrphage... ...

لا ينبغي الخلط بينه وبين النيوترون. الخلايا العصبية الهرمية في القشرة الدماغية للفأرة الخلية العصبية (الخلية العصبية) هي وحدة وظيفية هيكلية للجهاز العصبي. تحتوي هذه الخلية على بنية معقدة ومتخصصة للغاية في البنية... ... ويكيبيديا

ينطبق هذا الاسم على بعض الخلايا الصبغية وعلى أجزاء الخلايا (الحيوانية والنباتية) التي تحتوي على الصبغة. X. توجد في كثير من الأحيان في النباتات (انظر المقالة السابقة بقلم N. Gaidukov)، ولكنها موصوفة أيضًا في الكائنات الأولية... القاموس الموسوعي ف. بروكهاوس وآي. إيفرون

- (cellulae flammeae)، خلايا تحتوي على حزمة من الأهداب وعملية طويلة، تغلق الجزء القريب من أنبوب البروتونفريديوم. المركز، الجزء "P. ك، وجود العديد. العمليات النجمية، تمر إلى التجويف، وتنزل خصلة من الأهداب الطويلة إلى التجويف... ...

الخلايا البطانية النجمية (reticuloendoteliocyti stellatum)، خلايا الجهاز الشبكي البطاني، الموجودة في الداخل. سطح الأوعية الشعرية (الجيوب الأنفية) للكبد في البرمائيات والزواحف والطيور والثدييات. درس ك.... القاموس الموسوعي البيولوجي

خلايا اللهب (cellulae flammeae)، خلايا تحتوي على حزمة من الأهداب وعملية طويلة، تغلق الجزء القريب من أنبوب البروتونفريديوم. مركز. جزء من P. إلى، وجود العديد. تتم العمليات النجمية، وتمر إلى التجويف، وتنزل الحزمة إلى التجويف... ... القاموس الموسوعي البيولوجي

- (س. جولجي) الخلايا العصبية النجمية للطبقة الحبيبية لقشرة المخيخ ... قاموس طبي كبير

الجينات والخلايا: المجلد الخامس، العدد 1، 2010، الصفحات: 33-40

المؤلفون

جوميروفا أ.، كياسوف أ.ب.

يعد الطب التجديدي واحدًا من أسرع مجالات الطب تطورًا وواعدة، والذي يعتمد على نهج جديد تمامًا لاستعادة العضو التالف عن طريق تحفيز و (أو) استخدام الخلايا الجذعية (السلف) لتسريع عملية التجديد. لتنفيذ هذا النهج، من الضروري معرفة ما هي الخلايا الجذعية، وعلى وجه الخصوص، الخلايا الجذعية الإقليمية، وما هو نمطها الظاهري وفعاليتها. بالنسبة لعدد من الأنسجة والأعضاء، مثل البشرة والعضلات الهيكلية، تم بالفعل تحديد الخلايا الجذعية ووصف بيئاتها. ومع ذلك، فإن الكبد، وهو العضو الذي عرفت قدراته التجددية منذ العصور القديمة، لم يكشف بعد عن سره الرئيسي - سر الخلايا الجذعية. في هذه المراجعة، استنادًا إلى بياناتنا وبيانات الأدبيات الخاصة بنا، نناقش الفرضية القائلة بأن الخلايا النجمية المحيطة بالجيبات يمكن أن تدعي دور الخلايا الجذعية الكبدية.

تعد خلايا الكبد المحيطة بالجيبين (خلايا إيتو، والخلايا النجمية، والخلايا الشحمية، والخلايا التي تخزن الدهون، والخلايا التي تخزن فيتامين أ) واحدة من أكثر أنواع خلايا الكبد غموضًا. يعود تاريخ دراسة هذه الخلايا إلى أكثر من 130 عامًا، ولا يزال هناك العديد من الأسئلة المتعلقة بنمطها الظاهري ووظائفها أكثر من الإجابات. تم وصف الخلايا في عام 1876 من قبل كوبفر، الذي أطلق عليها اسم الخلايا النجمية وصنفها على أنها بلاعمية. في وقت لاحق، تلقت البلاعم الحقيقية المستقرة في الكبد اسم كوبفر.

من المقبول عمومًا أن خلايا إيتو تقع في مساحة ديس على اتصال مباشر مع خلايا الكبد، وتتراكم فيتامين أ وتكون قادرة على إنتاج جزيئات كبيرة من مادة بين الخلايا، وأيضًا، لها نشاط مقلص، وتنظم تدفق الدم في الشعيرات الدموية الجيبية مثل الخلايا الحوطية. المعيار الذهبي لتحديد خلايا إيتو في الحيوانات هو تحديد بروتين الخيوط الوسيطة للهيكل الخلوي المميز للأنسجة العضلية، ديسمين. العلامات الأخرى الشائعة إلى حد ما لهذه الخلايا هي علامات تمايز الخلايا العصبية - بروتين حمض الليفي الدبقي (GFAP) والنيستين.

لسنوات عديدة، تم النظر إلى خلايا إيتو فقط من حيث مشاركتها في تطور تليف وتليف الكبد. ويرجع ذلك إلى حقيقة أنه عند تلف الكبد، يحدث تنشيط هذه الخلايا دائمًا، والذي يتكون من زيادة التعبير عن الديسمين والتكاثر والتمايز إلى تحول الخلايا الشبيهة بالخلايا الليفية العضلية معبرًا عن الأكتين العضلي الملساء (-SMA) والتوليف. كميات كبيرة من المادة بين الخلايا، وخاصة النوع الأول من الكولاجين. إن نشاط خلايا إيتو المنشَّطة هو الذي يؤدي، وفقًا للعديد من الباحثين، إلى تطور تليف الكبد وتليف الكبد.

من ناحية أخرى، تتراكم الحقائق تدريجيًا مما يسمح لنا بالنظر إلى خلايا إيتو من مواقع غير متوقعة تمامًا، أي باعتبارها العنصر الأكثر أهمية في البيئة الدقيقة لتطور خلايا الكبد والخلايا الصفراوية وخلايا الدم خلال المرحلة الكبدية لتكوين الدم، و علاوة على ذلك، الخلايا الجذعية المحتملة (الخلايا السلفية للكبد. الغرض من هذه المراجعة هو تحليل البيانات والآراء الحديثة حول طبيعة هذه الخلايا وأهميتها الوظيفية مع تقييم عضويتها المحتملة في مجموعة الخلايا الجذعية الكبدية (السلف).

تعد خلايا إيتو أهم مشارك في استعادة الحمة أثناء تجديد الكبد بسبب الجزيئات الكبيرة في المصفوفة بين الخلايا التي تنتجها وإعادة تشكيلها، فضلاً عن إنتاج عوامل النمو. نشأت الشكوك الأولى حول صحة النظرية الراسخة، التي تعتبر خلايا إيتو حصريًا هي السبب الرئيسي لتليف الكبد، عندما تبين أن هذه الخلايا تنتج عددًا كبيرًا من السيتوكينات المورفوجينية. من بينها، مجموعة كبيرة تتكون من السيتوكينات، والتي هي مسببات محتملة لخلايا الكبد.

الأهم في هذه المجموعة هو عامل نمو خلايا الكبد - ميتوجين الخلايا الكبدية، الضروري للتكاثر والبقاء وحركة الخلايا (المعروف أيضًا باسم عامل التشتت. يؤدي وجود خلل في عامل النمو هذا و (أو) مستقبله C-met في الفئران إلى نقص تنسج الكبد وتدمير حمته نتيجة لقمع تكاثر الخلايا الكبدية وزيادة موت الخلايا المبرمج وعدم كفاية التصاق الخلايا.

بالإضافة إلى عامل نمو خلايا الكبد، تنتج خلايا إيتو عامل الخلايا الجذعية. وقد ظهر ذلك في نموذج تجديد الكبد بعد استئصال الكبد الجزئي والتعرض لـ 2-أسيتو أمينوفلورين. لقد ثبت أيضًا أن خلايا إيتو تفرز عامل النمو المتحول وعامل نمو البشرة، اللذين يلعبان دورًا مهمًا في تكاثر خلايا الكبد أثناء التجدد وتحفيز الانقسام الفتيلي لخلايا إيتو نفسها. يتم تحفيز تكاثر خلايا الكبد أيضًا عن طريق بروتين الإيبيمورفين الوسيط المتشكل بواسطة خلايا إيتو، والذي يظهر فيها بعد استئصال الكبد الجزئي، والبليوتروفين.

بالإضافة إلى آليات التفاعل بين خلايا الكبد وخلايا إيتو، فإن الاتصالات المباشرة بين الخلايا لهذه الخلايا مع خلايا الكبد تلعب أيضًا دورًا معينًا. تم توضيح أهمية الاتصالات بين الخلايا بين خلايا إيتو والخلايا السلفية الظهارية في المختبر عندما أثبتت الثقافة المختلطة أنها أكثر فعالية في تمييز الأخيرة إلى خلايا كبدية منتجة للألبومين مقارنة بثقافة الخلايا المفصولة بغشاء، حيث يمكنها فقط تبادل العوامل القابلة للذوبان من خلال الوسط الثقافي. معزولة عن كبد جنين الفئران في اليوم 13.5. أثناء الحمل، حفزت الخلايا الوسيطة مع النمط الظاهري Thy-1+/С049!±/vimentin+/desmin+/ --GMA+، بعد إنشاء اتصالات مباشرة بين الخلايا، تمايز مجموعة من خلايا الأديم الباطن الكبدية البدائية - إلى خلايا كبدية (تحتوي على الجليكوجين، معبرة عن m -أسماء ناقلات أمين التيروزين RNA وأكسجين التريبتوفان). لم يُظهر تعداد الخلايا الوسيطة Thy-1+/desmin+ علامات خلايا الكبد والخلايا البطانية وخلايا كوبفر، ويبدو أنه تم تمثيلها على وجه التحديد بواسطة خلايا إيتو. وقد لوحظت كثافات عالية لخلايا إيتو الإيجابية للديسمين وترتيبها على اتصال وثيق مع خلايا الكبد المتمايزة في الجسم الحي في كبد الجرذان والكبد البشري قبل الولادة. وهكذا، كل هذه الحقائق تسمح لنا أن نستنتج أن هذا النوع من الخلايا هو العنصر الأكثر أهمية في البيئة الدقيقة، وهو ضروري للتطور الطبيعي لخلايا الكبد في تكوين الجنين واستعادتها في عملية التجديد التعويضي.

في السنوات الأخيرة، تم الحصول على بيانات تشير إلى وجود تأثير كبير لخلايا إيتو على تمايز الخلايا الجذعية المكونة للدم. وبالتالي، تنتج خلايا إيتو الإريثروبويتين والتغذية العصبية، مما يؤثر على تمايز ليس فقط الخلايا الظهارية الكبدية، ولكن أيضًا الخلايا الجذعية المكونة للدم. أظهرت دراسة تكون الدم الجنيني في الجرذان والبشر أن هذه الخلايا هي التي تشكل البيئة الدقيقة للجزر المكونة للدم في الكبد. تعبر خلايا إيتو عن جزيء التصاق الخلايا الوعائية -1 (VCAM-1)، وهو جزيء رئيسي للحفاظ على التصاق أسلاف المكونة للدم بالخلايا اللحمية لنخاع العظم. بالإضافة إلى ذلك، فإنها تعبر أيضًا عن العامل المشتق من اللحمية -1 - (SDF-1 -) - وهو جاذب كيميائي محتمل للخلايا الجذعية المكونة للدم، مما يحفز هجرتها إلى موقع تكون الدم بسبب التفاعل مع المستقبل المحدد Cystein-X- Cystein receptor 4 ( CXR4)، بالإضافة إلى بروتين الهوموبوكس Hlx، إذا كان معيبًا، فسيتم تعطيل نمو الكبد نفسه وتكوين الدم الكبدي. على الأرجح، فإن تعبير VCAM-1 وSDF-1a على خلايا إيتو الجنينية هو الذي يسبب جذب الخلايا السلفية المكونة للدم إلى كبد الجنين لمزيد من التمايز. تعتبر الرتينوئيدات المتراكمة بواسطة خلايا إيتو أيضًا عاملاً مهمًا في تكوين الخلايا المكونة للدم والظهارة. لا يسع المرء إلا أن يذكر تأثير خلايا إيتو على الخلايا الجذعية الوسيطة. تقوم خلايا إيتو، المعزولة من كبد الفئران والمنشطة بالكامل، بتعديل تمايز الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم (الخلايا اللحمية الوسيطة متعددة القدرات) إلى خلايا شبيهة بخلايا الكبد (تراكم الجليكوجين والتعبير عن الثيتاز وفوسفونول بيروفيت كربوكسي كيناز) بعد أسبوعين. الزراعة المشتركة.

وهكذا فإن الأدلة العلمية المتراكمة تسمح لنا باستنتاج أن خلايا إيتو هي من أهم أنواع الخلايا الضرورية لتطور وتجديد الكبد. هذه الخلايا هي التي تخلق البيئة الدقيقة لكل من تكون الدم الكبدي الجنيني والتمايز بين خلايا الكبد أثناء التطور قبل الولادة، وكذلك للتمايز بين الخلايا السلفية الظهارية واللحمة المتوسطة إلى خلايا كبدية في المختبر. حاليًا، هذه البيانات لا شك فيها ومقبولة من قبل جميع الباحثين في الكبد. ما الذي كان إذن بمثابة نقطة البداية لظهور الفرضية المطروحة في عنوان المقال؟

بادئ ذي بدء، تم تسهيل ظهوره من خلال تحديد الخلايا الكبدية التي تعبر عن كل من العلامات الظهارية لخلايا الكبد والعلامات الوسيطة لخلايا إيتو. تم تنفيذ أول عمل في هذا المجال من خلال دراسة تكوين الأنسجة والأعضاء قبل الولادة في كبد الثدييات. إن عملية التطوير هي الحدث الرئيسي، الذي تتيح دراسته في الظروف الطبيعية تتبع ديناميكيات التكوين الأولي للنمط الظاهري النهائي لأنواع مختلفة من خلايا العضو باستخدام علامات محددة. حاليًا، نطاق هذه العلامات واسع جدًا. في الأعمال المخصصة لدراسة هذه المشكلة، تم استخدام علامات مختلفة للخلايا الوسيطة والخلايا الظهارية، ومجموعات الخلايا الفردية في الكبد، والخلايا الجذعية (بما في ذلك الخلايا المكونة للدم).

في الدراسات التي أجريت، وجد أن خلايا إيتو إيجابية الإزالة لأجنة الفئران بشكل عابر في الأيام 14-15. يُظهر الحمل علامات ظهارية مميزة لخلايا الكبد، مثل السيتوكيراتينات 8 و18. من ناحية أخرى، فإن الخلايا الكبدية في نفس وقت التطور تعبر عن علامة علامة خلية إيتو. هذا ما سمح لنا بافتراض أنه في الكبد أثناء التطور داخل الرحم توجد خلايا ذات نمط ظاهري انتقالي تعبر عن كل من العلامات الوسيطة والظهارية، وبالتالي، النظر في إمكانية تطور خلايا إيتو وخلايا الكبد من مصدر واحد و (أو) اعتبار هذه الخلايا كنوع واحد من الخلايا في مراحل مختلفة من التطور. وأظهرت دراسات أخرى للتكوين النسيجي أجريت على مادة الكبد الجنينية البشرية أنه عند 4-8 أسابيع. التطور داخل الرحم للكبد البشري، أعربت خلايا إيتو عن السيتوكيراتينات 18 و19، وهو ما تم تأكيده من خلال تلطيخ كيميائي مناعي مزدوج، ولوحظ تلطيخ إيجابي ضعيف للديسمين في خلايا الكبد.

ومع ذلك، في دراسة نشرت في عام 2000، لم يتمكن المؤلفون من اكتشاف تعبير الديسمين في خلايا الكبد في كبد أجنة الفئران، وE-cadherin وcytokeratins في خلايا Ito. حصل الباحثون على صبغة إيجابية للسيتوكيراتينات في خلايا إيتو فقط في نسبة صغيرة من الحالات، والتي ربطوها بتفاعل متقاطع غير محدد للأجسام المضادة الأولية. يعد اختيار هذه الأجسام المضادة محيرًا إلى حد ما - فقد تم استخدام الأجسام المضادة لديسمين الدجاج وسيتوكيراتينات الأبقار 8 و18 في العمل.

بالإضافة إلى الديزمين والسيتوكيراتينات، فإن العلامة الشائعة لخلايا إيتو وخلايا الكبد الجنينية لدى الفئران والجرذان هي علامة وسيطة أخرى - جزيء التصاق الخلايا الوعائية VCAM-1. VCAM-1 هو علامة سطحية فريدة تميز خلايا إيتو عن الخلايا الليفية العضلية في كبد الفئران البالغة، كما أنها موجودة أيضًا في العديد من خلايا الكبد الأخرى ذات الأصل الوسيط، مثل الخلايا البطانية أو الخلايا العضلية.

دليل آخر لصالح الفرضية قيد النظر هو إمكانية تحويل (تحويل) الظهارة الوسيطة لخلايا إيتو المعزولة من كبد الفئران البالغة. تجدر الإشارة إلى أن الأدبيات تناقش بشكل رئيسي التمايز الظهاري الوسيطي بدلاً من التمايز الظهاري الوسيطي الظهاري، على الرغم من التعرف على كلا الاتجاهين قدر الإمكان، وغالبًا ما يستخدم مصطلح "التمايز الظهاري الوسيطي" نفسه للإشارة إلى التمايز المتبادل في أي من الاتجاهين. بعد تحليل ملف تعريف m-RNA والبروتينات المقابلة في خلايا إيتو المعزولة من كبد الفئران البالغة بعد التعرض لرابع كلوريد الكربون (CTC)، وجد الباحثون علامات اللحمة المتوسطة والظهارية فيها. من بين العلامات الوسيطة، تم تحديد نيستين، -GMA، ومصفوفة ميتالوبروتيناز-2 (MMP-2)، ومن بين العلامات الظهارية، تم تحديد بيروفات كيناز العضلات (MPK)، وهو سمة من الخلايا البيضاوية، السيتوكيراتين 19، α-FP، E. -الكادهيرين، بالإضافة إلى عامل النسخ العامل النووي للخلايا الكبدية 4- (HNF-4-)، المخصص للخلايا التي من المقرر أن تصبح خلايا كبدية. وقد وجد أيضًا أنه في الثقافة الأولية للخلايا الكبدية السلفية الظهارية البشرية، يحدث تعبير m-RNA لعلامات خلايا إيتو - نيستين، GFAP - تشترك السلفيات الظهارية في التعبير عن كل من العلامات الظهارية واللحمة المتوسطة. يتم تأكيد إمكانية التمايز الوسيط-الظهاري من خلال ظهور كيناز مرتبط بالإنتجرين (ILK) في خلايا إيتو، وهو إنزيم ضروري لمثل هذا التمايز.

تم الكشف أيضًا عن تمايز التمايز الوسيطي الظهاري في تجاربنا في المختبر، حيث تم اتباع نهج أصلي لزراعة مجموعة نقية من خلايا إيتو المعزولة من كبد الفئران حتى يتم تشكيل طبقة أحادية كثيفة من الخلايا. بعد ذلك، توقفت الخلايا عن التعبير عن الديسمين والعلامات الوسيطة الأخرى، واكتسبت شكل الخلايا الظهارية وبدأت في التعبير عن العلامات المميزة لخلايا الكبد، ولا سيما السيتوكيراتينات 8 و18. تم الحصول على نتائج مماثلة خلال زراعة النمط العضوي لكبد جنين الفئران.

خلال العام الماضي، تم نشر ورقتين بحثيتين تعتبران خلايا إيتو نوعًا فرعيًا من الخلايا البيضاوية، أو مشتقاتها. الخلايا البيضاوية هي خلايا صغيرة بيضاوية الشكل ذات حافة ضيقة من السيتوبلازم تظهر في الكبد في بعض نماذج إصابات الكبد السامة وتعتبر حاليًا خلايا سلفية ثنائية القدرة قادرة على التمايز إلى كل من خلايا الكبد والخلايا الصفراوية. واستنادا إلى حقيقة أن الجينات التي تعبر عنها خلايا إيتو المعزولة تتطابق مع الجينات التي تعبر عنها الخلايا البيضاوية، وفي ظل ظروف استزراع معينة لخلايا إيتو، تظهر خلايا الكبد وخلايا القناة الصفراوية، اختبر الباحثون الفرضية القائلة بأن خلايا إيتو هي نوع من الخلايا البيضاوية القادرة على توليد خلايا الكبد لتجديد الكبد التالف. تم تغذية الفئران المعدلة وراثيا GFAP-Cre / GFP (بروتين الفلورسنت الأخضر) بنظام غذائي غني بالميثيونين والكولين / غني بالإيثيونين لتنشيط خلايا إيتو والخلايا البيضاوية. كان لخلايا إيتو الهادئة النمط الظاهري GFAP +. بعد تنشيط خلايا إيتو عن طريق الإصابة أو المزرعة، انخفض تعبير GFAP الخاص بها وبدأت في التعبير عن علامات الخلايا البيضاوية والخلايا الوسيطة. اختفت الخلايا البيضاوية مع ظهور خلايا الكبد GFP+، وبدأت في التعبير عن الألبومين وفي النهاية استبدال مساحات كبيرة من حمة الكبد. بناءً على النتائج التي توصلوا إليها، افترض الباحثون أن خلايا إيتو هي نوع فرعي من الخلايا البيضاوية التي تتمايز إلى خلايا كبدية من خلال مرحلة "اللحمة المتوسطة".

في التجارب التي أجريت على نفس نموذج تنشيط الخلايا البيضاوية، عندما تم عزل الأخيرة من كبد الفئران، وجد أن الخلايا البيضاوية في المختبر لا تعبر فقط عن العلامات التقليدية 0V-6، BD-1/BD-2 و M2RK وأشجار علامات المصفوفة خارج الخلية، بما في ذلك الكولاجين والبروتينات المعدنية المصفوفية ومثبطات الأنسجة للبروتينات المعدنية - السمات المميزة لخلايا إيتو. بعد تعرض الخلايا لـ TGF-pl، بالإضافة إلى قمع النمو والتغيرات المورفولوجية، زيادة في التعبير عن هذه الجينات، وكذلك جينات desmin وGFAP، ظهور التعبير عن عامل النسخ Snail، المسؤول عن الخلايا الظهارية. ولوحظ تمايز التمايز الوسيطي ووقف التعبير عن E-cadherin، مما يشير إلى إمكانية التمايز العكسي للخلايا البيضاوية إلى خلايا إيتو.

نظرًا لأن الخلايا البيضاوية تعتبر تقليديًا سلائف ثنائية القدرة لكل من خلايا الكبد والخلايا الصفراوية، فقد بذلت محاولات لإثبات إمكانية وجود أشكال انتقالية بين الخلايا الظهارية للقنوات الصفراوية داخل الكبد وخلايا إيتو. وهكذا، فقد تبين أنه في الكبد الطبيعي والتالف، تم صبغ الهياكل الصغيرة من النوع الأقنوي بشكل إيجابي لعلامة خلية إيتو - GMA، ومع ذلك، في الصور المعروضة في المقالة، والتي تعكس نتائج تلطيخ الفلورسنت المناعي، من الممكن تحديد ما هي هذه - GMA + الهياكل الأقنوية - القنوات الصفراوية أو الأوعية الدموية - غير ممكنة. ومع ذلك، فقد تم نشر نتائج أخرى تشير إلى ظهور علامات خلايا إيتو في الخلايا الصفراوية. في العمل الذي سبق ذكره بواسطة L. Yang، تم عرض التعبير عن علامة خلية Ito GFAP بواسطة خلايا القناة الصفراوية. ظهر سينمين البروتين الخيطي الوسيط للهيكل الخلوي، الموجود في الكبد الطبيعي في خلايا إيتو وخلايا الأوعية الدموية، في خلايا القناة المشاركة أثناء تطور التفاعل القناةي؛ تم التعبير عنه أيضًا في خلايا سرطان القنوات الصفراوية. وبالتالي، إذا كان هناك الكثير من الأدلة المختلفة فيما يتعلق بإمكانية التمايز المتبادل لخلايا إيتو وخلايا الكبد، فإن هذه الملاحظات مع الخلايا الصفراوية لا تزال متفرقة وليست دائمًا لا لبس فيها.

لتلخيص ذلك، يمكننا القول أن أنماط التعبير عن الواسمات الوسيطة والظهارية أثناء تكوين الأنسجة والأعضاء في الكبد، وفي مجموعة متنوعة من الظروف التجريبية، سواء في الجسم الحي أو في المختبر، تشير إلى إمكانية ظهور كل من الواسمات الوسيطة والظهارية. التحولات الصغيرة الظهارية-الوسيطة بين خلايا إيتو/الخلايا البيضاوية/خلايا الكبد، وبالتالي تسمح باعتبار خلايا إيتو أحد مصادر تطور خلايا الكبد. تشير الحقائق المذكورة أعلاه بلا شك إلى وجود علاقة لا تنفصم بين هذه الأنواع من الخلايا، وتشير أيضًا إلى اللدونة المظهرية الكبيرة لخلايا إيتو. تتجلى اللدونة الهائلة لهذه الخلايا أيضًا من خلال تعبيرها عن عدد من البروتينات العصبية، مثل GFAP المذكورة سابقًا، وnestin، والبروتينات العصبية ومستقبلاتها، وجزيء التصاق الخلايا العصبية (N-CAM)، والسينبتوفيسين، وعامل النمو العصبي. عامل، NGF)، عامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ (BDNF)، والذي على أساسه يناقش عدد من المؤلفين إمكانية تطور خلايا إيتو من القمة العصبية. ومع ذلك، على مدى العقد الماضي، جذبت نسخة أخرى اهتماما هائلا من الباحثين - وهي إمكانية تطوير خلايا الكبد وخلايا إيتو من الخلايا الجذعية المكونة للدم والخلايا الوسيطة.

تم نشر العمل الأول الذي تم فيه إثبات هذا الاحتمال بواسطة V.E. بيترسن وآخرون، الذين أظهروا أن خلايا الكبد قادرة على التطور من الخلايا الجذعية المكونة للدم. بعد ذلك، تم تأكيد هذه الحقيقة مرارا وتكرارا في أعمال علماء آخرين، وبعد ذلك بقليل تم عرض إمكانية التمايز إلى خلايا الكبد للخلايا الجذعية الوسيطة. كيف يحدث هذا - عن طريق دمج الخلايا المانحة مع خلايا الكبد المتلقية، أو عن طريق تمايزها - لا يزال غير واضح. ومع ذلك، فقد وجدنا أيضًا أن الخلايا الجذعية المكونة للدم من دم الحبل السري البشري، عند زرعها في طحال فئران استئصال الكبد الجزئي، تستعمر الكبد وتكون قادرة على التمايز إلى خلايا كبدية وخلايا جيبية كبدية، كما يتضح من وجود علامات الخلايا البشرية في هذه الخلايا أنواع. بالإضافة إلى ذلك، كنا أول من أظهر أن التعديل الوراثي الأولي لخلايا دم الحبل السري ليس له تأثير كبير على قدرات توزيعها وتمايزها في كبد المتلقي بعد عملية الزرع. أما بالنسبة لإمكانية تطور خلايا الكبد من الخلايا الجذعية المكونة للدم أثناء تكوين الأنسجة قبل الولادة، على الرغم من أنه لا يمكن استبعاد هذا الاحتمال تمامًا، إلا أنه يبدو غير مرجح، نظرًا لأن شكل هذه الخلايا وتوطينها ونمطها الظاهري يختلف بشكل كبير عن المؤشرات المماثلة لخلايا الكبد. على ما يبدو، إذا كان هذا المسار موجودا، فإنه لا يلعب دورا هاما في تكوين الخلايا الظهارية والجيوب الأنفية أثناء التطور. ألقت نتائج الدراسات الحديثة، التي أجريت في الجسم الحي وفي المختبر، بظلال من الشك على النظرية الراسخة المتمثلة في تطور خلايا الكبد فقط من ظهارة الأديم الباطن في المعى الأمامي، وبالتالي نشأ الافتراض بشكل طبيعي بأن الخلايا الجذعية الإقليمية للكبد قد تكون تكون موجودة بين خلاياها الوسيطة. هل يمكن أن تكون هذه الخلايا خلايا إيتو؟

وبالنظر إلى الخصائص الفريدة لهذه الخلايا، ولدونتها الهائلة، ووجود خلايا ذات نمط ظاهري انتقالي من خلايا إيتو إلى خلايا الكبد، فإننا نفترض أن هذه الخلايا هي المرشحة الرئيسية لهذا الدور. الحجج الإضافية لصالح هذا الاحتمال هي أن هذه الخلايا، مثل خلايا الكبد، يمكن تشكيلها من الخلايا الجذعية المكونة للدم، وهي الخلايا الجيبية الوحيدة في الكبد القادرة على التعبير عن علامات الخلايا الجذعية (السلف).

في عام 2004، تم تحديد أن خلايا إيتو يمكن أن تتطور أيضًا من الخلايا الجذعية المكونة للدم. بعد زرع خلايا نخاع العظم من فئران GFP، ظهرت خلايا GFP + التي تعبر عن علامة خلية Ito GFAP في كبد الفئران المتلقية، وتغلغلت عمليات هذه الخلايا بين خلايا الكبد. إذا تعرض كبد المتلقي للتلف بسبب CCU، فإن الخلايا المزروعة تعبر أيضًا عن خلايا شبيهة بانفجار إيتو. عندما تم عزل جزء من الخلايا غير المتني من كبد الفئران المتلقية، شكلت خلايا GFP + ذات قطرات الدهون 33.4 + 2.3٪ من الخلايا المعزولة؛ أعربوا عن desmin وGFAP، وبعد 7 أيام. زراعة

من ناحية أخرى، فإن زرع خلايا نخاع العظم لا يؤدي إلى تكوين خلايا إيتو فحسب، بل يؤدي أيضًا إلى تكوين جين الكولاجين من النوع الأول، والذي على أساسه تم استنتاج أن مثل هذا الزرع يساهم في تطور التليف. ومع ذلك، هناك أيضًا أعمال أثبتت انخفاضًا في تليف الكبد بسبب هجرة الخلايا المزروعة إلى الحواجز الليفية وإنتاج المصفوفة ميتالوبروتيناز-9 (Matrix Metalloproteinase-9, MMP-9) بواسطة هذه الخلايا، والتي تعد واحدة من أهم خصائص خلايا إيتو. أظهرت بياناتنا الأولية أيضًا انخفاضًا في عدد الخلايا الليفية العضلية وانخفاضًا في مستوى التليف بعد الزرع الذاتي لجزء من خلايا الدم وحيدة النواة المحيطية في المرضى الذين يعانون من التهاب الكبد المزمن مع تليف الكبد الحاد. بالإضافة إلى ذلك، نتيجة لزراعة الخلايا الجذعية المكونة للدم، قد تظهر أنواع خلايا أخرى قادرة على إنتاج مصفوفة خارج الخلية في كبد المتلقي. وهكذا، في إصابة الكبد الناجمة عن ربط القناة الصفراوية، تكون الخلايا المزروعة عبارة عن خلايا ليفية متمايزة تعبر عن الكولاجين، وفقط عندما يتم زراعتها في وجود TGF-pl تكون خلايا ليفية عضلية متمايزة، مما قد يؤدي إلى تعزيز التليف. وهكذا، ربط الباحثون خطر تليف الكبد بعد زرع خلايا نخاع العظم ليس بخلايا إيتو، بل بـ "مجموعة فريدة من الخلايا الليفية". بسبب عدم تناسق البيانات التي تم الحصول عليها، نشأت مناقشة حول مسألة أخرى - ما إذا كانت خلايا إيتو، التي ظهرت نتيجة تمايز الخلايا الجذعية المكونة للدم المزروعة، ستساهم في تطور التليف، أم أنها ستضمن التجديد الكامل لأنسجة الكبد والحد من التليف. في السنوات الأخيرة، أصبح من الواضح (بما في ذلك البيانات المذكورة أعلاه) أن أصل الخلايا الليفية العضلية في الكبد يمكن أن يكون مختلفًا - عن خلايا إيتو، وعن الخلايا الليفية في المسالك البابية، وحتى عن خلايا الكبد. لقد ثبت أيضًا أن الخلايا الليفية العضلية ذات الأصول المختلفة تختلف في عدد من الخصائص. وبالتالي، تختلف خلايا إيتو المنشطة عن الخلايا الليفية العضلية في القناة البابية في محتوى الفيتامينات، والنشاط الانقباضي، والاستجابة للسيتوكينات، وخاصة TGF-p، والقدرة على الخضوع لموت الخلايا المبرمج التلقائي. بالإضافة إلى ذلك، فإن مجموعات الخلايا هذه متميزة وقد تعبر عن جزيء التصاق الخلايا الوعائية VCAM-1، الموجود في خلايا إيتو والغائب عن الخلايا الليفية العضلية. تجدر الإشارة أيضًا إلى أنه بالإضافة إلى إنتاج بروتينات المصفوفة بين الخلايا، فإن خلايا إيتو المنشَّطة تنتج أيضًا بروتينات المصفوفة المعدنية، التي تدمر هذه المصفوفة. وبالتالي، فإن دور خلايا إيتو، بما في ذلك تلك المتكونة من الخلايا الجذعية المكونة للدم، في تطور التليف ليس واضحًا كما كان يُعتقد سابقًا. ومن الواضح أنها لا تعزز التليف بقدر ما تعيد تشكيل المصفوفة بين الخلايا أثناء عملية ترميم الكبد بعد التلف، وبالتالي توفر إطارًا للنسيج الضام لتجديد خلايا الكبد المتني.

كبد الفئران الطبيعي والتالف. تعبر خلايا الجرذ إيتو أيضًا عن علامة أخرى للخلايا الجذعية (السلفية) - CD133، وتظهر خصائص الخلايا السلفية القادرة، اعتمادًا على الظروف، على التمايز في مختلف - 2) مع إضافة السيتوكينات التي تسهل التمايز إلى خلايا بطانية، وتشكل الهياكل الأنبوبية المتفرعة مع تحريض الخلايا البطانية التعبيرية - سينثاز NO البطانية والكادهيرين البطاني الوعائي ؛ 3) عند استخدام السيتوكينات التي تعزز تمايز الخلايا الجذعية إلى خلايا الكبد - إلى خلايا مستديرة تعبر عن علامات خلايا الكبد - FP والألبومين. تعبر خلايا الجرذ إيتو أيضًا عن 0ct4، وهي إحدى سمات الخلايا الجذعية متعددة القدرات. ومن المثير للاهتمام، أنه يمكن عزل جزء فقط من مجموعة خلايا Ito بواسطة فارز مغناطيسي باستخدام أجسام مضادة لـ CD133، ولكن بعد العزل القياسي (pronase/collagenase)، أعربت جميع الخلايا الملتصقة بالبلاستيك عن CD133 و0kt4. يتم التعبير عن علامة أخرى للخلايا السلفية، Bcl-2، بواسطة خلايا desmin+ أثناء تطور الكبد البشري قبل الولادة.

وهكذا، أظهر العديد من الباحثين إمكانية تعبير خلايا إيتو عن علامات معينة للخلايا الجذعية (السلف). علاوة على ذلك، نُشر مؤخرًا مقال تم فيه طرح الفرضية لأول مرة بأن مساحة Disse، التي تتكون من بروتينات الغشاء القاعدي والخلايا البطانية وخلايا الكبد، والتي توجد فيها خلايا إيتو، قد تشكل بيئة دقيقة لهذه الأخيرة، وتعمل بمثابة " المتخصصة" من الخلايا الجذعية. الخلايا. ويتجلى ذلك من خلال العديد من الميزات المميزة لمكانة خلية الطاولة والتي تم تحديدها في مكونات البيئة الدقيقة لخلايا إيتو. وبالتالي، فإن الخلايا الموجودة على مقربة من الخلية الجذعية يجب أن تنتج عوامل قابلة للذوبان، بالإضافة إلى إجراء تفاعلات مباشرة تحافظ على الخلية الجذعية في حالة غير متمايزة وتحبسها في مكان مناسب، غالبًا ما يكون موجودًا على الغشاء القاعدي. في الواقع، تقوم الخلايا البطانية للشعيرات الجيبية الكبدية بتصنيع SDF-1 القابل للذوبان، والذي يرتبط بشكل خاص بمستقبل خلية إيتو CXR4 ويحفز هجرة هذه الخلايا في المختبر. يلعب هذا التفاعل دورًا رئيسيًا في هجرة الخلايا الجذعية المكونة للدم إلى مكانها النهائي في نخاع العظم أثناء تكوينها وإقامتها الدائمة هناك، وكذلك في تعبئتها في الدم المحيطي. ومن المنطقي أن نفترض أن مثل هذا التفاعل يمكن أن يلعب دورا مماثلا في الكبد، مع الحفاظ على خلايا إيتو في مساحة ديس. خلال المراحل المبكرة من تجديد الكبد، قد يساهم التعبير المتزايد عن SDF-1 أيضًا في توظيف أجزاء إضافية من الخلايا الجذعية في الجسم. يجب أن يشمل تعصيب الخلايا المتخصصة الجهاز العصبي الودي، الذي يشارك في تنظيم تجنيد الخلايا الجذعية المكونة للدم. تلعب الإشارات النورأدرينالية الصادرة عن الجهاز العصبي الودي دورًا حاسمًا في GCSF (تعبئة الخلايا الجذعية المكونة للدم من نخاع العظام عن طريق تحفيز مستعمرة المحببات. وقد تم تأكيد موقع النهايات العصبية على مقربة من خلايا إيتو في العديد من الدراسات. كما وجد أيضًا أنه استجابة للتحفيز الودي، تفرز خلايا إيتو البروستاجلاندين F2a وD، والتي تنشط تحلل الجليكوجين في الخلايا المتني القريبة. تشير هذه الحقائق إلى أن الجهاز العصبي الودي قد يكون له تأثير على مكانة خلية إيتو. المتخصصة هي الحفاظ على دورة الخلية "البطيئة" وحالة غير متمايزة من خلايا الخلايا الجذعية. يتم تسهيل الحفاظ على الحالة غير المتمايزة لخلايا إيتو في المختبر عن طريق خلايا الكبد المتني - عند زراعة هاتين المجموعتين من الخلايا المفصولة بغشاء، تحتفظ خلايا إيتو بالتعبير عن علامات الخلايا الجذعية CD133 و0kt4، بينما في غياب خلايا الكبد، تكتسب خلايا إيتو النمط الظاهري للخلايا الليفية العضلية وتفقد علامات الخلايا الجذعية. وبالتالي، فمن الواضح أن التعبير عن علامات الخلايا الجذعية هو السمة المميزة لخلايا إيتو الهادئة. لقد ثبت أيضًا أن تأثير الخلايا المتني على خلايا إيتو قد يعتمد على تفاعل عوامل نظير الصماوي Wnt وJag1 التي يتم تصنيعها بواسطة خلايا الكبد مع المستقبلات المقابلة (Myc، Notchl) على سطح خلايا إيتو. تدعم مسارات إشارات Wnt/b-catenin وNotch قدرة الخلايا الجذعية على التجديد الذاتي من خلال الانقسام المتماثل البطيء دون تمايز لاحق. عنصر آخر مهم في هذا المكان هو بروتينات الغشاء القاعدي، اللامينين والكولاجين الرابع، التي تحافظ على الحالة الهادئة لخلايا إيتو وتثبط تمايزها. يحدث موقف مماثل في الألياف العضلية والأنابيب المنوية الملتوية، حيث تكون الخلايا الساتلة (الخلايا الجذعية العضلية) والحيوانات المنوية غير المتمايزة على اتصال وثيق مع الغشاء القاعدي للألياف العضلية أو "الظهارة المنوية" على التوالي. ومن الواضح أن تفاعل الخلايا الجذعية مع بروتينات المصفوفة خارج الخلية يمنع بدء تمايزها النهائي. وبالتالي، فإن البيانات التي تم الحصول عليها تجعل من الممكن اعتبار خلايا إيتو خلايا جذعية، والتي يمكن أن يكون مكانها مساحة Disse.

تم تأكيد بياناتنا حول الإمكانات الجذعية لخلايا إيتو وإمكانية تكوين خلايا الكبد من هذه الخلايا في التجارب التي تدرس تجديد الكبد في الجسم الحي باستخدام نماذج استئصال الكبد الجزئي وتلف الكبد السام بواسطة نترات الرصاص. يُعتقد تقليديًا أنه في هذه النماذج من تجديد الكبد لا يوجد تنشيط للمقصورة الجذعية ولا توجد خلايا بيضاوية. ومع ذلك، فقد تمكنا من إثبات أنه في كلتا الحالتين يمكن للمرء أن يلاحظ ليس فقط تنشيط خلايا إيتو، ولكن أيضًا التعبير فيها عن علامة خلية جذعية أخرى، وهي مستقبل مجموعة عامل الخلايا الجذعية C. نظرًا لأنه لوحظ أيضًا تعبير C-kit في خلايا الكبد المفردة (كان أقل كثافة فيها)، والذي يقع بشكل أساسي على اتصال مع خلايا Ito الإيجابية لـ C-kit، فيمكن الافتراض أن خلايا الكبد هذه تميزت عن خلايا C-kit + Ito. ومن الواضح أن هذا النوع من الخلايا لا يخلق الظروف اللازمة لاستعادة تعداد خلايا الكبد فحسب، بل يحتل أيضًا مكانًا مناسبًا للخلايا الجذعية الإقليمية للكبد.

وهكذا، فقد ثبت الآن أن خلايا إيتو تعبر عن خمس علامات للخلايا الجذعية على الأقل في ظل ظروف تنموية وتجديدية وثقافية مختلفة. تشير جميع البيانات المتراكمة حتى الآن إلى أن خلايا إيتو يمكن أن تعمل كخلايا جذعية إقليمية للكبد، كونها أحد مصادر تطور خلايا الكبد (وربما الخلايا الصفراوية)، كما أنها أهم عنصر في البيئة الدقيقة لتشكل الكبد وتكوينه. تكون الدم الكبدي. ومع ذلك، يبدو أنه من السابق لأوانه إلى حد ما استخلاص استنتاجات نهائية حول ما إذا كانت هذه الخلايا تنتمي إلى مجموعة الخلايا الجذعية الكبدية (السلف). ومع ذلك، هناك حاجة واضحة لأبحاث جديدة في هذا الاتجاه، والتي في حال نجاحها، ستفتح آفاقًا لتطوير طرق فعالة لعلاج أمراض الكبد تعتمد على زراعة الخلايا الجذعية.

للحصول على الاقتباس:كوريشيفا م. تليف الكبد: الماضي والحاضر والمستقبل // سرطان الثدي. 2010. رقم 28. ص 1713

تليف الكبد هو زيادة محلية أو منتشرة في كمية النسيج الضام، والمصفوفة خارج الخلية (النسيج الليفي الكولاجين في الفضاء المحيط بالجيبية) والمسار الرئيسي لتطور أمراض الكبد المنتشرة المزمنة. في المراحل المبكرة من التليف لا توجد مظاهر سريرية، والفحص النسيجي فقط لعينة الخزعة يكشف عن تراكم مفرط للنسيج الضام. في وقت لاحق، يؤدي التليف إلى تشكيل العقد المتجددة، مفاغرة الأوعية الدموية - تشكيل تليف الكبد. يعتبر تليف الكبد غير المتليف نادر الحدوث ولم يتم أخذه في الاعتبار في هذا العمل.

تمت دراسة عمليات التليف في الكبد لسنوات عديدة (الجدول 1)، ولكن فقط بعد اكتشاف دور الخلايا النجمية في عمليات التليف تم الحصول على فرص جديدة للعلاج المضاد للتليف.

التسبب في تليف الكبد
الخلايا الجيبية - البطانية، خلايا كوبفر، الخلايا النجمية (خلية إيتو، الخلية النجمية، خلية تخزين الريتينويد، الخلية الشحمية)، إلى جانب منطقة خلايا الكبد التي تواجه تجويف الجيوب الأنفية، تشكل وحدة وظيفية. بالإضافة إلى الخلايا، يوجد في المنطقة الجيوب الأنفية مصفوفة خارج الخلية (ECM)، مرئية فقط في أمراض الكبد. يمكن لجميع الخلايا التي تشكل الجيوب الأنفية أن تشارك في تكوين ECM. عادة، يكون هناك توازن بين عوامل التكوّن الليفي والعوامل المضادة للليف. تلعب خلايا إيتو الدور الرئيسي في التليف، والتي تنتج عوامل تليفية ومضادة للتليف. تشمل العوامل المضادة للليف البروتينات المعدنية المصفوفية (MMPs)، والتي تشارك في تدمير بروتينات ECM (الكولاجيناز، الجيلاتيناز، الستروموليسين). يتم قمع نشاط MMP بواسطة مثبطات الأنسجة للبروتينات المعدنية المصفوفة (TIMPs)، والتي تنتجها أيضًا خلايا إيتو.
عند تلف الكبد، يتم إطلاق مواد نشطة بيولوجيًا تعمل على تنشيط الخلايا البلعمية والبطانة الجيبية، وتطلق IL-1، وTNFα، وأكسيد النيتريك، والإندوثيلين، التي تعمل على خلايا إيتو. عند تنشيطها، تنتج الخلايا النجمية عامل تنشيط الصفائح الدموية PDGF وعامل النمو المحول TGFβ 1. وتحت تأثير TGFβ 1، تبدأ خلايا إيتو في تنشيط نفسها والهجرة إلى مناطق الالتهاب. هناك تغيير في النمط الظاهري لخلايا إيتو - فهي تتحول إلى خلايا ليفية عضلية، والتي تستمر في إنتاج TGFβ 1، وتبدأ في إنتاج ECM. يؤدي عدم التوازن بين العوامل الليفية والمضادة للليف إلى زيادة 3-10 أضعاف في مكونات ECM وتغيير في تركيبتها (غلبة أنواع الكولاجين الأول والثالث). إعادة توزيع المصفوفة في مساحة Disse، وتوسيعها، والشعيرات الدموية للجيوب الأنفية يرافقه اضطراب في التبادل بين خلايا الكبد والدم، وتحويل الدم بسبب تطور الفصيصات الكاذبة وتطور تليف الكبد. إذا توقف عمل الوسطاء الالتهابيين، تبدأ خلايا إيتو مرة أخرى في إنتاج مواد متليفة ويحدث انخفاض في مكونات ECM في مساحة Disse. وبالتالي، فإن التليف في المراحل المبكرة من التطور هو عملية قابلة للعكس.
يرتبط التسبب في تليف الكبد في التهاب الكبد الفيروسي المزمن بتحريض نشاط الخلايا الالتهابية بواسطة خلايا الكبد المصابة، مما يؤدي إلى تحفيز خلايا إيتو. في مرض الكبد الكحولي، يقوم الأسيتالديهيد والجذور الحرة للأكسجين بتنشيط خلايا إيتو. بالإضافة إلى ذلك، يعزز الإيثانول نمو البكتيريا سالبة الجرام في الأمعاء، مما يزيد من مستوى عديدات السكاريد الدهنية في الدم البابي وينشط خلايا كوبفر التي تنتج TNFα، والتي تعمل على خلايا إيتو. يرتبط التسبب في تليف الكبد في مرض الكبد الدهني غير الكحولي بارتفاع السكر في الدم ومقاومة الأنسولين، مما يؤدي إلى زيادة مستويات الأحماض الدهنية الحرة وتنكس دهني الكبد، وتؤدي الجذور الحرة والسيتوكينات المسببة للالتهابات إلى موت الخلايا المبرمج لخلايا الكبد وتنشيط الخلايا الالتهابية مع تطور مرض الكبد الدهني غير الكحولي. تليف الكبد. في تليف الكبد الصفراوي الأولي، تفرز الخلايا الصفراوية وسطاء ليفيين يقومون بتنشيط خلايا إيتو، مما يؤدي إلى تكوين الخلايا الليفية.

عكس تليف الكبد
لفترة طويلة، كان تليف الكبد يعتبر حالة مرضية لا رجعة فيها. ومع ذلك، قبل 50 عامًا، تم وصف حالات التطور العكسي للتليف بعد العلاج الفعال لداء ترسب الأصبغة الدموية ومرض ويلسون كونوفالوف، وبعد ذلك تم نشر بيانات بشكل متكرر حول التطور العكسي للتليف في التهاب الكبد المناعي الذاتي نتيجة للعلاج المثبط للمناعة، والقنوات الصفراوية الثانوية. تليف الكبد بعد الضغط الجراحي على القناة الصفراوية والتهاب الكبد الدهني غير الكحولي مع انخفاض في وزن الجسم والتهاب الكبد الكحولي أثناء الامتناع عن ممارسة الجنس.
وقد لوحظ عكس التليف مع الامتناع عن تناول الكحول على المدى الطويل، عندما تم اكتشاف انخفاض في محتوى النوع الرابع من الكولاجين واللامينين وحمض الهيالورونيك في جدران الجيوب الأنفية أثناء الخزعة وفي مصل الدم بعد 4-6 أسابيع. حدث تراجع في عملية "الشعيرات الدموية الجيبية". ولوحظت أيضًا تغييرات تعكس وظيفة خلايا إيتو - زيادة في مستوى MMP-2 وانخفاض في مستوى مثبطه TIMMP-2. في فترات زمنية معينة، لوحظ انخفاض في عدد اللييفات العضلية الأكتينية في جدران الجيوب الأنفية، مما يشير إلى انخفاض في نشاط الخلايا النجمية إيتو وتحولها من تخليق المصفوفة خارج الخلية إلى تدهورها.
في الوقت نفسه، فقط مع إدخال العلاج المضاد للفيروسات في الممارسة السريرية، تم الاعتراف بمفهوم تليف الكبد، كعملية ديناميكية مع إمكانية التقدم والانحدار، كحقيقة مثبتة علميًا.
لقد أدى التقدم إلى فهم واضح بأن تليف الكبد قابل للشفاء وإلى توقعات واقعية بأن العلاج الفعال المضاد للتليف سيغير بشكل كبير إدارة المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد ويوفر تشخيصًا مناسبًا حتى في أولئك الذين يعانون من تليف الكبد.
تشخيص تليف الكبد
المعيار الذهبي لتشخيص تليف الكبد هو أخذ خزعة مع الفحص النسيجي. يتم إجراء التقييم النسيجي وفقًا لمقاييس ديسميت (1984) بصيغتها المعدلة بواسطة سيروف؛ مقياس JSHAK أو METAVIR. اعتمادا على الموقع وانتشاره، يتم تمييز الأشكال التالية من تليف الكبد: وريدي ومحيط الوريد (في وسط الفصيصات وجدران الأوردة المركزية - سمة من التهاب الكبد الكحولي المزمن)؛ حول الخلايا (حول خلايا الكبد في التهاب الكبد الفيروسي والكحولي المزمن) ؛ الحاجز (نمو متحد المركز للأنسجة الليفية حول القناة الصفراوية - في التهاب الكبد الفيروسي) ؛ البوابة والبوابة المحيطة (لالتهاب الكبد الفيروسي والكحولي والمناعة الذاتية) ؛ التليف حول القناة (حول القنوات الصفراوية في التهاب الأقنية الصفراوية المصلب) ؛ مختلط (يتم عرض أشكال مختلفة من التليف).
بسبب الغزو، والخطأ الكبير في الفحص النسيجي المرتبط بـ "أخطاء" الإبرة أثناء ثقب خزعة الكبد، والاختلافات في تفسير النتائج، للتشخيص المبكر للعمليات المرضية، يتم حاليًا إيلاء اهتمام كبير لعدم - الطرق الغازية لتشخيص التليف. وتشمل هذه الاختبارات المعملية النذير الحيوي؛ قياس مرونة الكبد وتصوير المرونة بالرنين المغناطيسي؛ الموجات فوق الصوتية، الأشعة المقطعية، التصوير بالرنين المغناطيسي للكبد، الموجات فوق الصوتية دوبلر لأوعية الكبد والطحال مع حساب مؤشرات التليف وارتفاع ضغط الدم البابي.
تنقسم علامات التليف إلى علامات مباشرة (علامات حيوية)، تعكس استقلاب ECM، وغير مباشرة، تشير إلى فشل الكبد. تشمل العلامات المباشرة الببتيد الكربوكسي الطرفي من النوع الأول من البروكولاجين، والببتيد الأميني الطرفي من النوع الثالث من البروكولاجين، وTIMP-1، 2، والكولاجين من النوع الرابع، وحمض الهيالورونيك، ولامينين، وMMP-2. يتم استخدام تحديد هذه المواد في الدراسات السريرية.
بالنسبة للممارسة السريرية، تم اقتراح العديد من المؤشرات النذير المحسوبة لتقييم شدة تليف الكبد باستخدام علامات غير مباشرة: APRI، ELF، FIB-4، FibroFast، FibroIndex، FibroMeter، FPI، Forns، GUCI، Hepascore، HALT-C، MDA، بغا، بغا.
لتقييم مدى خطورة تليف الكبد، يتم استخدام نظامي Fibro-test وActi-test، حيث يعتبران بديلاً للخزعة. يتضمن اختبار الألياف 5 مؤشرات كيميائية حيوية: ألفا 2-ماكروغلوبولين (ينشط خلايا إيتو)، هابتوغلوبين (يعكس تحفيز خلايا الكبد بواسطة الإنترلوكينات)، أبوليبوبروتين A1، ناقلة الببتيداز غاما غلوتاميل، البيليروبين الكلي. اختبار النشاط (يتم تقييم نشاط الالتهاب النخري الفيروسي) بالإضافة إلى المكونات المدرجة يشمل ألانين أمينوترانسفيراز - ALT. FibroMax هو مزيج من خمسة اختبارات غير جراحية: FibroTest وActiTest، وSteato-Test (لتشخيص تنكس الكبد الدهني)، وNeshTest (لتشخيص التهاب الكبد الدهني غير الكحولي)، وAshTest (لتشخيص التهاب الكبد الدهني الكحولي الشديد). يكتشف FibroMax ألفا 2-ماكروغلوبولين، هابتوغلوبين، أبوليبوبروتين A1، غاما غلوتاميل ترانسبيبتيداز، البيليروبين الكلي، ALT، AST، الجلوكوز، الدهون الثلاثية، الكوليسترول. وبناء على البيانات التي تم الحصول عليها، مع الأخذ بعين الاعتبار عمر وجنس المريض، يتم حساب مرحلة التليف ومستوى نشاط التهاب الكبد. يقتصر استخدام الاختبارات على علامات الركود الصفراوي، والتي تؤثر سلبًا على القيمة التشخيصية للاختبارات، وارتفاع تكلفة الدراسة.
إن تشغيل الجهاز، المعتمد على تصوير مرونة الكبد بالموجات فوق الصوتية عن طريق تمرير الموجات (الاهتزازات) عبر الكبد والتقاطها باستخدام جهاز استشعار، يسمح بتقييم درجة التليف في الكبد في المراحل المبكرة. الجهاز قليل المعلومات عن السمنة والاستسقاء.
يعد تصوير المرونة بالرنين المغناطيسي طريقة مباشرة لتحديد كثافة الكبد، مما يسمح بتحديد F0 مقارنة بالمتطوعين الأصحاء، وهو ما لم يتم إثباته بعد باستخدام طرق أخرى لتقييم التليف.
في المستقبل، من الممكن تحديد وجود ومعدل تطور التليف اعتمادًا على العامل المسبب للمرض. إن حل هذه المشكلات يجعل من الممكن تشخيص المراحل المبكرة من التليف وبالتالي علاجه بشكل فعال.

علاج
يرتبط العلاج المضاد للليف ارتباطًا وثيقًا بالعلاج المسبب للأمراض والمرضية لالتهاب الكبد المزمن (الجدول 2). في معظم الحالات، تكون الأدوية التي تستخدم للقضاء على العوامل المسببة لالتهاب الكبد هي أيضًا عوامل مضادة للتليف. تم اكتشاف تأثير مضاد للليف في الأدوية المضادة للفيروسات، البنتوكسيفيلين، فوسفاتيديل كولين، الجلايكورتيكويدويدات، الجهات المانحة لأكسيد النيتريك، فيتامين E، مضادات مستقبلات الإندوثيلين، مضادات مستقبلات الأنجيوتنسين، مثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين، سيليمارين. يجري البحث عن أدوية تمنع تكون الخلايا الليفية لاستخدامها في الحالات التي يكون فيها التأثير على العامل المسبب صعبًا: مضادات الأكسدة (البيتين، البروبوكول، N-أسيتيل سيستئين)، واقيات الكبد (سيليمارين، UDCA، S-أدينوسيل ميثيونين، الدهون الفوسفاتية الأساسية)، مما يقلل من نشاط عامل نخر الورم (البنتوكسيفيلين، أديبونيكتين، إينفليإكسيمب).
يجري البحث حاليًا عن أدوية ذات تأثيرات مضادة للليف مستهدفة:
- القضاء على العامل الضار (إنترلوكين 10، مثبطات TNF - تأثير مضاد للالتهابات، مضادات الأكسدة - قمع العمليات الليفية استجابة للإجهاد التأكسدي)؛
- قمع النشاط التوليفي للخلايا النجمية (الإنترفيرون، عامل نمو خلايا الكبد، منبهات PPARγ)؛
- الحفاظ على النشاط المضاد للليف النشط للخلايا النجمية (مضادات TGFβ 1 - تقليل تخليق المصفوفة وزيادة انهيارها؛ مضادات PDGF، وأكسيد النيتريك، ومثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين - تمنع تكاثر خلايا إيتو)؛
- التأثير على إفراز الكولاجين بواسطة الخلايا النجمية للكبد (مثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين، مثبطات بولي هيدروكسيلاز، الإنترفيرون γ - تقليل التليف؛ مضادات مستقبلات الإندوثيلين - تقليل التليف وارتفاع ضغط الدم البابي)؛
- التأثير على موت الخلايا المبرمج لخلايا إيتو (الهيلوتوكسين، NGF - عامل نمو الخلايا العصبية - تحفيز موت الخلايا المبرمج)؛
- زيادة انهيار مصفوفة الكولاجين (البروتينات المعدنية، مضادات MMP المثبطة للأنسجة؛ مضادات TGFβ 1 - تقليل نشاط TIMP وزيادة نشاط MMP؛ الاسترخاء - تقليل نشاط TIMP وزيادة نشاط MMP).
يبدو أن استخدام عقار سيليمارين (ليجالون) لأغراض مضادة للتليف واعد. سيليمارين هو الاسم الرسمي لمجموعة من أربعة أيزومرات فلافونوليجنان (سيليبينين، إيزوسيبينين، سيليكرستين وسيليديانين)، معزولة من مستخلصات ثمار شوك الحليب (Cardui mariae fructus) ومدرجة في Legalon 70 و 140 (جرعة سيليمارين).
خلال الدراسات السريرية، تم الكشف عن أنه إلى جانب التأثيرات المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة ومضادات السموم وخافضة شحميات الدم ومضادة للسرطان، فإن سيليمارين له تأثير مضاد للليف واضح. ويرجع ذلك إلى التأثيرات على تحويل عامل النمو والتعبير الجيني في خلايا إيتو، بالإضافة إلى زيادة إزالة الجذور الحرة والتثبيط المباشر لتخليق الكولاجين.
العلاقة بين الديناميكيات الدوائية للسيليمارين / السيليبينين والتأثير السريري لـ Legalon® موضحة في الجدول 3. تحدد آليات العمل المشار إليها القيمة العلاجية لـ Legalon® في أمراض الكبد المنتشرة. أظهرت العديد من الدراسات الفعالية العالية لـ Legalon® مع الاستخدام طويل الأمد في قمع التفاعل الالتهابي النخري في الكبد، مما يمنع تطور التليف ويقلل من خطر التحول الخبيث لخلايا الكبد في تليف الكبد.
في نموذج لتليف الكبد الكحولي في القرود، كشفت دراسة مورفولوجية للكبد ودراسة علامات التليف المصلية أن الحيوانات المعالجة بالسيليمارين كان لديها تطور تليف أقل بكثير وتليف الكبد أقل تطورًا في كثير من الأحيان.
تمت دراسة تأثير ليجالون على تليف الكبد لدى 792 مريضًا يعانون من أمراض الكبد المزمنة، بما في ذلك تليف الكبد. تم اختيار مؤشر P-III-NP كعلامة للتليف الليفي. وبلغ متوسط ​​فترة المراقبة 107 أيام. مع ارتفاع مستوى P-III-NP في البداية، بعد 3 أشهر من العلاج باستخدام Legalon، انخفض مستوى P-III-NP إلى المستوى الطبيعي.
أظهرت نتائج 5 دراسات دولية خاضعة للتحكم الوهمي (شارك فيها 600 مريض) أن معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 4 سنوات للمرضى الذين يعانون من تليف الكبد الكحولي أثناء تناول عقار ليجالون كان أعلى بشكل ملحوظ إحصائيًا مقارنة بمجموعة المرضى الذين يتلقون العلاج الوهمي. عند تحليل المجموعات الفرعية، تم الكشف عن أن العلاج باستخدام Legalon كان فعالاً في تليف الكبد الكحولي، بغض النظر عن شدته ومرحلة تليف الكبد، وفي المجموعة الفرعية مع تليف الكبد Chaid-Pugh المرحلة A، بغض النظر عن مسبباته. في المجموعة الفرعية من المرضى الذين يعانون من تليف الكبد الكحولي بسبب التهاب الكبد الفيروسي، لم يتم تسجيل أي وفيات خلال فترة المراقبة، بينما في مجموعة الدواء الوهمي كانت هناك 4 وفيات بسبب المعاوضة من تليف الكبد.
يُسمى التليف حاليًا حجر الزاوية في أمراض الكبد المزمنة. وهذا هو الذي يسبب تكوين تليف الكبد، لذا فإن التشخيص المبكر وعلاج التليف له أهمية كبيرة في الوقت الحاضر وهو مهمة للبحث العلمي في المستقبل.

الأدب
1. شيرلوك ش، دولي ج. أمراض الكبد والقنوات الصفراوية: دليل عملي. م: جيوتار-ميد، 2002. 864 ص.
2. باتالر ر.، برينر د. أ. تليف الكبد. جيه كلين. يستثمر. 2005; 115(2):209-218.
3. Iredale J. P. نماذج من تليف الكبد: استكشاف الطبيعة الديناميكية للالتهاب والإصلاح في العضو الصلب. جيه كلين. يستثمر. 2007; 117(3):539-548.
4. بارسونز سي جيه، تاكاشيما إم، ريب آر إيه. الآليات الجزيئية للتليف الكبدي. ي جاسترونتيرول هيباتول. 2007; 22(1):79-84.
5. ستوروزاكوف جي.إي.، إيفكوفا أ.ن. الجوانب المرضية للتليف في أمراض الكبد المزمنة. وتد. وجهات نظر حول أمراض الجهاز الهضمي والكبد 2009؛ 2: 3-10.
6. بافلوف سي إس، زولوتاريفسكي في بي، تومكيفيتش إم إس. احتمالات عكس تليف الكبد. روس. مجلة أمراض الجهاز الهضمي والكبد وطب القولون والمستقيم 2006؛ 1: 20-29.
7. سيفيروف إم. عكس تليف الكبد وتليف الكبد في الإصابة بفيروس التهاب الكبد الوبائي. منتدى أمراض الكبد 2008؛ 1: 2-6.
8. بافلوف سي إس، غلوشينكوف دي في، إيفاشكين في تي. الإمكانيات الحديثة لقياس المرونة والألياف واختبار النشاط في تشخيص تليف الكبد. روس. مجلة أمراض الجهاز الهضمي والكبد وأمراض القولون والمستقيم 2008؛ 4: 43-52.
9. روكي دي سي العلاج المضاد للليف في أمراض الكبد المزمنة كلين. جاستروينترول. هيباتول. 2005; 3: 95-107.
10. ديهملو سي، إيرهارد ج. أمراض الكبد 1996؛ 23: 749-754.
11. ليبر وآخرون. جاستروينترول. 2003; 37: 336-339.
12. شوبان، ز. ألج. ميد. 1998; 74:577-584.