Микробиологическая диагностика золотистого стафилококка. Микроскопия золотистого стафилококка. Выделение золотистого стафилококка. Коагулазный тест. Стафилококк и стафилококковые инфекции

Таксономия: относятся к от­делу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.

Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются не­симметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некото­рых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.

Культуральные свойства : Стафилококки - факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не име­ющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.

Стафилококки пластичны, быстро приобретают устой­чивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерми­нируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.

Антигенная структура . Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент оста­ется свободным и может соединяться со специфическим анти­геном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена повер­хностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков явля­ются лизогенными (образование некоторых токсинов происхо­дит с участием профага).

Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.

Резистентность. Устойчивость в окружа­ющей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.

Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или но­сители). Механизмы передачи - респираторный, контактно-бы­товой, алиментарный.

Иммунитет: П остинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.

Клиника. Около 120 клинических форм прояв­ления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гной­но-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглот­ки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (инток­сикации).

Микробиологическая диагностика . Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламут­ровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выде­ляют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионо­сителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указан­ного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а за­тем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно разме­ченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по нали­чию лизиса культуры.

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте(компонент клеточной стенки).

Лечение и профилактика . Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитокси­ческая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизи­рованный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином.

Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.

Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый : гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

56. Типы и механизмы питания бактерий.

Типы питания. Микроорганизмы нуждают­ся в углеводе, азоте, сере, фосфоре, калии и других элементах. В зависимости от источников углерода для питания бактерии делятся на аутотрофы , использующие для построения своих клеток диоксид углерода С0 2 и другие неорганические соединения, и гетеротрофы , питающиеся за счет готовых органических соединений. Аутотрофными бактериями являются нитрифицирующие бактерии, находящиеся в почве; серобактерии, обитающие в воде с сероводородом; железобак­терии, живущие в воде с закисным железом, и др.

В зависимости от окисляемого субстрата , называемого доно­ром электронов или водорода, микроорганизмы делят на две группы. Микроорганизмы, использующие в качестве доноров во­дорода неорганические соединения, называют литотрофными (от греч. lithos - камень), а микроорганизмы, использую­щие в качестве доноров водорода органические соединения, - органотрофами.

Учитывая источник энергии , среди бактерий различают фототрофы, т.е. фотосинтезирующие (например, сине-зеленые во­доросли, использующие энергию света), и хемотрофы, нуж­дающиеся в химических источниках энергии.

Механизмы питания. Поступление различных веществ в бак­териальную клетку зависит от величины и растворимости их мо­лекул в липидах или воде, рН среды, концентрации веществ, различных факторов проницаемости мембран и др. Клеточная стенка пропускает небольшие молекулы и ионы, задерживая мак­ромолекулы массой более 600 Д. Основным регулятором поступ­ления веществ в клетку является цитоплазматическая мембрана. Условно можно выделить четыре механизма проникновения пи­тательных веществ в бактериальную клетку : это простая диффу­зия, облегченная диффузия, активный транспорт, транслокация групп.

Наиболее простой механизм поступления веществ в клетку - простая диффузия , при которой перемещение веществ про­исходит вследствие разницы их концентрации по обе стороны цитоплазматической мембраны. Вещества проходят через липид-ную часть цитоплазматической мембраны (органические молеку­лы, лекарственные препараты) и реже по заполненным водой каналам в цитоплазматической мембране. Пассивная диффузия осуществляется без затраты энергии.

Облегченная диффузия происходит также в результате разницы концентрации веществ по обе стороны цитоплазмати­ческой мембраны. Однако этот процесс осуществляется с помо­щью молекул-переносчиков, локализующихся в цитоплазматичес­кой мембране и обладающих специфичностью. Каждый перенос­чик транспортирует через мембрану соответствующее вещество или передает другому компоненту цитоплазматической мембра­ны - собственно переносчику. Белками-переносчиками могут быть пермеазы, место синтеза которых - цитоплазматичес­кая мембрана. Облегченная диффузия протекает без затраты энер­гии, вещества перемещаются от более высокой концентрации к более низкой.

Активный транспорт происходит с помощью пермеаз и направлен на перенос веществ от меньшей концентрации в сто­рону большей, т.е. как бы против течения, поэтому данный про цесс сопровождается затратой метаболической энергии (АТФ), образующейся в результате окислительно-восстановительных ре­акций в клетке.

Перенос (транслокация) групп сходен с активным транспортом, отличаясь тем, что переносимая молекула видо­изменяется в процессе переноса, например фосфорилируется.

Выход веществ из клетки осуществляется за счет диффузии и при участии транспортных систем.

Стафилококки. Общая характеристика

Стафилококки обычно встречаются в виде скоплений, напоминаю-щих виноградную гроздь. Отдельные кокки, примерно 1 мкм в диа-метре, имеют тенденцию объединяться в скопления, поскольку их деление происходит в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и дочерние клетки сохраняют своеобразное пространственное груп-повое взаиморасположение. При специальных условиях они могут располагаться поодиночке, попарно, или в виде коротких цепочек. Они грамположительны, неподвижны, не образуют спор и активно растут практически на всех искусственных средах, обычно образуя непрозрачные, гладкие, блестящие колонии.

Поскольку стафилококки продуцируют каталазу, перекись водорода, образующаяся как метаболит при аэробных условиях, для них не токсична, и, большей частью, они лучше растут в присутствии ки-слорода. Однако, они легко переносят отсутствие кислорода, а неко-торые из них даже являются строгими анаэробами. Они лучше рас-тут при температуре 25-35°С, но могут расти и при 8° и при темпе-ратуре выше 48°С.

При культивировании на кровяном агаре в аэробных условиях об-разуют пигменты — от золотистого до лимонно желтого и белого цвета. Золотистый пигмент дал название одному из видов стафило-кокка — Staphylococcus aureus. Однако, при этом, некоторые штам-мы золотистого стафилококка могут продуцировать и белый пиг-мент.

Стафилококки устойчивее других бактерий к действию жара, света, высушивания, экстремальных температур и химических агентов. Они выдерживают 60°С в течение часа, а отдельные штаммы даже 80°С в течение 30 минут, хотя большинство вегетативных форм бактерий погибают при воздействии 60°С в течение 30 минут.

Благодаря своей устойчивости к высушиванию стафилококки могут переноситься с частицами пыли, могут недели и месяцы сохранять-ся в высохшем гное или мокроте. Другой особенностью стафило-кокков является их устойчивость в солевой среде (не погибают при концентрации NaCl до 15%). В связи с этим способны сохраняться в консервированных продуктах (пресервах). В продуктах питания, со-храняемых путем соления, стафилококки могут расти и продуциро-вать энтеротоксин.

Эти микробы устойчивы к действию фенола и большинству других дезинфектантов, чувствительны к основным красителям. Имеют тенденцию к формированию резистентности к сульфаниламидам и антибиотикам. Около 80% штаммов Staphylococcus aureus рези-стентны к пенициллину.

Род Staphylococcus представлен тремя видами:

1. Staphylococcus aureus;

2. Staphylococcus epidermidis;

3. Staphylococcus saprophyticus.

Виды различаются преимущественно по биохимическим свойствам и вырабатываемым ферментам. Staphylococcus aureus ферментирует манит в анаэробных условиях и продуцирует коагулазу, тогда как два других вида лишены этих свойств.

Staphylococcus saprophyticus — первично сапрофитический, о чем свидетельствует его название. Он, по-видимому, является потенци-ально патогенным, обладает ограниченной инвазивностью. Способен вызывать инфекцию мочевого тракта.

Стафилококки. Токсические продукты

Стафилококки вырабатывают много продуктов с выраженными ток-сическими свойствами. Вероятно, никакой другой микроб не проду-цирует их в таком количестве. Среди них экстрацеллюлярные ток-сины, гемолизины (стафилолизины), ферменты. Все они, в той или иной степени, обусловливают болезнетворность и вирулентность микроба. Ни один штамм не способен вырабатывать все токсические продукты сразу.

Гемолизины — это экзотоксины, действующие непосредственно на клеточную мембрану, вследствие чего происходит лизис эритроци-тов, лейкоцитов, тромбоцитов макрофагов и развивается поражение многих тканей. Действием гемолизина, вероятно, объясняются фатальные исходы многих случаев стафилококковых инфекций.

При росте культуры стафилококка на кровяном агаре гемолиз про-является в виде зоны просветления (р-гемолиз). В отличие от стрептококка, стафилококк не вызывает частичный гемолиз (а- гемолиз). Следует отметить, что греческие буквы используются для обозначения иммунологически различающихся типов стафилокок-ковых гемолизинов, в то время как у стрептококков эти буквы обо-значают тип гемолиза — полный, или неполный. Например, гемоли-зин, обозначаемый как а-гемолизин (а-лизин, а-токсин) у стафило-кокков означает наличие светлой зоны вокруг колоний на кровяном агаре.

Цитотоксин — один из наиболее важных факторов вирулентности стафилококков, вызывает агрегацию тромбоцитов и избирательно действует на гладкую мускулатуру мелких вен.

Лейкоцидин — негемолитический экзотоксин, разрушающий клетки белой крови. Он вызывает дегрануляцию полиморфонуклеарных нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов.

Энтеротоксин — внеклеточный токсин, который вырабатывают око-ло 50% коагулазоположительных штаммов и который вызывает большинство случаев пищевого отравления. Токсин действует непосредственно на рвотный центр центральной нервной системы. Продукция токсина обусловлена фаговой конверсией. Различают 5 ти-пов токсина — А, В, С, D, Е. Накопление энтеротоксина в заражен-ной пище приводит к пищевому отравлению с синдромом гастроэн-терита, который не является инфекцией в обычном понимании это-го термина, это скорее токсемия. Присутствие токсина в подозреваемой пище можно установить иммунологически, например, в ре-акции преципитация.

Эксфолиатин (эксфолиативный токсин) — это токсин, продукция которого обусловлена плазмидой. Избирательно повреждает некото-рые клетки кожи таким образом, что обширные участки кожного покрова могут отслаиваться полностью. Особенно чувствительны к действию токсина новорожденные и маленькие дети. Это поражение получило название «синдром ошпаренной кожи».

Коагулаза , важный экстрацеллюлярный фермент, продуцируемый только некоторыми стафилококками (коагулазоположи-тельные), вызывает образование сгустка плазмы крови. В лаборатории опре-деление коагулазы используется как единственное достоверное до-казательство патогенности выделенного штамма. У невирулентных штаммов попытки обнаружить коагулазу обычно заканчиваются не-удачей. Эти штаммы обозначают как коагулазоотрицательные. При наличии данного фермента и проявлении его действия отдельные коккк оказываются покрытыми слоем фибрина и, таким образом, они надежно защищены от атаки фагоцитов.

Способность к продукции коагулазы коррелирует с наличием у этих штаммов и других токсических продуктов. Коагулазо + стафилокок-ки также могут иметь фактор склеивший — это связанная с клет-кой, но антигенно отличающаяся форма коагулазы, вызывающая быстрое склеивание клеток, эмульгированных в капле плазмы.

Липазы стафилококка — эго ферменты, которые разрушают липиды клеточных структур и липопротеины крови. Стафилококки утили-зируют метаболиты кожных структур и потому способны интенсив-но колонизировать (заселять) поверхность кожи. Образование липа-зы дает этому микробу способность к инвазии здоровой кожи н подкожной клетчатки с формированием локальных абсцессов. Штаммы без липазы чаще связаны с генерализованной инфекцией.

Гиалуронидаза (фактор распространения, инвазии), которую выраба-тывают более 90% патогенных стафилококков, повышает проницае-мость тканей для кокков и их токсических субстанций. Вызывает деградацию гиалуроновой кислоты, которая соединяет клетки тканей.

Нуклеаза , имеется у 90-96% S.aureus расщепляет ДНК и РНК. Нуклеаза S.aureus термостабильна, нуклеаза коагулазоотрицательных стафилококков — термолабильна.

Стафилокиназа растворяет сгустки фибрина и, соответственно, спо-собствует распространению местной, вначале ограниченной, инфек-ции.

Стафилококки. Патогенность.

Некоторые стафилококки непатогенны, другие (S.aureus) вызывают тяжелые инфекции, S.epidermidis, хотя иногда и вызывает легкие, ограниченные поражения, в общем, относится к непатогенным, за исключением некоторых необычных медицинских ситуаций, напри-мер, при введении в тело с лечебной целью технических устройств, чужеродных для тканей организма. Обычно S.epidermidis является частой причиной эндокардита, развивающегося при протезировании сердечных клапанов и инфекций, осложняющих ортопедическое протезирование или нейрохирургическое шунтирование.

Хорошо известны стафилококковые инфекции кожи и поверхност-ных тканей тела, такие как пиодермии, фурункулы, абсцессы, кар-бункулы, паронихии, импетиго (impetigo contagiosa) и инфекцион-ные осложнения хирургических ран. Клиника инфекции кожных покровов зависит от возраста больного. Например, «синдром ошпа-ренной кожи» наблюдается у маленьких детей.

Стафилококки также способны вызывать заболевания целых систем и поражаться могут практически все органы и ткани. Они могут быть одной из причин пневмонии, гнойного плеврита, эндокардита, менингита, абсцесса мозга, послеродовой лихорадки, флебита, цис-тита и пиелонефрита. Стафилококковая пневмония является фа-тальным осложнением эпидемического гриппа. Стафилококки яв-ляются наиболее распространенной причиной остеомиелита. Стафи-лококковые заболевания часто возникают в больницах, особенно у пациентов, уже серьезно больных. Например, стафилококковая пневмония — это суперинфекция, угрожающая больным, принимав-шим большие дозы антибиотиков.

Стафилококковая септицемия наблюдается в двух формах. Первая — это молниеносная глубокая токсемия, через несколько дней приво-дящая к смерти. Другая, более частая форма, длится дольше, сопро-вождается развитием метастазирующих абсцессов в разных частях тела, но не является необратимой.

Стафилококковая септицемия может быгь первичной, но чаще это результат вторичного проникновения в кровоток микроорганизмов из местного очага инфекции. Часто процесс начинается как триви-альное воспаление волосяного фолликула, Микроб может поступать в кровоток из инфицированной раны, из очага пневмонии, или из инфицированного внутривенного катетера. Катетер внутри вены не должен оставаться дольше 3-4 дней из-за риска возникновения серьезной инфекции. Поверхностные гнойники; фурункулы вокруг носа и губ легко осложняются септицемией, поэтому лучше избегать их травмирования.

Так называемый «опасный треугольник» — это треугольный участок лица от углов рта, верхней губы и до верхней части носа. Из этой области возможно распространение инфекции непосредственно в полость черепа, что может быть опасным для жизни. Такое ослож-нение связано с особенностями анатомического строения этой части тела: отсутствие надежных механических барьеров, вены, не имею-щие клапанов, которые бы затрудняли обратный ток крови, наличие мускулатуры, постоянно находящейся в движении.

Даже при таких манипуляциях как прокалывание ушей (в космети-ческих целях), проводимых без соблюдения необходимой стериль-ности, есть опасность развития вторичной стафилококковой инфек-ции, которая из открытой ранки может проникать в кровоток и ино-гда приводить к развитию сепсиса.

Стафилококки могут быть причиной энтерита и энтероколита, ос-ложняющего антибиотикотерапию. Они являются наиболее частой причиной пищевого отравления, так как в пище может накапливать-ся в большом количестве токсин.

Стафилококки могут вызывать иногда гнойно-воспалительные про-цессы у коров и лошадей. В случае развития мастита микроб может попасть в молоко. Могут возникнуть гнойничковые поражения ко-жи рук доярок. Возможно заражение других животных в стаде.

Стафилококки. Госпитальная инфекция

Человек тесно связан с повсеместно распространенными стафило-кокками (убиквитарный микроорганизм), и поэтому стафилококко-вая инфекция представляет угрозу в любом месте и в любое время. Пример тому — госпитальная инфекция, уже на протяжении многих лет являющаяся серьезной проблемой для больниц во всем мире.

С этой проблемой связан ряд вопросов, требующих обсуждения. Прежде всего, стафилококковая госпитальная инфекция — это ос-ложнение широкого применения антибиотиков. Эти важнейшие ан-тимикробные агенты очень широко и свободно назначаются, но их действие преимущественно бактериостатическое, а не бактерицид-ное. Стафилококки наделены хорошей приспособляемостью и среди них возникают устойчивые к антибиотикам штаммы. Во-вторых, особенности медицинского страхования и медицинской службы спо-собствуют раннему выявлению болезни и ранней госпитализации большего числа больных. В-третьих, расширение объема и числа хирургических вмешательств. Сложная хирургическая техника по-зволяет оставлять ткани открытыми дольше. В-четвертых, отдель-ные виды терапии могут вызывать угнетение иммунной системы (иммунодепрессию). Например, трансплантация тканей и органов на фоне назначения средств, подавляющих отторжение. В этих случаях подавляется резистентность к инфекции.

С наибольшей частотой при госпитальной стафилококковой инфек-ции наблюдаются следующие поражения:

1. Пиодермия — термин, обозначающий гнойные поражения кожи и подкожных тканей. Чаще у новорожденных. Возможны опас-ные осложнения в виде пневмонии, септицемии. От новорож-денного может заразиться мать, у которой развивается абсцесс грудной железы — мастит.

2. Раневая инфекция, особенно хирургической раны.

3. Вторичная стафилококковая инфекция престарелых и лиц, не способных к соблюдению гигиенических норм.

4. Гастроэнтерит у лиц с угнетенной (например, антибиотиками) кишечной микрофлорой.

Стафилококки. Патологическая анатомия

Наиболее заметное проявление стафилококковой инфекции — абс-цесс, основной тип повреждения. В основе образования абсцесса лежит гноеродная активность стафилококка и его довольно ограни-ченная способность к распространению,

Поскольку микроб постоянно обитает на коже, она чаще всего и по-ражается. Фурункул — это кожный абсцесс. Формирование абсцесса обусловлено локализацией и уровнем распространения. Стафило-кокковая пневмония — это множественные абсцессы в легких. Пие-лонефрит — это множественные абсцессы экскреторной системы по-чек. Стафилококковая септицемия — образование множественных абсцессов по всему телу. В этом случае более подходит термин пие-мия, буквально означающий «гной в крови». Когда стафилококки инфицируют рану, они вызывают образование в ней гноя. Стафилококки являются важнейшей причиной раневой инфекции. В целом, они вызывают до 80% всех гнойных процессов у человека.

Стафилококки. Эпидемиология

Стафилококки в норме обитают на коже человека, а также на сли-зистой ротовой полости, глотки и носа. Они могут находиться здесь постоянно, пока однажды не преодолеют кожный или слизистый барьер и не вызовут развитие болезни. В другом случае они прони-кают через неповрежденную кожу в волосяные фолликулы и прото-ки сальных желез.

В норме способность стафилококка к инвазии и резистентность хо-зяина хорошо сбалансированы, поэтому инфекция не развивается, пока не создастся ситуация, когда встречаются высоковирулентный микроб или макроорганизм со сниженной резистентностью.

Как правило, развивается локальный процесс — абсцесс или фурун-кул, без распространения инфекции. Но в части случаев микроб вы-ходит за пределы локальной инфекции, попадает в кровоток и по-ражает разные ткани и органы тела.

Механизм передачи инфекции преимущественно контактный. На-пример, через руки персонала в больнице. Персонал подвергается риску стать носителями, в этом случае стафилококк может длитель-но находиться у них на слизистой носа. Носители могут стать ис-точниками инфекции.

Стафилококки. Бактериологическая диагностика

Бактериологический диагноз стафилококковой инфекции не пред-ставляет особых сложностей, если исследуют кровь и другие жидко-сти организма, в норме стерильные. Выделенную культуру стафило-кокка необходимо идентифицировать как патогенную, в отличие от обычного микроба, обитающего на коже. Для этого используют ряд тестов. Свежевыделенные культуры стафилококка характеризуются как патогенные по таким признакам как продукция желтого пиг-мента, гемолизина, ферментация маннита, продукция ДНК-азы и коагулазы.

Фаготипирование. Бактериофаги — вирусы, поражающие бактерий и, в некоторых случаях, вызывающие их лизис. Действие фагов спе-цифично. Только отдельный фаг или группа фагов поражают кон-кретный штамм бактерий, что позволяет использовать фаги для типирования бактерий (фаготипирование). С этой целью взвесь из-вестного фага вносится в чашку со свежей культурой микроба, под-лежащего типированию. Если этот микроб чувствителен к действию данного фага, он лизируется и роста на среде не дает. На чашке по-являются прозрачные зоны, так называемые «бляшки» или «нега-тивные колонии».

Фаготипирование стафилококков заслуживает специального упоми-нания. Было установлено, что специфические бактериофаги (стафилофаги, табл. 1) реагируют с 60% коагулазо+ стафилококков. Коагулазо- стафилококки не так чувствительны. Поскольку этот процесс специфический, он используется для определения фаговаров выде-ленных стафилококков. Для удобства бактериофагам присвоены оп-ределенные номера, и штаммы стафилококка, лизирующиеся опре-деленным фагом имеют номер этого фага и обозначаются как соот-ветствующий фаговар. Это касается только штаммов S.aureus. Большинство других стафилококков относятся к нетипирующимся.

По решению международного подкомитета по фаготипированию стафилококков, предложена международная классификация фагова-ров S.aureus (табл. 1)

Таблица 1. Международная классификация фаговаров S.aureus

Группы	Отдельные фаги	Общие фаговары S.aureus
	29, 52, 52А, 79, 80	29,52/52А; 52/52А/80/81; 80
	3А, 3В, 3С, 55,71	3А/3В/3С; 3С/55
	6, 7, 42Е, 47, 53, 54, 75	6/7/47/53/54/75/77
Смешанная

Фаготипирование используется в эпидемиологических целях для выявления источника инфекции, так как фаготипирование высоко-специфичный процесс. В случаях, например, внутрибольничных инфекций, метод может точно указать на носителя патогенного штамма (один и тот же фаговар).

Стафилококки. Иммунитет при инфекции

У людей имеется значительный естественный иммунитет к стафи-лококкам. Специфические антитела обнаруживаются в сыворотке крови большинства людей. Появление их связано с перенесенными, так называемыми, «малыми» стафилококковыми инфекциями кожи и слизистых. Приобретенный иммунитет может выполнять опреде-ленную защитную функцию, но практически не может служить серьезной защитой против стафилококковой инфекции. Особую группу риска составляют лица со сниженными защитными реак-циями, например вследствие диабета или вирусных инфекций.

Стафилококки. Профилактика и контроль за инфекцией

Основу контроля за стафилококковой инфекцией в больницах (и в любом другом месте) является тщательное соблюдение гигиениче-ских стандартов и неукоснительное соблюдение правил асептики. Циркулирующие патогенные штаммы стафилококка так же чувстви-тельны к дезинфицирующим средствам, как и обычные непатоген-ные штаммы.

Важное мероприятие — выявление носителей патогенного стафило-кокка (на слизистой носа) среди персонала, особенно в отделениях новорожденных.

Фаготипирование коагулазо+ стафилококков помогает выявить ис-точник в случае внутрибольничных инфекций

Заключение

1. Стафилококки , стрептококки и пневмококки — это основные грамположительные кокки, относящиеся к двум родам: Staphylococcus и Streptococcus. Формально пневмококк в настоящее время носит название Streptococcus pneumoniae.

2. Стафилококки — аэробные кокки, хорошо растут на всех пита-тельных средах, некоторые разновидности продуцируют каталазу. На кровяном агаре стафилококки продуцируют пигменты, цвет которых может быть золотистым, лимонно желтым или белым. Стафилококки обладают значительной резистентностью к физическим и химическим агентам. У них быстро вырабаты-вается устойчивость к антибиотикам; около 80% штаммов рези-стентны к пенициллину.

3. Наиболее достоверным признаком патогенности штаммов ста-филококка является их способность к продукции коагулазы.

4. Наиболее важными токсическими продуктами метаболизма стафилококков являются гемолизины, энтеротоксин, липазы, нуклеаза. Некоторые штаммы продуцируют коагулазу.

5. Основным проявлением стафилококковой инфекции является абсцесс.

6. Фаготипирование — ценный эпидемиологический прием, позво-ляющий установить источник патогенного стафилококка, что особенно важно при госпитальной инфекции.

7. Ключевыми мероприятиями, предотвращающими внутриболь-ничное распространение стафилококковой инфекции является тщательное соблюдение гигиенических стандартов, строжайший контроль за техникой асептики, выявление носительства стафи-лококка среди персонала отделений новорожденных и хирурги-ческих стационаров, удаление постоянных носителей из — «зоны риска» для пациентов.

100 р бонус за первый заказ

Выберите тип работы Дипломная работа Курсовая работа Реферат Магистерская диссертация Отчёт по практике Статья Доклад Рецензия Контрольная работа Монография Решение задач Бизнес-план Ответы на вопросы Творческая работа Эссе Чертёж Сочинения Перевод Презентации Набор текста Другое Повышение уникальности текста Кандидатская диссертация Лабораторная работа Помощь on-line

Узнать цену

Стафилококкозы в стационарах 40-60%

В настоящее время род Staphylococcus уже к семейству Micrococcaceae не относится (с начала 90-х годов). Семейства Micrococcaceae не существует (т.к. генетического родства между его составляющими нет). Объединялись лишь по признаку грамположительных аэробных и факультативно-анаэробных кокков, делящихся в нескольких плоскостях.

Micrococcus - генетически родственник актиномицетов.

Staphylococcus – генетически родственник клостридий.

При исследованиях на фузобактерии, правотеллы, бактероиды (строгие анаэробы) на бескислородной среде если не применять среду с антибиотиками (аминогликозиды), то стафилококки (да и энтеробактерии) забьют всё!!!

Метод истощающего посева

Стафилококки – факультативные анаэробы. Micrococcus – строгие аэробы

Дифференциация – тест с аэробным и анаэробным расщеплением глюкозы. Все Staphylococcus глюкоза+ без газа под вазелиновым маслом. Micrococcus – нет.

Staphylococcus – более 30 видов, с подвидами – 44. Дифференцируются они по 33 тестам.

Граница галотолерантности – среда с 7,5 и более % NaCl.

Micrococcus – на 6,5% ещё растут, а выше – только Staphylococcus. (ЖСА – 10% NaCl). Некоторые виды 15% NaCl.

Молочно-солевой агар –растут микрококки, т.к. там NaCl ниже.

У буржуев – среда Чапмена - маннитолово-солевой агар (1% маннита)– 7,5% NaCl. Маннитол=маннит, как глицерол=глицерин

Целенаправленное выделение Staphylococcus (например при санитарно-бактериологических исследованиях). Зона пожелтения за счёт образования кислоты. Как его альтернатива у нас – ЖСА.

Т.е. если выделяем кокки на среда с ≥ 7,5 NaCl то они всегда глюкозо+, т.к. это Staphylococcus, а Micrococcus не растут

Морфология микрококков чуть отличается от стафилококков – и колонии и клетки крупнее , чем у стафилококков.

У каждого человека на коже 7-10 видов микрококков (а всего около 15 видов), М. luteus – преобладает - крупные желтые колонии на неингибиторных средах(старое название – воздушные сарцины, истинные сарцины в аэробных условиях не растут!!!). Равномерно красятся по Граму. В виде кучек, тетрад, пакетов. Другие – белые, бесцветные и т.п. M.livi – эмалево-белые. M.cristi - красные колонии.

Стафилококк по Граму окрашивается неравномерно (ситцевость окраски). Гроздья – чаще дает S. aureus, а так кучки, тетрады, пакеты и т.п. Стафилококки с жидкой стеды – одиночные, пары, кучки.

На средах без желтка пигмент S. aureus не образуется и колонии бывают серыми.

Каротиноиды в воде не растворяются и среда вокруг колонии никогда не окрашивается у Staphylococcus и Micrococcus.

Ангелина Гесс – в середине 19 века ввела агар в среды

Micrococcus тоже УПМФ – сепсис. In vitro чувствителен ко всему. У животных пенициллин – 5 единиц на инъекцию – на уровне изобретения пенициллина – лечит сепсис. Но in vivo лечить очень трудно. Сепсис у больных с сердечным шунтированием. Если попадают в аппарат искусственного кровообращения.

Planococcus – нас не интересуют – в морской воде и человеку не опасны

Стоматококки – 1 вид. Хорошо растут на КА (на КА вообще вырастает что угодно), но на солевых средах они не растут. Особенного клинического значения не имеют. УПМФ. Очень редко вызывают гингивиты и стоматиты (но чаще эти заболевания вызывают анаэробы и вирусы).

S. aureus subsp. aureus

S. aureus subsp. anaerobius - в аэробных условиях не растет (строгий анаэроб)

Среди стафилококков нет сапрофитов – все условно-патогенные . Более 86 нозологических форм заболеваний.

S. aureus и S.epidermidis – по 45 % всех стафилококкозов. Пищевые отравления - только S. aureus (S.epidermidis – может вызывать лишь у грудных детей). Энтеротоксины продуцируют только S. aureus.

У каждого человека 10-12 видов стафилококков живет на коже.

Передние отделы носа – главный биотоп. Там больше всего на единицу площади.

S. epidermidis также может, наряду с S. aureus вызывать вспышки ВБИ.

У новорожденных: конъюнктивиты S. epidermidis раньше в Москве в 70-х годах; госпитальные пневмонии S. epidermidis сейчас.

Плазмиды передаются со скоростью около 2 часов (2 часа стафилококк побыл на коже другого человека и получил новую плазмиду).

Носительство .

В родовспомогательных учреждениях плановое исследование на стафилококк не проводится (только при вспышках) – 345 приказ. У хирургического профиля – 720 приказ до сих пор (нигде в мире не проводится). Количество стафилококковых инфекций одинаково и у «буржуев» и у нас, независимо от санации.

По тест-системам можно дифференцировать до 12-15 видов стафилококков и несколько видов микрококков.

691 приказ – по роддомам отменен. Новый 345 приказ не имеет бактериологической части, поэтому по бактериологии все до сих пор ориентируются по 691 приказу.

Плановое обследование на носительство стафилококка отменено.

Коагулазоположительных стафилококков сейчас 5 видов.

	коагулаза				мальтоза	хлопьеобразование	Гемолиз на КА с кровью человека
			Ч/з сутки				Почти 100%
						± менее 50%
	Ч/з ночь

S. aureus не дает коагулазу очень редко – при первичных посевах от больного с массивной антибиотикотерапией. Поэтому пересеваем на косяк и потом снова ставим плазму. Если нет – это не S. aureus.

Пигмент на средах с повышенным содержанием белка и свет (ЖСА, сывороточная среда с белком)

Среди коагулазоотрицательных стафилококков некоторые тоже могут образовывать пигмент. S промагенес – на любой среде образует желтый пигмент

Ацетоин=ацетилметилкарбинол – реакция VP (Фогес-Проскауэра)

Среда Гиса с глюкозой полужидкая. При посеве с солевой среды всегда глюкозоположительны, по крайней мере, в верхней части столбика.

Окончательный отрицательный ответ по полужидкой среде Гиса с глюкозой выдаётся только на 5-е сутки.

Если газ – предполагаем, что микст или вообще не стафилококк.

Полужидкая среда с маннитом исключена в 1974 году – окончательный отрицательный ответ только на 5-е сутки. Ставится только на чашке – ответ наутро.

Плотная среда с глицерином (1%) (может заменяться любым сахаром и спиртом). Жидкие и полужидкие среды для дифференциации внутри родов Staphylococcus и Micrococcus не используются никогда. Индикатор –бромтимолсиний, рН – нейтральный; или бромкрезолкрасный, бромтимолкрасный. Сеем бляшками – до 10 культур на чашку. Радиальной полосой – до 6 культур на чашку. Вокруг стафилококка – пожелтение. Микрококки глицерин не утилизируют.

S. aurecularis на тест-системах он на 95-99% даёт аналогичность S. aureus и только по реакции плазмокоагуляции его можно отличить.

Коагулазоотрицательные стафилококки

При определённых условиях могут давать пигмент.

У стафилококков по 1-2 тестам дифференциацию до вида провести невозможно.

Растет в плазме в виде хлопьев Маннит+ всего 6-7 видов.

	коагулаза	Щелочная фосфатаза			трегалоза
						Более 20% штаммов
						5-10% штаммов
						95-100% штаммов
						5% штаммов
S. saprophiticus						5% штаммов

У 100% S. aureus гемолитическая активность.

S. saprophiticus встречается очень редко. Циститы и уретриты у женщин молодого возраста – чувствителен к антибиотикам и химиопрепаратам

Коагулазонегативные не могут стать коагулазоположительными.

S. epidermidis никогда не бывает коагулазоположительным, что бы не было написано в 720 приказе

Неспоровая клетка может прожить 10-12 дней.

Щелочная фосфатаза характерна только для S. epidermidis.

Щелочная фосфатаза – паранитрофенолфосфат или фенолфталеинфосфат из тестов на ЩФ в биохимии– 50 мг на 100 мл агара до 20 штаммов на чашку.

Паранитрофенолфосфат → паранитрофенол (желтый) и окраска среды в лимонно-желтый цвет.

Фенолфталеинфосфат → фенолфталеин (бесцветный). Защелачиваем 3-10% р-ром аммиака (капаем на крышку чашки) Колонии малиновые.

Можно купить 10% р-р фенолфталеинфосфата. Хранится в холодильнике годами. 0,5 мл р-ра на 100 мл агара.

S. epidermidis природно чувствительны к новобиоцину.

Лецитовителаза (желточный фактор) – в международной классификации не используется, только у нас.

20-25% S. epidermidis лецитиназопозитивные.

На 80% S. aureus – человеческого происхождения – дают лецитовителазу. Лецитиназонегативные S. aureus – от животных.

Другие стафилококки тоже могут давать. Т. е. Если лецитовителаза+, то это на 80% S. aureus, на 20% другие стафилококки.

Чашки ЖСА на просвет – зона просветления (протеаза) – нам она не важна.

Помутнение – преобладают липазы – также не важны.

Буржуйские кровяные среды – из эритроцитов барана. Считалось, что человеческие штаммы S. aureus продуцируют только α-гемотоксин, но сейчас есть и β-гемотоксин. Это можно разобрать только на эритроцитах барана.

β-гемотоксин даёт зону неполного гемолиза через сутки, а если затем поставить до конца рабочего дня в холодильник – то зона полностью просветлеет.

S. aureus продуцирует 2 фермента

1) термолабильная ДНКаза (нуклеаза) – она есть у всех стафилококков и у большинства других микробов.

2) Термостабильная ДНКаза (нуклеаза) – есть только у S. aureus. Не разрушеется при кипячении и даже кратковременном автоклавировании.

И по нашим приказам определяется только термолабильная ДНКаза (смысла нет).

В прогретой пище (при скрытии факта ПТИ) стафилококк разрушается, а токсины остаются. По наличию термостабильной ДНКазы можно определить, был ли S. aureus.

По приказам высокополимеризированную ДНК 1-2 мг на 1 мл среды (рН=8,0). Посев на чашку бляшками (или уколом). 24 часа. Проявляем, заливая чашку 3N HCl, образуется преципитат ДНК с HCl и где ДНКаза сработала – видим зону просветления. У S. aureus радиус её 10-12 мм, у S. epidermidis её радиус 4-5 мм. Вокруг лунки с убитой культурой S. aureus – 7-8 мм.

S. epidermidis образует только термолабильную ДНКазу, S. aureus – обе ДНКазы – зона больше.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus - факультативно анаэробные грамположительные кокки, неподвижные, каталазо- и коагулазоположительные. Некоторые штаммы S. aureus продуцируют стафилококковые энтеротоксины (SEs), вызывающие пищевые отравления. Стафилококки присутствуют в воздухе, пыли, сточных водах, воде, молоке, продуктах питания, а также на оборудовании пищевых производств, на различных поверхностях в окружающей среде, на кожных покровах людей и животных. Именно люди и животные являются основным резервуаром инфекции. Стафилококки присутствуют в полостях носа, и горле, а также на волосах и кожном покрове по крайней мере у 50% здоровых людей. Staphylococcus aureus способен расти в широком диапазоне температур от 7 до 48,5°С (оптимум 30 - 37°С); рН 4,2 - 9,3 (оптимум рН 7,0-7,5) и при высокой концентрации хлорида натрия (до 15% NaCl). Такие свойства позволяют бактериям заселять самые разнообразные продукты. Продукты, наиболее часто являющиеся причиной стафилококковых пищевых отравлений - это мясо и мясопродукты, мясо птицы, яйца, салаты (содержащие яйцо, тунец, курицу, картофель, макароны), кондитерские изделия (например, пирожки с кремом, шоколадные эклеры), начинка сэндвичей, молоко и молочные продукты. Таким образом, продукты, которые в процессе приготовления значительное время обрабатыватся вручную и впоследствии хранятся в тепле, могут быть реальным источником стафилококковых пищевых отравлений.

Интоксикация при стафилококковой инфекции

Причиной болезни являются продуцируемые Staphylococcus aureus токсины, поэтому заболевание характеризуется очень коротким инкубационным периодом - обычно от 0,5 до 6 часов. Восприимчивость больного к токсинам определяется состоянием больного, концентрацией токсина и количеством съеденного зараженного продукта. Инфекционная доза может быть менее 1,0 мкг, что соответствует примерно 100.000 КОЕ/г продукта. Наиболее распространенными симптомами заболевания являются тошнота, рвота, отвращение к пищи, спазмы в животе и диарея. Период реабилитации занимает, как правило, 1-3 дня, но в тяжелых случаях полное восстановление может занять больше времени. Болезнь не передается окружающим, больным необходимо принимать большое количества жидкости.

Патогенность, масштабы заболевания

Коагулозоположитепльные стафилококки - это грамположительные каталазоположительные микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на селективно-диагностической питательной среде, дающие положительную реакцию на коагулазу (S. аureus; S. aureus spp. anaerobius) или специфическую для кроличьей плазмы реакцию на агаре с кроличьей плазмой и фибриногеном при определении стандартным методом. Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) - это коагулозоположительные стафилококки, образующие ацетоин и ферментирующие мальтозу в аэробных условиях в процессе определения этих биохимических тестов стандартным методом.

Согласно недавним исследованиям в развитых странах из всех известных инфекций чаще всего к смерти приводит одна из самых известных, «обыкновенных» бактерий - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк; все штаммы стафилококков, продуцирующие коагулазу, называют золотистыми ). Этот условно-патогенный микроорганизм выделяют у 15-30% здоровых людей, причем носительство у большинства из них ограничено несколькими месяцами. При дефиците иммунитета у больного возбудитель является причиной многочисленных, опасных для жизни зооантропонозных инфекций. Самая распространенная токсическая стафилококковая болезнь - это пищевое отравление. Многие штаммы золотистого стафилококка продуцируют энтеротоксин. Этот яд вызывает диарею, рвоту, боли и спазмы в животе. Согласно проведенного в Новой Зеландии исследования 8,6% детей, госпитализированных с сепсисом, вызванным Staphylococcus aureus, умирают. Дерматовенерологи многих стран обеспокоены увеличением количества стафилококковых инфекций и смертельных случаев из-за стафилококка. Бактерии вызывают порчу пищевых продуктов, включая и так называемые «непортящиеся» продукты. Размножаясь, например, в твердом сыре и салями, бактерии выделяют токсины. Именно они являются наиболее частой причиной серьезных пищевых отравлений. При кулинарной обработке стафилококк гибнет, но его термостабильные токсины не разрушаются. Стафилококки являются причиной множества болезней человека, включая сердечные (эндокардит и перикардит), опорно-двигательного аппарата (остеомиелит и инфекционный артрит). На коже и в мягких тканях стафилококк вызывает так называемый синдром шелушащейся кожи и целлюлиты , являющиеся наиболее частыми инфекционными болезнями кожи. По данным ВОЗ золотистый стафилококк возглавляет список бактерий, которыми наиболее часто заражаются в медицинских учреждениях. Высок риск инфицирования стафилококком при использовании внутривенных катетеров и других медицинских устройств, контактирующих с внутренней средой организма. Фактором риска является и искусственная вентиляция легких. Инфицирование стафилококком может также происходить при нарушении обычных правил гигиены в больницах. Всего на S. аureus приходится около 30% всех «госпитальных инфекций». Стафилококки, выжившие в условиях постоянного применения дезинфицирующих средств и использования антибиотиков - серьезнейший фактор риска для персонала, основа госпитальной инфекции.

Таксономия

Стафилококки - род шаровидных неподвижных аспорогенных грамположительных хемоорганотрофных факультативно-анаэробных или аэробных бактерий из семейства Micrococcaceae. В роду Staphylococcus выделяют около 30 видов, при этом 14 обнаружены на коже и слизистой человека, включая S. aureus , S. epidermidis, S. saprophyticus . Для видовой идентификации используют, в основном, 3 теста: продукцию плазмокоагулазы, анаэробную ферментацию маннита и глюкозы. Антигенная структура бактерии сложная, видоспецифичными антигенами являются тейховые кислоты.

Морфология бактерий и колоний

Бактериальные клетки диаметром 0,5-1,5 мкм делятся в нескольких плоскостях несимметрично, образуя скопления, напоминающие гроздья винограда. Встречаются одиночные клетки, пары и тетрады. Клеточная стенка содержит пептидогликан и глицеринтейховую кислоту. Стафилококки формируют гладкие колонии, окрашенные каротиноидами в желтый или оранжевый цвета. Однако пигментирование не является видовым признаком. При росте на желточно-солевом агаре образуются мутные круглые ровные колонии кремового, желтого или оранжевого цвета. При культивировании в жидких средах бактерии вызывают их равномерное помутнение, а затем образование рыхлого осадка, превращающегося в тягучую массу.

Физиолого-биохимическая характеристика

Стафилококки - факультативные анаэробы, но быстро и обильно растут при наличии кислорода. Хемоорганотрофы с окислительным и ферментатиывным метболизмом. Биохимичесчки очень активны. Продуцируют каталазу, на среде с глюкозой в анаэробных условиях большинство штаммов образуют ацетоин (положительная реакция Фогеса-Проскауэра). Выделяют аммиак при росте на аргениновом бульоне, восстанавливают нитраты до нитритов или молекулярного азота, активно гидролизуют белки, в аэробных условиях расщепляют многие углеводы до уксусной кислоты и углекислого газа. Родовым признаком является ферментация глюкозы в анаэробных условиях, что отличает стафилококки от микрокков. Бактерии растут на основных средах при 37°С (оптимум 35-40°С), но могут расти и в более широком интервале температур (6,5÷46°С). Оптимум роста отмечен при рН 7,0-7,5, но возможен рост в диапазоне рН=4,2÷9,3. Хорошо выдерживают повышенное осмотическое давление, поэтому элективным субстратом для них служат среды с высокой концентрацией хлорида натрия - желточно-солевой или молочно-солевой агар. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя при этом вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 часов. Довольно устойчивы к нагреванию: при 70-80 о С погибают за 20-30 мин, при 150 о С - за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 часа. Бактерии устойчивы к действию низких температур, повторное замораживание и оттаивание их не убивает. Менее устойчивы стафилококки к действию дезинфектантов (перекиси водорода и др.), но резистентны к воздействию чистого этанола. При выращивании в аэробных условиях бактерии нуждаются в аминокислотах и витаминах, в анаэробных - требуют дополнительно урацил и дополнительные источники углерода. На кровяном агаре могут образовывать несколько видов гемолизинов - веществ, поражающих эритроциты, лейкоциты и другие клетки. Продуцируют также фибринолизин, фосфатазу, бактериоцины; отдельные штаммы продуцируют коагулазу, ДНК-азу, H 2 S и энтеротоксины (до 10 видов, характеризующихся летальным, гемолитическим или некротическим действием). Ферментируют некоторые углеводы с выделением кислоты без газа. Устойчивы к лизоциму, чувствительны к различным антибиотикам. Патогенные для человека виды обладают одним из 4 факторов токсичности, таким как: 1) экзотоксин, 2) энтеротоксин, 3) лейкоцидин, 4) коагулаза (фермент патогенности). Кросс-резистентность к антибиотикам контролируется R-плазмидой. Другим прокариотамэтот фактор устойчивостипередается трансдукцией.

Источники и факторы передачи инфекции

Стафилококки - условно патогенные микробы. Являются представителями нормальной микрофлоры человека и животных - густо колонизируют различные биотопы организма (кожу, слизистую носа и зева ротовой полости, брюшную полость и подмышечные области). Стафилококки внедряются в организм через кожные покровы и слизистые оболочки воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем. Механизм инфицирования обычно связан с переносом возбудителя из участков колонизации на травматизированную поверхность (например, кожные покровы). Существенную роль играют также тесные контакты с носителями и лицами, страдающими стафилококковыми поражениями. Стафилококк устойчив ко многим внешним воздействиям, поэтому обнаруживается во внешней среде - воздухе (пыль), почве, на предметах обихода. Источники и факторы передачи стафилококковой инфекции множественные. Основные источники - больные со стертыми формами стафилококковой инфекции или носители, реже - заболевшие животные, например, (при пищевых стафилококковых отравлениях и энтероколитах) больные маститом коровы. Наибольшую эпидемиологическую опасность представляет медицинский персонал, который может являться носителем госпитальных штаммов стафилококка. Для стафилококковой инфекции характерна множественность механизмов, путей и факторов передачи. Бактерии могут передаваться контактно через нестерильный медицинский инструмент, руки медперсонала, алиментарно с молочными продуктами и кондитерскими изделиями, аэрогенно и парентерально (при инъекциях).

Патогенез

Восприимчивость к стафилококкам очень низкая у лиц с нормальным иммунным статусом и повышенная у иммунокомпромиссных хозяев. Очень часто стафилококковая инфекция развивается на фоне вторичных иммунодефицитов. Факторами патогенности возбудителя является микрокапсула, компоненты клеточной стенки, ферменты агрессии и токсины. Микрокапсула защищает бактерии от фагоцитоза, способствует адгезии микробов и их распространению по тканям. При выращивании in vitro она не образуется. Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций и нейтрализуют иммуноглобулины, обездвиживают фагоциты. Тейховые кислоты запускают каскад комплимента (компонента иммунологических реакций) по альтернативному пути. Фермент агрессии стафилококков коагулаза существует в трех антигенных формах и вызывает свертывание сыворотки крови. При целом ряде патологических состояний организма стафилококки покидают свои обычные биотопы, преодолевают тканевые барьеры и привносятся кровотоком во внутреннюю стерильную среду организма. Там они вызывают типовую патологическую реакцию - воспаление. Оно проявляется в форме гнойно-воспалительных процессов различной локализации и степени тяжести, вплоть до сепсиса и септикопиемии. Стафилококки являются этиологическим фактором заболеваний, подавляющее большинство которых носят гнойно-воспалительный характер. Бактерии способны поражать практически любые ткани организма. Вызываемые S. aureus инфекции разнообразны и включают более 100 нозологических форм, в числе которых болезни: 1) кожи и подкожной клетчатки (абцессы, панариции, фурункулез и др.), 2) органов дыхания (ангина, плеврит, пневмония и др.), 3) нервной системы и органов чувств (менингит, отит, коньюктивит и др.), 4) органов пищеварения (стоматит, перетонит, энтерит, энтероколит, пищевая интоксикация и др.), 5) костно-мышечной системы и соединительной ткани (артриты, остеомиелит), 6) кровообращения (эндокардит, флебит и др.), 7) мочеполовых органов (цистит, мастит и др.), 8) стафилококковый сепсис . Эти заболевания могут протекать остро или хронически. Пищевые отравления клинически проявляются в форме рвоты и водянистой диареи уже через 2-6 ч после употребления в пищу инфицированных продуктов - кондитерских изделий с кремом, консервов, мясных и овощных салатов и т.д.

Методы обнаружения

На селективных дифференциальных средах вырастают, как правило, только колонии стафилококков. Предположить стафилококковую этиологию заболевания позволяет выделение стафилококка в чистой культуре. Биоматериал для исследования выбирается в зависимости от клинической картины болезни. У штаммов S. aureus, выделенных при пищевой стафилококковой интоксикации, определяют наличие энтеротоксинов в биологических и иммунологических тестах. Традиционными методами предварительные результаты по идентификации стафилококковой инфекции можно получить через 1-2 суток.

Классический метод

Метод обнаружения S. aureus основан на высеве навески продукта и/или разведений его навески в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных типичных и/или атипичных колоний к S. aureus.

Staphylococcus aureus bacteria are pathogens to both man and other mammals. They are gram positive bacteria that are small round in shape (cocci) and occur as clusters appearing like a bunch of grapes on electron microscopy.

Microbiology of Staphylococcus:-

Coagulase reaction

Staphylococcus were earlier divided into two groups on the basis of their ability to clot blood plasma. The coagulase-positive staphylococci constitute the most pathogenic species S aureus . The coagulase-negative staphylococci (CNS) are now known to comprise over 30 other species. It is the CNS that is present as harmless bacteria on skin but some of these may cause infections as well.

These days coagulase reaction is no longer used to classify S.aureus. This is because coagulase is a marker for S aureus but there is no direct evidence that it is a virulence factor. Nevertheless, the term is still in widespread use among clinical microbiologists.

Proteins and virulence

S. aureus expresses certain proteins and polysaccharides on its surface. This is correlated with virulence. Virulence is the effect of many factors expressed during infection. The bacteria also produce certain toxins. In the body antibodies neutralize staphylococcal toxins and enzymes.

Taxonomy and naming conventions

At least 30 species of staphylococci have been recognized by biochemical analysis. This is especially so with DNA-DNA hybridization. Of these, 11 are found in humans as harmless bacteria on skin, in the nose and throat. These can cause disease and infections in certain situations.

Identifications under the microscope

These bacteria are Gram-positive cocci about 0.5 - 1.0 μm in diameter. They are present as grape like clusters. They may also occur in pairs and occasionally in short chains. The clusters arise because staphylococci divide in two planes. This clustering helps to distinguish staphylococci from streptococci, which usually grow in chains.

Growing on solid medium colonies of S. aureus these appear as golden clumps.

Catalase test

This test helps to distinguish between streptococci (that is catalase-negative) and staphylococci (which are catalase positive). On an agar slant or broth culture of the bacteria several drops of 3% hydrogen peroxide are applied. Catalase-positive cultures bubble at once. This cannot be done on blood agar since blood itself will produce bubbles.

Identification of S.aureus

After sample from the lesions are taken, they can be stained with Gram stain. S. Aureus is Gram positive. The organism from the clinical specimen from blood culture or pus is then streaked over solid media such as blood agar, tryptic soy agar or heart infusion agar. If the specimen is suspected to be contaminated it is plated on mannitol salt agar containing 7.5% sodium chloride.

Another test is production of thermostable deoxyribonuclease. S aureus can be confirmed by testing colonies for agglutination with latex particles coated with immunoglobulin G and fibrinogen which bind protein A and the clumping factor, respectively.

Microscopically cells occur singly and in pairs, short chains, and grape-like clusters. The cell wall of the bacteria contains teichoic acid. Ribitol teichoic acid (Polysaccharide A) is present in Staphylococcus aureus . Protein A uniformly coats surface of S. aureus and is usually oxidase negative.