التشخيص المصلي لمرض الزهري. اختبارات اللولبية لمرض الزهري

اختبارات اللولبية لمرض الزهري. وصف عام.

لتشخيص مرض الزهري بشكل موثوق وتحديد الأجسام المضادة المضادة للزهري في جسم المريض (في مصل الدم أو السائل النخاعي) ، استخدم تقنيات البحث المختبري الخاصة - ما يسمى بالطرق المصلية.

عند إجراء الاختبارات التشخيصية لمرض الزهري، يتم استخدام التفاعلات المصلية المختلفة: التراص، والترسيب، والتألق المناعي، والتثبيت التكميلي، ومقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم، وما إلى ذلك. وتستند كل هذه التفاعلات المصلية على تفاعل المستضدات والأجسام المضادة.

تسمى الاختبارات المصلية المحددة اللولبيةلأن هذه الاختبارات تستخدم اللولبية الشاحبة أو مستضداتها، أي المستضدات ذات الأصل اللولبي. الغرض من اختبارات اللولبية هو تحديد أجسام مضادة محددة للهياكل المستضدية للعامل المسبب لمرض الزهري، أي الأجسام المضادة الموجهة خصيصًا ضد بكتيريا T. Pallidum نفسها، وليس ضد أنسجة الجسم المتضررة من اللولبية اللولبية. الأجسام المضادة المضادة للتريبونيم محددة فئة IgMيمكن اكتشافه بالفعل في نهاية الأسبوع الثاني من المرض.

7. النتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة

تسمى نتائج RV الإيجابية لمرض الزهري لدى الأفراد الذين لا يعانون من هذا المرض بالإيجابيات الكاذبة. معدل النتائج الإيجابية الكاذبة لدى الأفراد الأصحاء هو 0.2-0.25%. إذا كانت النسبة المئوية لنتائج RT الإيجابية الكاذبة غير المحددة في الأشخاص الأصحاء صغيرة جدًا، فقد تكون مرتفعة في بعض الأمراض.

يمكن تقسيم جميع النتائج غير المحددة للتفاعلات المصلية إلى المجموعات الرئيسية التالية:

1. الأمراض الناجمة عن وجود مستضدات شائعة في مسببات الأمراض المماثلة (اللولبيات): الحمى الراجعة، الداء العليقي، البجل، البنتا، اللولبية الفموية، اللولبية النحيفة.

2. ردود الفعل الإيجابية الناجمة عن التغيرات في استقلاب الدهون والتغيرات في الجلوبيولين في الدم. وتشمل هذه التفاعلات نتائج إيجابية لدى النساء الحوامل ومرضى النقرس واضطرابات الدهون نتيجة التسمم بالرصاص والفوسفور وبعد تناول ساليسيلات الصوديوم والديجيتاليس وغيرها. ويجب أن تشمل هذه التفاعلات أيضًا تفاعلات إيجابية في بعض الأمراض المعدية (التيفوس والملاريا والالتهاب الرئوي) ، الجذام، التهاب الشغاف، داء الكولاجين، احتشاء عضلة القلب، الارتجاج، السرطان، تليف الكبد، الخ.)

3. الأخطاء الفنية. الاختيار غير الصحيح للجرعة التكميلية، وعدم الالتزام بشروط وفترات تخزين الكواشف، واستبعاد عينات مصل الدم من الاختبار، واستخدام أنابيب وأدوات الاختبار الملوثة.

8. تعديل رد فعل واسرمان

هناك تعديلات على تفاعل واسرمان في الإصدارات النوعية والكمية، في البرد، مع السائل النخاعي.

تعديل RV في البردتبين أنها أكثر حساسية. من السمات الخاصة لطريقة تنظيم تفاعل واسرمان في البرد هي أنظمة درجة الحرارة ثلاثية الطور التي يحدث فيها التثبيت التكميلي. يتم إجراء هذا التفاعل أيضًا مع مستضدات الكارديوليبين واللويبية.

بالإضافة إلى التقييم النوعي للترددات اللاسلكية، هناك طريقة لذلك بيان كميبتخفيفات مختلفة من مصل الدم (1:10، 1:20، 1:80، 1:160، 1:320). يتم تحديد عيار الريجين بواسطة الحد الأقصى للتخفيف الذي لا يزال يعطي نتيجة إيجابية حادة (4+). يعتبر التدريج الكمي للـ RV مهمًا في تشخيص بعض أشكال مرض الزهري وفي مراقبة فعالية العلاج.

9. نطاق التطبيق

في روسيا، يعد اختبار RSKt جزءًا من مجموعة الاختبارات المصلية القياسية لمرض الزهري (SSR).

يتم استخدام تفاعل واسرمان مع مستضد اللولبيات والكارديوليبين (RSKt).

• تشخيص جميع أشكال مرض الزهري،
• مراقبة فعالية العلاج،
• إجراء فحوصات للأشخاص الذين مارسوا الجنس مرضى الزهري,
• فحص الأشخاص الذين لديهم اشتباه سريري وسري في الإصابة بمرض الزهري
• أثناء الفحص الوقائي لمرض الزهري للمرضى في مستشفيات الطب النفسي والعصبي والمتبرعين والنساء الحوامل، بما في ذلك الأشخاص المرسلون للإجهاض.

حاليًا، بأمر من وزارة الصحة في الاتحاد الروسي، يوصى باستبدال RSCT بطرق لولبية أكثر حساسية (ELISA أو RPGA).

في الخارج، لم يتم استخدام تفاعل واسرمان مع المستضد اللولبي في الممارسة المخبرية السريرية لفترة طويلة ولم يتم تضمينه في قائمة الاختبارات القياسية التي أوصت بها منظمة الصحة العالمية.

مجمع التفاعلات المصلية الكلاسيكية (CSR)

KSR- هذا معقدة من ردود الفعل، يستخدم للتشخيص المصلي لمرض الزهري كطريقة قياسية. يتضمن هذا المجمع من التفاعلات تفاعل واسرمان مع مستضد الكارديوليبين (مستخلص من قلب البقر المخصب بالليسيثين والكوليسترول) ومستضد اللولبيات (معلق معالج بالموجات فوق الصوتية لللولبيات الشاحبة المزروعة المسببة للأمراض)، بالإضافة إلى تفاعل الهطول الدقيق (MPR) مع البلازما أو المصل المعطل الذي يتم وضعه مع مستضد الكارديوليبين

تصبح CSR إيجابية في منتصف الفترة الأولية (يتم تحديد تقسيمها إلى سلبي مصلي وإيجابي بدقة بواسطة CSR)، في الفترة الثانوية تكون CSR إيجابية في 98-100٪ من المرضى، وفي الفترة الثالثية - فقط في 60-70%. أي أنه مع زيادة مدة المرض، تنخفض إيجابية CSR تدريجياً.

مزايا لجنة المساعدة الإنمائية:

1) الرخص والبساطة وسرعة التركيب. وينطبق هذا بشكل خاص على تفاعل الهطول الدقيق: يعد RMP حاليًا طريقة الفحص (الاختيار) الرئيسية؛

2) تعتبر الاختبارات غير اللولبية ملائمة للاستخدام لمراقبة علاج مرض الزهري.

عيوب لجنة المساعدة الإنمائية:

1) الذاتية في تقييم نتائج التفاعلات ("بالعين")؛

2) حساسية منخفضة في الأشكال المتأخرة من مرض الزهري.

3) عدم التحديد مقارنة بالاختبارات الحديثة. عند تنفيذها، غالبا ما يتم ملاحظة ردود الفعل الإيجابية الكاذبة (FPR).

قد يكون DM بسبب التفاعل المتبادل بين اللولبية الشاحبةوالميكروبات الأخرى، واضطرابات استقلاب الدهون والبروتينات، وعدم استقرار أغشية الخلايا، وتكوين الأجسام المضادة الذاتية. يتم ملاحظة LPRs في الالتهابات الحادة (الملاريا، عدد كريات الدم البيضاء المعدية، وما إلى ذلك) والمزمنة (السل، والجذام، والتهاب الكبد، وداء البوريليات، وما إلى ذلك)، واحتشاء عضلة القلب، وتليف الكبد، وداء الكولاجين (خاصة في مرض الذئبة الحمراء)، وأمراض الأورام، والتطعيم، وتعاطي المخدرات، تعاطي الكحول والأطعمة الدهنية. يمكن أن تحدث النتائج الإيجابية الكاذبة في الأسابيع الأخيرة من الحمل، وبعد الولادة، وفي بعض النساء أثناء الحيض. قد تترافق نتائج DSC السلبية الكاذبة مع الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

RIT، RIBT - رد فعل تجميد اللولبية الشاحبة

اختبار تجميد اللولبية الشاحبة (TPI) هو طريقة كلاسيكية تستخدم للكشف عن الأجسام المضادة اللولبية المحددة. يستخدم تفاعل RIBT مسببات الأمراض اللولبية الشاحبة T. pallidum (سلالة نيكولز) المزروعة في خصية أرنب كمستضد. يعتمد RIBT على فقدان حركة اللولبية الشاحبة الحية بعد التعرض للأجسام المضادة من مصل دم المريض ومكملاته. ويتم تقييم النتائج باستخدام المجهر الميداني المظلم. على الرغم من أن اختبار RIBT تم تقديمه في الممارسة السريرية كاختبار محدد لمرض الزهري، إلا أنه يتطلب عمالة كثيفة ومعقدًا تقنيًا ويستغرق وقتًا طويلاً ومكلفًا في الاستخدام.

1. تاريخ طريقة RIBT

يعد اختبار تثبيت اللولبية الشاحبة (TPI) في الواقع أول اختبار محدد لتشخيص مرض الزهري. تم تقديم هذا التفاعل في عام 1949 من قبل الباحثين الأمريكيين آر دبليو نيلسون وإم إم ماير، وتمت مناقشته بالتفصيل في الأعمال العلمية في العقود اللاحقة. تم إجراء محاولات غير ناجحة لاستخدام اللولبيات الحية في الاختبارات من قبل. بفضل حقيقة أن نيلسون كان قادرًا على خلق بيئة تظل فيها اللولبيات قابلة للحياة لمدة تصل إلى 8 أيام، كان بحثه ناجحًا.

2. مبدأ طريقة RIBT

تعتمد الطريقة على ظاهرة فقدان الحركة بواسطة اللولبية الشاحبة في وجود الأجسام المضادة المضادة للتريبونيم في مصل دم الاختبار والمكمل في ظل الظروف اللاهوائية. المستضد هو اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض الحية التي تم الحصول عليها من الأرانب المصابة بشكل مصطنع بمرض الزهري.

3. إعداد اختبار RIBT

يتضمن التفاعل مصل الاختبار والمكمل والمستضد. يضاف مصل الدم للموضوع إلى اللولبية الحية التي تم الحصول عليها من أنسجة خصية الأرانب بعد العدوى الاصطناعية. إذا كانت هناك أجسام مضادة مضادة لللولبيات – مثبتات الحركة في المصل، فإن اللولبية الشاحبة تتوقف عن الحركة (ثابتة). الأجسام المضادة للإموبيليزين هي أجسام مضادة مضادة للتريبونيم متأخرة.

يتم التفاعل باستخدام الأمصال غير النشطة بالحرارة أو مع عينات من الأمصال المجففة على ورق الشمع (قطرات جافة). يتم تعطيل نشاط المصل عن طريق التسخين لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 56 درجة مئوية. قبل أخذ الدم، يجب ألا يتلقى الشخص الذي يتم فحصه أدوية، وخاصة البنسلين. يتم التوقف عن تناول الأدوية لفترة الاحتفاظ بها في الجسم.

يتم استخدام بكتيريا سلالة نيكولز التي تم الحصول عليها من التهاب الخصية الزهري للأرنب البالغ من العمر 7-10 أيام (التهاب الخصية) كمستضد. تستمر الفترة من لحظة إعداد التفاعل إلى تسجيل نتائجه من 18 إلى 20 ساعة، لذلك فإن بيئة البقاء ضرورية للحفاظ على حيوية الكائنات الحية الدقيقة وحركتها الجيدة.

يستخدم RIBT مكمل خنزير غينيا. للحصول على المكمل، يجب أخذ الدم في ظروف معقمة من عدة خنازير غينيا.

في حالة التلوث البكتيري، يتم رفض المكمل. لا يمكن استخدام المكمل المعلب في رد فعل تجميد اللولبية الشاحبة، لأنه فهي سامة للكائنات الحية الدقيقة.

يستخدم رد فعل الشلل المكملات الزائدة. تعتمد كميتها إلى حد كبير على بيئة بقاء اللولبية الشاحبة.

يتم وضع RIBT في صناديق معقمة، مشععة مسبقًا بمصباح كوارتز مبيد للجراثيم لمدة 45-60 دقيقة. يتم فحص كل مصل دم في أنبوبين اختبار: ذوي الخبرةو يتحكم. تتم إضافة مصل الاختبار والمستضد إلى كلا الأنبوبين بالكميات المطلوبة. يُسكب المكمل النشط في أنبوب الاختبار، وتُسكب نفس الكمية من مصل الدم المعطل في أنبوب التحكم. خنزير غينيا. بعد الملء، يتم خلط محتويات الأنابيب عن طريق الرج اللطيف.

يحدث RIBT في ظل الظروف اللاهوائية. يتم وضع أنابيب الاختبار التي تحتوي على المكونات في إنيروستات دقيق، حيث يتم امتصاص الهواء الجوي باستخدام مضخة تفريغ ويتم ضخ خليط الغاز من الأسطوانة (95 جزءًا من النيتروجين و5 أجزاء ثاني أكسيد الكربون). يتم وضع جهاز القياس الدقيق مع أنابيب الاختبار في منظم الحرارة (35 درجة مئوية) لمدة 18-20 ساعة.

يتم تقييم نتائج RIBT بعد إزالة الأنابيب من منظم الحرارة والإنيروستات الدقيق (أي بعد 18-20 ساعة من التجربة). باستخدام ماصة باستور، يتم تطبيق قطرة من محتويات أنبوب الاختبار على شريحة زجاجية، والتي يتم تغطيتها بغطاء ساترة وفحصها في مجهر المجال المظلم (الهدف 40، العدسة 10X). يتم فحص العديد من مجالات الرؤية في أجزاء مختلفة من التحضير، مع حساب عدد اللولبيات الشاحبة المتنقلة وغير المتحركة في كل منها. يبدأ العد بالدواء من جهاز التحكم ثم من أنبوب الاختبار.

عند إعداد التفاعل، يتم استخدام 5 دراسات مراقبة: مع أمصال دم إيجابية وسلبية بشكل واضح، مع مكمل نشط ومعطل ووسيلة بقاء لللولبية الشاحبة. تم استخدام مصل الدم السلبي للتحكم في درجة حركة اللولبية الشاحبة في هذه التجربة. السيطرة على مصل الدم الإيجابي - لتقييم درجة نشاط التثبيت في ظل ظروف هذه التجربة. يتم إجراء دراسة للمكملات النشطة وغير النشطة والبيئة لتحديد تأثيرها على حركة اللولبية الشاحبة.

إذا كان هناك نقص في المكمل في التجربة، فإن الأجسام المضادة المثبتة لا تظهر نشاطها بشكل صحيح وتظل اللولبيات متحركة. لذلك، بعد التجربة، يتم تحديد المكمل المتبقي من أجل تقييم ما إذا كانت حركة اللولبية الشاحبة في أنابيب الاختبار ناجمة عن نقص المكمل. لهذا الغرض، يتم استخدام نظام الانحلالي - خليط من تعليق كريات الدم الحمراء الأغنام والمصل الانحلالي المخفف المحفوظ في منظم الحرارة.

يتم تحديد المكمل المتبقي عن طريق إضافة نظام انحلالي إلى كل أنبوب الحجم المطلوب. يتم وضع الأنابيب في منظم الحرارة عند 37 درجة لمدة 45 دقيقة. في أنابيب الاختبار، يجب أن يحدث انحلال الدم لخلايا الدم الحمراء، وفي أنابيب التحكم يجب أن يكون هناك تأخير في انحلال الدم. يشير عدم وجود انحلال الدم في أنابيب الاختبار إلى عدم كفاية كمية المكمل، وفي هذه الحالات يجب إعادة الدراسة. لا يتم إجراء اختبار مصل الدم المتكرر إلا في حالة ملاحظة تجميد اللولبية الشاحبة بنسبة 100٪.

4. المحاسبة عن نتائج RIBT

يتم إحصاء اللولبيات المثبتة التي فقدت قدرتها على الحركة تحت المجهر باستخدام طريقة الفحص المجهري للحقل المظلم. ويشترط في الباحث أن يمتلك مهارة تقييم حركة اللولبيات. يجب عليه الانتباه إلى شدة الحركات التي تقوم بها اللولبية الشاحبة. في هذه البكتيريا، ليس من الممكن دائمًا ملاحظة تقلصات موجية وحركات انثناء، وأحيانًا حركات دورانية فقط. يجب أن تكون أيضًا قادرًا على التمييز بين الحركات النشطة للتريبونيم والحركة مع تدفق السوائل.

لتقييم نتائج التفاعل، يتم حساب نسبة تجميد اللولبيات الشاحبة، أي نسبة اللولبيات المتنقلة وغير المتحركة في التجربة (مع مكمل نشط) والسيطرة (مع مكمل غير نشط) وفقا للصيغة:

X = (م – ج)×100/م

حيث M هو عدد اللولبيات المتنقلة في عنصر التحكم؛ C هو عدد اللولبيات المتنقلة في التجربة؛ X -٪ الشلل. في العمل العملي، يتم تحديد نسبة التثبيت من خلال جدول مُعد مسبقًا باستخدام الصيغة المذكورة أعلاه.

يتم تقييم رد فعل الشلل من اللولبية الشاحبة على أنه

• إيجابيأثناء الشلل 51 - 100% اللولبية,
• إيجابية ضعيفة: 31 - 50% اللولبيات غير المتحركة،
• مشكوك فيه: 21 - 30% اللولبيات غير المتحركة،
• سلبي: 0 - 20% اللولبيات غير المتحركة.

يصبح رد فعل الشلل اللولبية الشاحبة إيجابيا في نهاية الفترة الأولية - بداية الفترة الثانوية من مرض الزهري (من الأسبوع 7-8 من لحظة الإصابة أو أكثر). ومع ذلك، فإن اختبار RIBT ليس له فائدة تذكر في تشخيص المراحل المبكرة من مرض الزهري، حيث أن الأجسام المضادة التي تثبت حركة اللولبية الشاحبة والتي يتم اكتشافها في التفاعل تظهر بعد 3-6 أسابيع فقط من الإصابة. تنتمي الأجسام المضادة لـ Immobilisin إلى فئة IgG من الغلوبولين المناعي. تظهر في الدم بعد ظهور الأجسام المضادة للكارديوليبين (الأجسام المضادة للكارديوليبين)، وبعد ظهور الأجسام المضادة للفلوريسئين (التي تم اكتشافها بواسطة RIF وELISA) والرواسب (التي تم اكتشافها عن طريق سرطان المثانة).

في المستقبل، يظل RIBT إيجابيًا. هناك حساسية عالية للتفاعل في الأشكال المتأخرة من مرض الزهري. في حالة الزهري الثانوي المتأخر، الزهري العصبي، الزهري الخلقي، يتم تسجيل نتيجة إيجابية لـ RIBT في 95-100٪ من الحالات. مع مرض الزهري الثالثي، مع آفات محددة في الأعضاء الداخلية، الجهاز العصبيعندما يكون RV سلبيًا غالبًا، فإن RIBT يعطي نتائج إيجابية في 98 - 100٪ من الحالات.

ريبت لفترة طويلةتم الاعتراف به باعتباره الاختبار الأكثر تحديدًا لمرض الزهري. وفقا للأدبيات، فإن خصوصية RIBT هي 99٪، وتتراوح الحساسية من 79 إلى 94٪. وفقًا لـ TsNIKVI، تبلغ حساسية RIBT (في المجموع لجميع مراحل مرض الزهري) 87.7٪.

7. نطاق تطبيق الطريقة

يضيق نطاق تطبيق RIBT تدريجيًا بسبب مدة التثبيت والتكلفة العالية وكثافة العمالة. RIBT هو تحليل معقد ومكلف إلى حد ما ويتطلب موظفين مؤهلين تأهيلا عاليا ووجود حظيرة. وفي هذا الصدد، انخفض استخدام هذه الطريقة بشكل ملحوظ في السنوات الأخيرة. في الولايات المتحدة، يُستخدم هذا الاختبار حاليًا فقط في مختبرات الأبحاث.

بناءً على التعقيد والتكلفة العالية لـ RIF وRIBT، فمن المنطقي استخدامها لتشخيص الأشكال المتأخرة والكامنة من مرض الزهري. يحتفظ RIBT بمكانته باعتباره "حكم رد الفعل" في التشخيص التفريقي للأشكال الكامنة المبكرة من مرض الزهري والنتائج الإيجابية الكاذبة. قد يكون هذا التفاعل مفيدًا في تشخيص الزهري العصبي وعندما تكون نتائج الاختبارات المصلية الأخرى متعارضة.

يصبح RIBT موجبًا في وقت لاحق بكثير من RIF وRV. ولذلك، لا يستخدم لتشخيص الأشكال المعدية من مرض الزهري.

يتم إلغاء RIBT، مثل RIF، ببطء شديد أثناء العلاج المضاد للزهري. ونتيجة لذلك، فهو غير مناسب لرصد التقدم المحرز في العلاج المضاد للزهري.

النتائج الإيجابية الكاذبة (FPR) مع RIBT نادرة ولوحظت بشكل رئيسي في عدد من اللولبيات (الداء العليقي، البنتا، البجل)، والتي لا توجد في روسيا، وكذلك في الجذام، الساركويد، مرض الذئبة الحمراء، السل، تليف الكبد. الكبد وبعض الأمراض النادرة الأخرى ذات الطبيعة غير الزهري. مع تقدم عمر المرضى، يزداد عدد نتائج RIBT الإيجابية الكاذبة.

قد يكون اختبار RIBT إيجابيًا كاذبًا إذا كان مصل الاختبار يحتوي على مواد مبيدة لللولبيات (على سبيل المثال، البنسلين، التتراسيكلين، الإريثروميسين)، والتي تسبب تجميدًا غير محدد لللولبية الشاحبة، قد يكون هذا نتيجة لتناول المريض المضادات الحيوية المبيدة لللولبيات، لذلك لا يتم إجراء الفحص للأشخاص الذين تلقوا المضادات الحيوية خلال الشهر الماضي. يمكن اختبار الدم الخاص بـ RIBT في موعد لا يتجاوز أسبوعين بعد الانتهاء من تناول المضادات الحيوية والأدوية الأخرى المضادة للزهري.

9. تعديلات على رد فعل الشلل اللولبية الشاحبة

بالإضافة إلى تقنية الإيروستات الدقيقة، هناك طريقة مزيج من RIBT وفقًا لـ N.M. أوفتشينيكوف. يتم إنشاء الظروف اللاهوائية عند إعداد التفاعل عن طريق وضع الخليط المتفاعل في ميلانجر (خلاط الكريات البيض)، ويتم إغلاق طرفيه بحلقة مطاطية. تتيح لك تقنية تفاعل المزيج الاستغناء عن مضخة فراغ أو أسطوانة تحتوي على خليط من النيتروجين وثاني أكسيد الكربون أو منفاخ دقيق. أسفرت دراسة مقارنة على مادة سريرية كبيرة عن نتائج ليست أقل شأنا من تقنية التحليل الهوائي الكلاسيكية.

10. مميزات ومزايا وعيوب RIBT

RIBT هي طريقة تشخيصية معقدة ومكلفة من الناحية الفنية. تتطلب هذه التكنولوجيا أموالاً كبيرة للحفاظ على الأرانب وإجراء الاختبارات. يُستخدم هذا الاختبار الذي يتطلب عمالة مكثفة حاليًا بشكل أساسي للأغراض العلمية. في الغالبية الدول الأجنبيةمنذ ما يقرب من 40 عاما، تم استخدام RIBT عمليا ليس لأغراض التشخيص، ولكن فقط في العمل البحثي.

مساوئ رد الفعل:

• يتطلب RIBT العمل مع اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض الحية من سلالة نيكولز، والتي تظل معدية للبشر على الرغم من التكيف مع الأرانب
• يعد تنظيم التفاعل أمرًا معقدًا ويستغرق وقتًا طويلاً ومكلفًا
• مطلوب حظيرة
• مطلوب موظفين مؤهلين تأهيلاً عاليًا لإعداد التفاعل وتسجيل النتائج وصيانة الحوض
• موضوعية تقييم النتائج
• عدم وجود الأتمتة
• ليس من الممكن توحيد هذه الطريقة المصلية.
• رد الفعل لا ينطبق على خلفية العلاج المضاد للزهري المستمر
• عدم القدرة على استخدامها للسيطرة على العلاج. يمكن أن يظل اختبار RIBT لدى مرضى الزهري إيجابيًا لسنوات عديدة (وحتى مدى الحياة)، على الرغم من تلقي العلاج الكامل.
• قد يعطي رد الفعل ايجابيات مزيفةفي المرضى الذين يعانون من الأورام الخبيثة والسكري والجذام وأمراض المناعة الذاتية والالتهاب الرئوي وأمراض القلب والأوعية الدموية الشديدة.

مزايا RIBT هي:

1) حساسية عالية بما فيه الكفاية؛

2) خصوصية عالية.

RIF (رد فعل المناعي)

يعد التفاعل المناعي (RIF) طريقة تشخيصية سريعة لتحديد المستضدات الميكروبية أو تحديد الأجسام المضادة. تعتبر الاختبارات المعتمدة على الكشف عن إشارة الفلورسنت واحدة من أفضل الاختبارات لمرض الزهري.

1. تاريخ الطريقة

تم تطوير اختبار الأجسام المضادة اللولبية الفلورية (FTA) لأول مرة في عام 1957 من قبل ديكون ومؤلفين مشاركين (ديكون، فالكون وهاريس).

2. مبدأ الطريقة

تعتمد طريقة RIF على حقيقة أن مستضدات الأنسجة أو الميكروبات المعالجة بالأمصال المناعية باستخدام الأجسام المضادة الموسومة بالفلوروكرومات قادرة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية للمجهر الفلوري. تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة المعالجة بمثل هذا المصل المضيء على طول محيط الخلية على شكل حدود خضراء

كمستضد في RIF، يتم استخدام معلق من سلالة اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض نيكولز من التهاب خصية الأرانب، والذي يتم تجفيفه على شريحة زجاجية وتثبيته بالأسيتون. يضاف مصل دم المريض إلى اللولبية الشاحبة، ويجفف ويثبت في الزجاج باستخدام الأسيتون.

بعد الغسيل، تتم معالجة الدواء بمصل يحتوي على أجسام مضادة ضد الغلوبولين المناعي البشري المسمى بالفلورسين. يتم غسل المستحضر مرة أخرى وفحصه تحت مجهر الفلورسنت. إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة فلوريسئين مضادة لللولبيات، فسيتم ملاحظة توهج أصفر-أخضر للتريبونيمات.

3. طريقة إجراء البحث باستخدام طريقة RIF

تتم معالجة المستضد المثبت على شريحة زجاجية (اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض) بمصل الاختبار. بعد الغسيل، تتم معالجة الدواء بمصل الفلورسنت ضد الغلوبولين المناعي البشري، الموسوم بالفلوروكروم. في هذه الحالة، يرتبط مركب الفلورسنت الناتج (الجلوبيولين المضاد للإنسان + ثيويزوسيانات الفلورسين) بالجلوبيولين البشري على سطح اللولبية الشاحبة، مما يضمن توهج اللولبية الشاحبة تحت المجهر الفلوري.

للكشف عن مجمعات الأجسام المضادة للمستضد، يتم استخدام مصل الانارة الذي يمثل الغلوبولين المناعي المضاد للأنواع (المضادة للإنسان) المترافق مع FITC. يتم تحديد وجود الأجسام المضادة للتريبونيمات في المصل من خلال توهج اللولبيات عند فحصها تحت المجهر الفلوري. يتم إجراء الاختبار في الإصدارات النوعية وشبه الكمية.

4. المحاسبة عن النتائج

يتم تصور نتائج RIF باستخدام مجهر مضان. يتم تقييم النتائج من خلال درجة تلألؤ اللولبيات أثناء التحضير. في وجود الأجسام المضادة، يكون وهج اللولبيات مرئيًا، ولكن إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مضادة لللولبيات في المصل، فإن اللولبيات تكون غير مرئية. تتم الإشارة إلى درجة تألق اللولبية اللولبية الشاحبة المجففة المثبتة على الزجاج بعلامة "الإيجابيات" (من "-" إلى "++++"). النتيجة السلبية - لا يوجد توهج أو مستوى الخلفية - 1+.

5. في أي فترات المرض يكون من الأفضل استخدامه

يعد تفاعل التألق المناعي (RIF) حساسًا جدًا في جميع مراحل العدوى، بدءًا من نهاية فترة الحضانة وحتى مرض الزهري المتأخر. تبدأ الفترة الأولية لمرض الزهري في المسار الكلاسيكي بعد 3-4 أسابيع من الإصابة. يصبح RIF إيجابيًا في الأيام الأولى من الفترة الأولية أو حتى في نهاية فترة الحضانة، اعتبارًا من الأسبوع الثالث بعد الإصابة. تظل نتائج RIF إيجابية في جميع الفترات، بما في ذلك الأشكال المتأخرة.

يصبح RIF موجبًا في وقت مبكر قليلاً عن RV. وفقا لبعض البيانات، يحدث RIF إيجابيا في 80٪ من المرضى الذين يعانون من مرض الزهري المصلي الأولي. في الفترة الثانوية، يكون RIF إيجابيًا في حوالي 100٪ من الحالات. يكون دائمًا إيجابيًا في مرض الزهري الكامن ويعطي نتائج إيجابية بنسبة 95 - 100٪ في الأشكال المتأخرة من المرض والزهري الخلقي.

6. الحساسية والنوعية

تفاعل التألق المناعي (RIF) عبارة عن مجموعة من الطرق ذات الحساسية والنوعية العالية. يعتبر RIF حساسًا في جميع مراحل العدوى، بدءًا من فترة الحضانة وحتى مرض الزهري المتأخر. وفقا لمنظمة الصحة العالمية، فإن حساسية RIF لمرض الزهري الأولي هي 70-100٪، للزهري الثانوي والمتأخر - 96-100٪، والنوعية - 94-100٪. وفقًا لـ TsNIKVI، تبلغ حساسية RIF لجميع أشكال مرض الزهري 99.1٪.

يمكن زيادة خصوصية RIF عن طريق المعالجة المسبقة لمصل الاختبار باستخدام مستضد اللولبيات بالموجات فوق الصوتية الذي يربط الأجسام المضادة للمجموعة (RIF-abs).

7. نطاق تطبيق الطريقة

يتم تطبيق RIF:

• كرد فعل تأكيدي في مرض الزهري الكامن المبكر
• عند إنشاء التشخيص بأثر رجعي
• للتمييز بين الأشكال الكامنة من مرض الزهري ونتائج الاختبارات الإيجابية الكاذبة لمرض الزهري.
• كاختبار تأكيدي للزهري العصبي.

يُستخدم اختبار RIF على نطاق واسع كاختبار تأكيدي، ولكنه ليس مخصصًا للاستخدام الروتيني أو الفحص نظرًا لصعوبة تنفيذه من الناحية الفنية. لإجراء RIF، من الضروري أن يكون لديك حظيرة أو الحصول على تعليق من اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض، مما يحد من إمكانيات التفاعل. ومع ذلك، في السنوات الأخيرة، بدأت أنظمة الاختبار في الظهور في السوق المحلية، مما يسمح بإجراء التفاعل في حالة عدم وجود حظيرة وسلالة معملية خاصة بها من اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض.

8. مصادر وأسباب الأخطاء أثناء الإنتاج والنتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة

تعد LPRs نادرة عندما يتم تشخيص RIF (في داء الكولاجين والبوريليات).

ولا يزال اختبار RIF يعتبر واحدًا من أفضل اختبارات مرض الزهري، وهو "المعيار الذهبي" للتشخيص المصلي. يعد إعداد RIF أسهل من إعداد RIBT،

على الرغم من قيمته التشخيصية العالية، فإن إدخال RIF على نطاق واسع في الممارسة اليومية يعوقه الحاجة إلى استخدام T. pallidum الحي، والتكلفة العالية ومدة الدراسة. إعداد رد الفعل يتطلب عمالة مكثفة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن تقييم نتائج إطار الإطار التنظيمي هو أمر ذاتي.

مزايا الريفو RIBT هي:

1) حساسية عالية (خاصة بالنسبة لـ RIF)؛

2) خصوصية عالية (خاصة بالنسبة لـ RIBT).

عيوب RIFو ريبت:

1) التعقيد الفني وارتفاع تكلفة الأساليب.

2) ذاتية تقييم النتائج، وعدم وجود الأتمتة؛

3) يمكن أن يظل RIF و RIBT في المرضى الذين يعانون من مرض الزهري إيجابيين لسنوات عديدة (وحتى مدى الحياة)، على الرغم من تلقي العلاج الكامل. ولذلك، لا يمكن استخدام هذه التفاعلات لمراقبة العلاج.

10. تعديلات الطريقة

من الناحية العملية، تم استخدام العديد من التعديلات على تفاعل التألق المناعي في التشخيص المصلي لمرض الزهري:

• ريف-عبس– الطريقة الأكثر حساسية للتشخيص المصلي لمرض الزهري، تصبح إيجابية في وقت أبكر من ردود الفعل الأخرى (من الأسبوع الثالث من الإصابة)؛
• ريف-200(يتم تخفيف مصل المريض 200 مرة عند التشخيص) – وهي طريقة محددة للغاية للتشخيص المصلي لمرض الزهري.
• ريف-10(تخفيف مصل الاختبار 10 أضعاف) هو أسلوب أكثر حساسية من RIF-200.
• ريف-tsنفذت مع الخمور.
• RIF-abs-IgM- الكشف المبكر عن الأجسام المضادة للتريبونيم من فئة IgM.

1. التعديل الأكثر انتشارا هو ريف-عبس- تفاعل التألق المناعي مع الامتصاص. قبل إجراء التفاعل، يتم استنزاف مصل المريض بخليط من اللولبيات غير المسببة للأمراض للقضاء على التفاعلات المتصالبة. تتم إزالة الأجسام المضادة الجماعية من مصل الاختبار باستخدام اللولبيات الثقافية التي تم تدميرها بواسطة الموجات فوق الصوتية، مما يزيد بشكل كبير من خصوصية التفاعل. نظرًا لاستخدام مصل الاختبار في تخفيف بنسبة 1:5، فإن RIF-abs حساس للغاية.

المؤشرات الرئيسية لاستخدام RIF-abs في الممارسة السريرية هي:

• تشخيص الأشكال الكامنة والمتأخرة من مرض الزهري ،
• تحديد النتائج الإيجابية الكاذبة للمسؤولية الاجتماعية للشركات وسرطان المثانة، وخاصة عند النساء الحوامل والمرضى الجسديين المشتبه في إصابتهم بمرض الزهري،
• لإنشاء تشخيص بأثر رجعي للمرض.

لا يعد RIF-abs مفيدًا جدًا عند تقييم نتائج العلاج: في 85٪ من المرضى الذين تلقوا علاجًا مناسبًا مضادًا للزهري، تستمر النتائج الإيجابية لـ RIF لسنوات عديدة.

يسمى هذا التفاعل "المعيار الذهبي" للتشخيص المصلي لمرض الزهري. يتم استخدامه في حالات التحكيم، ولكن للحصول على نتيجة موثوقة، يلزم تعليق مركز جديد لسلالة T. pallidum Nichols من التهاب الخصية لمدة سبعة أيام في الأرنب، والذي لا يمكن تجميده.

2. في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية تم تثبيته في تعديلين - ريف-10و ريف-200أي مع تخفيف مصل الاختبار بمقدار 10 و 200 مرة. RIF-200 - يتم تخفيف مصل الاختبار 200 مرة لتقليل عدد النتائج الإيجابية الكاذبة. وهذا يوفر خصوصية عالية للتفاعل، ولكن حساسيته تنخفض إلى حد ما. يعتبر RIF-10 أكثر حساسية، ولكنه يعطي في كثير من الأحيان نتائج إيجابية غير محددة من RIF-200، وهو محدد للغاية. RIF-10 أكثر حساسية، وRIF-200 وRIF-abs أكثر تحديدًا.

تقدر حساسية RIF-200 وRIF-abs بـ 84-99%، والنوعية 97-99%.

3. ريف-tsنفذت مع الخمور. يتم إجراء التفاعل باستخدام السائل النخاعي الكامل لتحديد آفات معينة في الجهاز العصبي المركزي.

4. رد الفعل RIF-abs-IgMمقترح للكشف المبكر عن الأجسام المضادة للتريبونيم من فئة IgM. يمكن استخدام هذا التفاعل لتشخيص مرض الزهري الخلقي، والأشكال المبكرة من مرض الزهري تشخيص متباينحالات الإصابة مرة أخرى والانتكاس المصلي.

هناك تعديلان معروفان لهذا التفاعل:

– FTA-ABS-IgM، استنادًا إلى الاستخدام في المرحلة الثانية من تفاعل اتحاد IgM (الأجسام المضادة التي تحمل علامة الفلورسين مع IgM البشري) بدلاً من الجلوبيولين الفلوري المضاد للإنسان؛

- النسخة الروسية من RIF-abs-IgM، وتتميز بإضافة مادة ماصة إلى مصل الدم الذي يتم اختباره لإزالة الأجسام المضادة IgG، ويتم إعطاء RIF-abs مع الأجسام المضادة IgM المتبقية.

المؤشرات الرئيسيةلاختبار RIF-abs-IgM هي:

– التشخيص المصلي لمرض الزهري الخلقي في غياب المظاهر الواضحة لمرض الزهري الخلقي على الجلد والأغشية المخاطية لدى الطفل.

- التشخيص التفريقي للعدوى مرة أخرى والانتكاس السريري المصلي أو المصلي لمرض الزهري، حيث يكون RIF-abs-IgM سلبيًا، ويكون RIF-abs إيجابيًا؛

– تقييم فعالية العلاج لمرض الزهري المكتسب المبكر أو الخلقي: بعد العلاج المناسبيصبح RIF-abs-IgM سلبيًا خلال 3-6 أشهر القادمة.

يمكن استخدام هذا التفاعل للكشف عن مرض الزهري الخلقي. ومن المعروف أن جزيئات IgM الكبيرة لا يمكنها المرور عبر المشيمة السليمة. وبالتالي، يمكن أن تظهر الأجسام المضادة من الفئة M ضد اللولبية الشاحبة في جسم الطفل إما بسبب انتهاك وظيفة حاجز المشيمة، أو يتم إنتاجها بواسطة جسم طفل مصاب بمرض الزهري. تظهر الأجسام المضادة من فئة IgM في دم مريض الزهري بالفعل في الأسابيع الأولى من المرض، وتظهر الأجسام المضادة من فئة IgG لاحقًا. تبين أن التحديد المنفصل للأجسام المضادة من كلا الفئتين مفيد للغاية في تشخيص مرض الزهري الخلقي لدى الأطفال، حيث أن وجود الأجسام المضادة من فئة IgM لدى الطفل في الشهر الأول من العمر سيشير إلى أنها تتشكل في جسم طفل مصاب بمرض الزهري ، في حين أن اكتشاف الأجسام المضادة IgG فقط سيشير إلى أصل هذا الأخير.

إعداد رد الفعل 19S (IgM) -RIF- القيمة المطلقةيتضمن الفصل الأولي باستخدام الترشيح الهلامي لجزيئات IgM 19S الأكبر حجمًا

كسور من جزيئات 7S IgG الأصغر. مزيد من الدراسة حول تفاعل RIF-abs لمصل الدم الذي يحتوي فقط على جزء 19S IgM،

يزيل جميع مصادر الأخطاء المحتملة. لكن تقنية تنظيم هذا التفاعل معقدة وتتطلب عمالة مكثفة، وتتطلب معدات خاصة وتدريبًا متخصصًا.

تفاعل الالتصاق المناعي (RIP، TPIA - التماسك المناعي للولبية الشاحبة).

يعتمد رد الفعل هذا على استخدام الظاهرة التي وصفها ريكينبرج في عام 1912. يعتمد RIP على حقيقة أن اللولبية النسيجية الخبيثة، التي يتحسسها مصل مريض الزهري، في وجود المتممات وكريات الدم الحمراء، تلتصق بسطح كريات الدم الحمراء، وأثناء الطرد المركزي، يتم نقلها بعيدًا إلى الرواسب، وتختفي. من طاف.

لإعداد التفاعل، يتم استخدام المكونات التالية: مصل الاختبار، المستضد، المكمل، خلايا الدم الحمراء المانحة، محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. يتم استخدام معلق من سلالة اللولبية الشاحبة نيكولز كمستضد.

تمت دراسة هذا الاختبار على نطاق واسع فيما يتعلق بالتشخيص المصلي لمرض الزهري من قبل مؤلفين محليين وأجانب في الخمسينيات والستينيات. كانت الأدلة المتعلقة بقيمة RIP كاختبار تشخيصي غير متسقة. يتطلب التفاعل أقصى قدر من الدقة، نظرًا لأن التوزيع غير الدقيق للمكونات أو زيادة أو نقص مادة الاختبار في المستحضر أدى إلى نتائج غير موثوقة.

في روسيا، أجرى L.V. سازونوف، الذي حصل على نتائج مماثلة في RIP وRIT باستخدام معلق طازج من سلالة اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض نيكولز. ومع ذلك، فإن استخدام المستضد الساخن أو المحفوظ بالفينول شوه نتائج التفاعل بشكل حاد وجعل المستضد غير مستقر. يوصي بهذا الاختبار ليحل محل RIT L.V. اعتبرت سازونوفا ذلك مستحيلاً.

ج.ب. حصلت Avdeeva، بعد أن استخدمت أنظمة درجة حرارة ووقت أخرى في إنتاج المستضد، على نتائج مختلفة عند دراسة RIP. وفقا لبياناتها، فإن حساسية رد الفعل هذا أعلى من حساسية KCP وRIT، ولكنها أدنى إلى حد ما من RIF، وخصوصية RIP وRIT وRIF قريبة.

ومع ذلك، فإن نقص الإنتاج الصناعي للمستضد الخاص بـ RIP لم يسمح بدراسة هذا الاختبار على نطاق أوسع وإدخاله موضع التنفيذ.

تفاعل التراص الدموي السلبي RPHA

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA)هو اختبار مصلي شائع راسخ في الممارسة المعملية. يتمتع بمستوى عالٍ إلى حد ما من الكفاءة في البحث.

1. تاريخ طريقة RPGA

لأول مرة، تم الإبلاغ عن استخدام RPHA لتشخيص مرض الزهري بواسطة G. Blumental وW. Bachman (1932). في عام 1965، تم اقتراح اختبار التراص الدموي غير المباشر أو السلبي لتشخيص مرض الزهري. تم الإبلاغ عن تعديل التفاعل باستخدام مستضدات مختلفة بواسطة Ratlev T. في 1965 - 1967. تم اقتراح التعديل الدقيق لـ RPGA بواسطة Sokh R.M. والمؤلفون المشاركون في عام 1969. تم تطوير أول نظام اختبار تجاري من قبل العلماء اليابانيين Tomisava et. آل. في عام 1969

2. مبدأ طريقة RPGA

من تعليق متجانس محضر من كريات الدم الحمراء "المحملة" بالمستضدات، عند إضافة مصل الاختبار الذي يحتوي على أجسام مضادة، يترسب راسب على شكل رقائق. ويتكون الراسب الناتج من خلايا الدم الحمراء "الملتصقة ببعضها البعض" بالأجسام المضادة، ويسمى "هيماجلوتينات". يتم إعداد معلق خلايا الدم الحمراء مسبقًا ويتم توفيره كجزء من أنظمة الاختبار التشخيصي.

عملية لصق خلايا الدم الحمراء التي تحتوي على مستضدات على سطحها تسمى "التراص الدموي". يحدث الترابط تحت تأثير أجسام مضادة معينة (الراصات). يسمى رد الفعل "سلبي"، لأن لا تتفاعل مستضدات كريات الدم الحمراء الخاصة، وتؤدي كريات الدم الحمراء نفسها وظيفة مؤشر مساعدة حصريًا.

تفاعل التراص الدموي السلبي (غير المباشر) هو نوع من تفاعل التراص الذي تستخدم فيه كريات الدم الحمراء (من الكلمة اليونانية háima - الدم)، وليس الجزيئات الأخرى، كحاملات للمستضد. بشكل عام، في تفاعل التراص، وتحت تأثير الأجسام المضادة، تلتصق الميكروبات أو الخلايا الأخرى معًا وتترسب - وليس بالضرورة خلايا الدم الحمراء، ولكن، على سبيل المثال، جزيئات اللاتكس أو البكتيريا أو الجزيئات الجسيمية الأخرى الحاملة للمستضد.

في تفاعل التراص الدموي السلبي لتشخيص مرض الزهري، يتم استخدام كريات الدم الحمراء في الأغنام أو الطيور المغلفة بمستضدات اللولبية الشاحبة كمستضد. عند إضافة مصل يحتوي على أجسام مضادة محددة، تلتصق خلايا الدم الحمراء ببعضها البعض (التراص).

ويشار إلى رد فعل RPHA باسم الطرق المناعية، لأن لأنه يعتمد على التفاعل المحدد لمستضد اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض مع الجسم المضاد. وفقًا لـ "نظرية الشبكة"، فإن التراص هو نتيجة "الارتباط المتقاطع" لجزيئات المستضد السطحي مع جزيئات الجسم المضاد (الجلوبيولين المناعي).

3. إعداد تفاعل التراص الدموي السلبي

يتم وضع RPGA في أقراص بلاستيكية أو في أنابيب اختبار مع تخفيفات من مصل دم المريض، والتي يضاف إليها تشخيص كريات الدم الحمراء.

تسمى عملية دمج المستضد مع كريات الدم الحمراء بالتحسس، ويسمى المستضد الكري الاصطناعي الذي يتم الحصول عليه بهذه الطريقة بكريات الدم الحمراء المحسسة. يُطلق على تشخيص خلايا الدم الحمراء اسم خلايا الدم الحمراء الحساسة لمستضد.

لتحضير التشخيص، يتم استخدام كريات الدم الحمراء المأخوذة من الأغنام أو الطيور (عادةً الدجاج)، والتي تمت معالجتها أولاً بالفورمالدهيد ثم التانين، والتي يتم توعيتها بمستضد الموجات فوق الصوتية لللولبية الشاحبة المسببة للأمراض (سلالة نيكولز) أو بروتينات اللولبية الشاحبة المؤتلفة (TpN15، TpN17، TpN47). يمكن أيضًا استخدام كريات الدم الحمراء في الأغنام المتحسسة بمستضد الموجات فوق الصوتية لللولبية الشاحبة المزروعة.

يتم اختبار المصل فقط (لا تستخدم بلازما الدم). العينات المتحللة والعكرة ليست مناسبة. تعمل كريات الدم الحمراء غير الحساسة كعنصر تحكم سلبي (لاستبعاد وجود الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء). في كل سلسلة من الإنتاجات، يتم استخدام الضوابط الإيجابية والسلبية.

تتم إضافة عينات من مصل دم الاختبار وخلايا الدم الحمراء الاختبارية إلى فتحات (آبار) القرص المناعي. إذا كان مصل دم المريض يحتوي على أجسام مضادة محددة مضادة للتريبونيم، فعند إضافة مصل الاختبار إلى البئر مع المستضد، يحدث تكوين مجمعات الأجسام المضادة للمستضد المرتبطة بسطح الناقلات (كريات الدم الحمراء). بصريا، يتجلى ذلك من خلال لصق خلايا الدم الحمراء، أي تراص الدم، وهو ما يمكن رؤيته بالعين المجردة. تتوزع المجمعات المناعية "الأجسام المضادة - المستضدات - كريات الدم الحمراء" التي تسقط تدريجياً تحت تأثير الجاذبية على كامل سطح قاع الحفرة وتشكل صورة مميزة لـ "المظلة المقلوبة".

اعتمادًا على كمية الأجسام المضادة الموجودة في عينة الاختبار، تختلف صورة "المظلة المقلوبة" من الحد الأقصى، الذي يشغل كامل سطح قاع البئر، إلى مساحة صغيرة في الجزء الأوسط الأدنى (مع خلوص في المركز وتشكيل حلقة أكثر كثافة من خلايا الدم الحمراء المستقرة على المحيط).

لا تتشكل المجمعات المناعية في حالة عدم وجود أجسام مضادة محددة في العينة أو عند إضافة خلايا الدم الحمراء الضابطة (السليمة) إلى التفاعل. وفي الوقت نفسه، تتجمع خلايا الدم الحمراء تدريجياً عند أدنى نقطة في قاع الحفرة، لتشكل شكلاً على شكل بقعة مدمجة أو "زر"، وأحياناً مع خلوص طفيف في المركز.

إذا كان مصل دم الشخص يحتوي على أجسام مضادة لكريات الدم الحمراء، فسوف تتشكل "مظلة" على أي حال - سواء كرد فعل مع كريات الدم الحمراء الاختبارية أو مع كريات الدم الحمراء الخاضعة للتحكم. في هذه الحالة، يوصى باستخدام تقنيات طبية أخرى لتحديد أجسام مضادة محددة مضادة للتريبونيم.

من الممكن حدوث ظاهرة البروزون (استحالة التفاعل بسبب زيادة الأجسام المضادة) ويمكن القضاء عليها عن طريق تخفيف المصل.

4. حساب نتائج تفاعل التراص الدموي السلبي

يتم أخذ نتائج RPGA في الاعتبار بصريًا بعد 60-120 دقيقة عند إعداد الطريقة الدقيقة وبعد 2-4 ساعات أو في اليوم التالي عند إعداد الطريقة الكلية. عند استخدام كريات الدم الحمراء الأكبر حجمًا (المنوية) في الطيور، يتم الحصول على صورة أكثر وضوحًا، ويتم تسجيل النتائج في وقت مبكر.

من الممكن تحديد العيار (عيار مرتفع RPHA ≥ 1:2 560).

يتم تقييم نتائج الدراسة باستخدام نظام 4+ (من "-" إلى "++++") بناءً على حجم الفيلم المتكون. عند حدوث التراص، تتواجد خلايا الدم الحمراء على سطح الثقب على شكل “مظلة”، وإذا كانت النتيجة سلبية، تنزلق خلايا الدم الحمراء بحرية إلى الأسفل وتتراكم في القاع في وسط الثقب في على شكل "زر".

التقييم المقبول عمومًا لنتائج RPGA:

4+ - RPHA إيجابي. خلايا الدم الحمراء الملتصقة على شكل "مظلة" تصطف بالتساوي على كامل سطح الحفرة.

3+ - آر بي جي إيه إيجابي. تصطف خلايا الدم الحمراء على كامل سطح الثقب، لكن بعضها "ينزلق" إلى المركز. في هذه الحالة، يتم تشكيل حلقة ملحوظة على طول محيط الرواسب؛

2+ - RPHA إيجابي ضعيف. تشكل خلايا الدم الحمراء غشاءً على مساحة صغيرة من الجزء السفلي من الحفرة، لتشكل حلقة كثيفة من رواسب خلايا الدم الحمراء مع خلوص ملحوظ في المركز؛

1+ - RPHA غير محدد، تشكل خلايا الدم الحمراء رواسب فضفاضة في قاع البئر مع حواف غير واضحة وتجويف طفيف في المركز؛

(-) - RPGA سلبي، جميع خلايا الدم الحمراء تقع في قاع البئر على شكل رواسب مدمجة ("أزرار" أو حلقات) على خلفية محيطة نظيفة (بدون رواسب حبيبية محيطة).

في الممارسة الأجنبية، يتم تقييم نتائج RPGA أيضًا على أنها تفاعلية (في حالة التكوين المتراص)، ومتفاعلة بشكل ضعيف (إذا كانت التكوينات غير مهمة) وغير تفاعلية (إذا لم يتم ملاحظة التراص).

يمكن تسجيل نتائج التفاعل تلقائيًا باستخدام أجهزة تحليل خاصة. بالإضافة إلى البحث النوعي، توفر جميع أنظمة الاختبار تحليلًا كميًا مع تحديد العيار.

5. في أي فترات المرض يكون من الأفضل استخدام RPHA؟

يصبح RPHA إيجابيًا في منتصف الفترة الأولية (7-8 أسابيع من لحظة الإصابة، 3-4 أسابيع بعد ظهور القرحة) ويظل إيجابيًا لسنوات بعد العلاج.

مع وجود مستوى عالٍ جدًا من الأجسام المضادة لللولبية في مصل الاختبار (وهو الأكثر شيوعًا لمرض الزهري الثانوي)، فمن الممكن الحصول على نتيجة سلبية كاذبة لـRPGA (ما يسمى بظاهرة "prozone").

يتم اكتشاف أجسام مضادة معينة من الراصات في دم الأشخاص الذين أصيبوا بمرض الزهري لفترة طويلة، لذلك لا يمكن التوصية بـ RPGA للتشخيص التفريقي للعدوى مرة أخرى أو تحديد شدة العملية المعدية.

لا يتم استخدام RPGA للتحكم في العلاج، لأنه قد تظل إيجابية لسنوات عديدة بعد الشفاء. وفي الوقت نفسه، يمكن استخدامه كطريقة إضافية (لسرطان المثانة أو لـ RPR) في مراقبة فعالية العلاج من خلال دراسة ديناميكيات الانخفاض في عيارات الأجسام المضادة. والشرط الأساسي لذلك هو استخدام نفس نظام اختبار RPGA كما هو الحال أثناء الفحص الأول (قبل العلاج) للمريض، وكذلك الاختبار في نفس المختبر.

6. حساسية وخصوصية RPGA

يعتبر اختبار RPGA اختبارًا حساسًا ومحددًا للغاية. يعد هذا التفاعل بمثابة اختبار تشخيصي قيم لجميع أشكال مرض الزهري، ولكنه حساس بشكل خاص في الأشكال المتأخرة من المرض. اعتمادا على مرحلة المرض، تختلف حساسية RPGA. مع مرض الزهري الأولي، تبلغ حساسية RPGA 76٪ (وأعلى)، مع مرض الزهري الثانوي - ما يصل إلى 100٪. في مرض الزهري المبكر الكامن - 97٪، في مرض الزهري المتأخر - 94٪، مع خصوصية 98-100٪. أكثر حساسية منخفضةفي الأشكال الطازجة من المرض يتم تفسيره من خلال التكوين اللاحق للراصات.

وفقًا لمؤسسة الدولة "TsNIKVI Roszdrav"، بلغت حساسية RPGA في تشخيص أشكال مختلفة من مرض الزهري 99.4٪. لاحظ معظم الباحثين خصوصية RPHA بنسبة 98-99%.

من حيث الحساسية والنوعية، فإن RPGA ليس أقل شأنا، وفي الأشكال المتأخرة والزهري الخلقي فهو متفوق على RIF وRIBT.

7. نطاق تطبيق طريقة RPGA

يمكن استخدام RPGA كاختبار فحص وتأكيد؛ يمكن استخدامها في نسخة شبه كمية مع حساب عيار الأجسام المضادة. لقد تم تطوير طريقة كمية لتحديد مرحلة RPHA، وهي طريقة دقيقة، بالإضافة إلى تفاعل التراص الدقيق الآلي.

8. مميزات ومزايا وعيوب لعبة RPGA

وفقًا للأدبيات، احتلت RPGA باستمرار مكانة رائدة في الممارسة السريرية في معظم دول العالم. RPGA هو الاختبار الأكثر استخدامًا على نطاق واسع في عيادات الأمراض المنقولة بالاتصال الجنسي في الخارج.

تتميز تقنية RPGA بسهولة تنفيذها ولا تتطلب معدات خاصة: كل ما تحتاجه هو لوحة التراص الدموي. البحث لا يستغرق وقتاً طويلاً؛ رد الفعل حساس للغاية ومحدد. وقد أظهر اختبار هذه الطريقة في الممارسة السريرية أنها بسيطة للغاية ورخيصة الثمن وحساسة. مثل ELISA، فإن RPGA سهل الأداء، ولا يتطلب موظفين مؤهلين تأهيلا عاليا ومعدات خاصة، كما أن تشغيله آليا ممكن.

مزايا اختبار RPGA:

• سهلة الإعداد والتفسير،
• لا يتطلب معدات خاصة،
• الوقت للحصول على النتائج - 45 دقيقة،
• مناسبة للفحص الشامل (يلزم فقط 25 ميكرولتر من المصل المخفف بنسبة 1:20)،
• درجة عالية من التوحيد،
• وجود الضوابط الداخلية،
• صلاحية طويلة،
• سعر مقبول
• إمكانية أتمتة المحاسبة.

تجدر الإشارة أيضًا إلى عيوب RPGA:

• إمكانية حدوث تفاعلات غير محددة في وجود الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء،
• عدم وجود علاقة بين عيار ومرحلة مرض الزهري،
• إيجابية رد الفعل في وقت لاحق في المراحل المبكرة من مرض الزهري ،
• احتمال حدوث ردود فعل إيجابية كاذبة لدى الأشخاص الذين يتعاطون الكحول أو مدمني المخدرات
• حساسية للاهتزاز ودرجة الحرارة في المختبر.

مزايا RPGA مقارنة بـ RIBT وRIF هي:

• استخدام أنظمة الاختبار الصناعي،
• إمكانية أتمتة التفاعل،
• ليست هناك حاجة للعمل مع اللولبية الشاحبة الحية،
• ليست هناك حاجة للحظيرة.

9. مصادر وأسباب الأخطاء عند تنفيذ RPGA والنتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة

يعد اختبار التراص الدموي السلبي اختبارًا بسيطًا نسبيًا؛ عند القيام بذلك، من الضروري اتباع جميع توصيات الشركات المصنعة للتشخيص وقواعد العمل في مختبر التشخيص السريري. يمكن أن تؤدي الأخطاء التي تم ارتكابها إلى ظهور وتسجيل نتائج التفاعل السلبية والإيجابية الكاذبة. قد تكون نتائج RPGA الإيجابية الكاذبة نتيجة لتأثير العوامل البشرية والبيولوجية.

من الممكن الحصول على نتائج إيجابية كاذبة

• عند دراسة أمصال الدم للمرضى الذين يعانون من اللولبيات غير التناسلية،
• بسبب عامل الروماتويد
• بسبب تفاعل الأجسام المضادة مع المستضد اللولبي، الذي يتكون أثناء الاضطرابات الأيضية الجهازية أو الناجمة عن الأدوية المختلفة،
• بسبب مستويات غير طبيعية من الغلوبولين المناعي.
• عند الأطفال حديثي الولادة - بسبب تكوين الأجسام المضادة IgM في جسم الجنين أو الطفل لـ IgG للأم، مما يعقد تفسير النتائج وتشخيص مرض الزهري الخلقي.

الأخطاء الناجمة عن تأثير المشاركة البشرية في الدراسة:

• الصفائح الدقيقة الملوثة
• بيبيتينج غير صحيحة
• وجود اهتزازات في المختبر
• درجة حرارة الهواء في المختبر خارج نطاق درجة الحرارة: 18-25 درجة

تتضمن الأخطاء الفنية الأكثر شيوعًا عند تنفيذ لعبة RPGA والتي تؤدي إلى نتائج غير موثوقة ما يلي:

• التخفيف غير الدقيق للمكونات ،
• انتهاك درجة الحرارة،
• انتهاك وقت حضانة الكواشف ،
• انتهاك المواعيد النهائية لتطبيق الكواشف على الجهاز اللوحي ،
• التناقض بين الرقم الهيدروجيني للحلول والحلول المطلوبة ،
• تلوث الأواني الزجاجية المختبرية.

قد تكون المشكلات الفنية التالية أيضًا مصدرًا للأخطاء عند إعداد RPGA:

• استبعاد أمصال الدم المراقبة من التفاعل؛
• تركيز غير متساو من خلايا الدم الحمراء في التشخيص بسبب عدم كفاية الخلط قبل الاستخدام؛
• انتهاك شروط وأحكام تخزين خلايا الدم الحمراء التشخيصية والسيطرة عليها. استخدام مجموعات منتهية الصلاحية؛
• استخدام أنابيب الاختبار الملوثة، وأطراف الماصات، والماصات، والألواح المناعية، والمحاليل عند إجراء التفاعلات؛
• عدم الدقة في التخفيف الأولي لعينة المصل؛
• عدم كفاية الرعاية في إجراء التخفيفات المزدوجة التسلسلية؛
• عدم الامتثال لظروف درجة الحرارة ووقت الحضانة.
• وجود اهتزازات غريبة واهتزاز القرص المناعي أثناء الحضانة.
• انتهاك إجراء تحديد مرحلة RPGA، معبرًا عنه في رفض إجراء الدراسة باستخدام كريات الدم الحمراء الخاضعة للتحكم.

قد يؤدي استخدام بلازما الدم التي تحتوي على مضادات التخثر والتي يمكن أن تسبب تراص كريات الدم الحمراء غير النوعية (RPGA) إلى نتائج لا يمكن تفسيرها.

عدد النتائج الإيجابية والسلبية الكاذبة أقل من الاختبارات المصلية الأخرى. تعد LPRs عند تحديد مرحلة RPHA نادرة وممكنة مع داء اللولبيات (الداء العليقي، البجل، البنتا). كما تم تسجيل نتائج إيجابية كاذبة (أقل من 1٪ في المجموع) في مدمني المخدرات، في المرضى الذين يعانون من عدد كريات الدم البيضاء المعدية، داء البورليات، الجذام، داء الكولاجين، تليف الكبد، سرطان الغدد الليمفاوية، وكذلك في النساء الحوامل.

قد تكون نتائج الاختبار السلبية الكاذبة بسبب المنافسة بين الأجسام المضادة IgM وIgG. من الممكن أيضًا الحصول على نتائج سلبية كاذبة عند المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية.

10. تعديلات على طريقة RPGA

هناك تعديلات جزئية وكلية لإعداد RPHA؛ يتم استخدام الأول في كثير من الأحيان بسبب كفاءته وسرعة الإعداد وتسجيل النتائج.

بالإضافة إلى ذلك، أوتوماتيكي مجمع التشخيصتحليل الصور، مما جعل من الممكن إجراء تقييم تلقائي كمي للنتائج والقضاء على الذاتية في تفسير البيانات التي تم الحصول عليها. يتعرف مجمع الأجهزة والبرامج على الصورة، ويعالج البيانات ويقدم الإجابة في الوحدات النسبية.

لأتمتة تسجيل نتائج RPGA، يتم أيضًا استخدام أجهزة القراءة والمحللات التلقائية.

TPPA (تراص جسيمات اللولبية الشاحبة) - تفاعل تراص الجسيمات الاصطناعية للكشف عن الأجسام المضادة لللولبية الشاحبة

وصف موجز لاختبار TPPA

حاليًا، يتم أيضًا استخدام تعديل لطريقة التراص الدموي السلبي - TPPA (تراص جسيمات اللولبية الشاحبة)، حيث يتم تثبيت مستضد اللولبية الشاحبة على جزيئات الجيلاتين، لتشخيص مرض الزهري. نظرًا لأن جزيئات البوليمر الاصطناعية لا تحتوي على مستضدات خاصة بها تحدد النشاط البيولوجي، فإن مجموعات التشخيص المصلي لمرض الزهري بناءً عليها لديها سبب لاعتبارها أكثر تقدمًا. إن استخدام الجسيمات الاصطناعية الخاملة بيولوجيًا يقلل من التراص غير المحدد الذي يتم ملاحظته بشكل شائع في المركبات الأخرى.

يستخدم TPPA للتشخيص المصلي للأجسام المضادة لمختلف الأنواع والسلالات من اللولبية المسببة للأمراض. يمكن استخدام هذا الاختبار للكشف عن الأجسام المضادة لمسببات الأمراض مثل الزهري، والباينت، والبجل، والداء العليقي.

إجراء البحث بسيط للغاية ولا يتطلب معدات خاصة - حيث يتم استخدام ألواح دقيقة قياسية على شكل حرف "U". يعتمد الاختبار على تراص جزيئات الجيلاتين الحساسة لمستضدات T. pallidum، والأجسام المضادة الموجودة في مصل دم المريض.

TPPA هو اختبار اللولبيات التأكيدي وهو مفيد لكل من اختبار العينات الصغيرة والفحص الشامل. يتم استخدام TPPA في الخارج كاختبار تأكيدي واستبدال اختبار التراص الدقيق للدم MHA-TP (مقايسة التراص الدموي الدقيق للأجسام المضادة لـ T. pallidum).

تتراوح حساسية اختبار TPPA بين 85% و100%، والنوعية بين 98% و100%. حساسية TPPA لمرض الزهري الأولي هي 88%، لمرض الزهري الثانوي والمتأخر الكامنة 98%-100%.

إذا تم استخدام TPPA لتشخيص مرض الزهري، فإن الأجسام المضادة لللولبيات الأخرى (مثل T. pallidum endemicum، pertenue، أو carateum) قد تسبب نتائج إيجابية كاذبة. هناك عدد من الطرق المتاحة لإزالة هذه الأجسام المضادة من عينات المصل قبل الاختبار.

مبدأ اختبار TPPA

TPPA هي طريقة للتراص السلبي لجزيئات الجيلاتين في مصل الدم البشري أو البلازما. يتفاعل المصل الذي يحتوي على أجسام مضادة للولبية اللولبية المسببة للأمراض مع جزيئات الجيلاتين الحساسة للمستضد من سلالة اللولبية الشاحبة نيكولز، المعرضة للموجات فوق الصوتية. نتيجة للتفاعل، يتم تشكيل فيلم ناعم من جزيئات الجيلاتين المتراصة في بئر لوحة ميكروتيتر.

في حالة غياب الأجسام المضادة، تستقر الجزيئات في قاع بئر اللوحة، لتشكل "زرًا" مدمجًا من الجزيئات غير الملتصقة. يجب أن تظهر أيضًا آبار التحكم التي تحتوي على جزيئات الجيلاتين غير الحساسة هذا "الزر" المضغوط لكل مصل، أي عدم التراص.

تطبيق اختبار TPPA

TRPA هو اختبار متعدد الأغراض يمكن استخدامه بنفس القدر من النجاح أثناء الفحص الوقائي الإلزامي للمجموعات السكانية لمرض الزهري (الفحص) وفي مؤسسات الأمراض الجلدية والتناسلية المتخصصة. تتمثل ميزة اختبار TPPA في حساسيته العالية، والتي ليست أقل شأنا من الاختبارات الكلاسيكية، والتي كانت حتى وقت قريب "المعيار الذهبي" للتشخيص المصلي لمرض الزهري. وتشمل المزايا الأخرى للاختبار إمكانية تكرار نتائج عالية، فضلا عن البساطة وسرعة إعداد رد الفعل.

يُستخدم اختبار TPPA لتأكيد النتائج الإيجابية من اختبارات فحص الزهري غير اللولبي، مثل اختبار VDRL، ولتقييم المرضى الذين لديهم نتائج سلبية للاختبار غير اللولبي ولكن لديهم علامات أو أعراض تشير إلى مرض الزهري المتأخر. لا يوصى باستخدام TPPA كاختبار الفحص الوحيد لمرض الزهري.

بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام اختبار تراص TPPA لفحص عينات السائل النخاعي في تشخيص الزهري العصبي. في هذه الحالة، كما هو الحال مع الاختبارات المصلية الأخرى، يجب أن يتم تفسير النتائج بالتزامن مع مؤشرات وأعراض المرض الأخرى.

نتائج اختبار TPPA

يتم تقييم النتيجة وفق نظام "الإيجابيات" - من (-) إلى (2+). تكون نتائج الاختبار مرئية للعين المجردة ويتم تفسيرها على النحو التالي:

درجة التراص	مؤشر الاختبار	تفسير
تصطف الجزيئات المتراصة بشكل متساوٍ على الجزء السفلي من اللوحة جيدًا	2+	إيجابي
حلقة كبيرة كبيرة ذات هوامش خارجية غير متساوية وتراص محيطي	1+	إيجابي
تشكل الجزيئات حلقة مدمجة بها فجوة في المنتصف وتكون ناعمة الحدود الخارجية	±	إيجابية ضعيفة
تشكل الجزيئات حلقة مدمجة في وسط الحفرة مع وجود فجوة طفيفة في المركز وحدود خارجية ناعمة	–	سلبي
وتشكل الجزيئات "زرًا" في وسط الثقب ذو حدود خارجية ناعمة	–	سلبي

يتم أخذ النتائج في الاعتبار لتحديد مدى الالتزام بالوصف أعلاه. يجب إعادة اختبار العينات التي تظهر نتيجة غير محددة (±). إذا أظهرت العينة نتيجة غير محددة في العديد من اختبارات TPPA، فمن المستحسن إجراء الاختبار باستخدام طرق أخرى.

ولا ينبغي النظر إلى نتائج التحليل بمعزل عن غيرها. على سبيل المثال، في مرحلة مبكرة من العدوى، لا يزال عدد الأجسام المضادة صغيرًا جدًا، ونتيجة لذلك تفتقر TPPA والعديد من الطرق الأخرى إلى الحساسية. ولذلك، في حالة الاشتباه بمرض الزهري، حتى لو كانت نتائج الاختبار سلبية، يجب إعادة فحص العينات مرة أخرى. لإجراء التشخيص، من الضروري أن تأخذ في الاعتبار الأعراض السريرية للمريض، والتاريخ السريري وغيرها من البيانات.

كما هو الحال مع تفاعل RPHA، قد يظهر TPPA ظاهرة منطقة بارزة ونتيجة سلبية كاذبة إذا كانت عينة المصل تحتوي على عيار مرتفع جدًا من الأجسام المضادة.

ELISA - مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم

مقايسة الممتز المناعي المرتبط(ELISA؛ مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم، ELISA) هي إحدى الطرق العديدة للتشخيص المصلي للأمراض المعدية. إن مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) في التشخيص المصلي لمرض الزهري هي اختبار للأجسام المضادة من الفئات M وG وA (IgM وIgG وIgA) ضد مستضدات اللولبية الشاحبة. من الممكن إجراء ELISA باستخدام السائل النخاعي.

إن إدخال مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) في الممارسة العملية بدلاً من تفاعل فاسرمان واختبارات الكارديوليبين الأخرى أدى إلى تحسين جودة التشخيص المختبري لمرض الزهري بشكل كبير. ومن المزايا المهمة لهذه الطريقة القدرة على أتمتة عملية البحث، مما يقلل من تأثير العامل البشري.

1. تاريخ طريقة ELISA

تم تطوير المبادئ الأساسية للمقايسة المناعية الإنزيمية على سطح حامل الطور الصلب بواسطة E. Engvar والمؤلف المشارك. (1971)، ب. فان ويمان وأ. شورز (1971). تم اقتراح المقايسة المناعية الإنزيمية التي طوروها لأول مرة لتشخيص مرض الزهري في عام 1975 من قبل ج. فيلدكامب وأ. فيسر، اللذين قاما بتقييم إمكانات هذا الاختبار الآلي. بدأ استخدام تقنية ELISA على نطاق واسع في تشخيص مرض الزهري في الثمانينيات، عندما تم تطوير الاختبارات التشخيصية واعتمادها وتم توحيد طرق الاختبار. في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية، تم تطوير طريقة ELISA لتشخيص مرض الزهري بواسطة V. N. Bednova، A. V. Babiy و A. V. Kotrovsky (1982، 1983).

2. مبدأ طريقة ELISA

يتشابه مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) في آلية التفاعل مع RIF (يتم اكتشاف نفس الأجسام المضادة). يتم تصنيف تفاعل المقايسة المناعية الإنزيمية على أنه تفاعل مناعي يعتمد على تفاعل محدد للغاية لمستضدات اللولبية الشاحبة مع الأجسام المضادة لمريض مصاب بمرض الزهري.

في ممارسة مرض الزهري، يتم استخدام النسخة غير المباشرة من ELISA بشكل رئيسي. مبدأ التفاعل غير المباشر الأكثر استخدامًا هو كما يلي. على سطح آبار قرص البوليسترين، يتم تثبيت المجمعات المناعية التي تتشكل عندما تتفاعل الأجسام المضادة لمريض الزهري مع مستضدات اللولبية الشاحبة. بعد ذلك، يتم اكتشافها في تفاعل اللون باستخدام اتحادات محددة وإضافات مناسبة للركيزة اللونية.

إجراءات إجراء الاختبار هي كما يلي: يتم وضع مصل المريض على حامل الطور الصلب مع مستضد متصل به. إذا كان هناك أجسام مضادة فيه، يتم تشكيل مجمع الأجسام المضادة للمستضد على سطح الناقل. "لإظهار" نتائج التفاعل، يتم استخدام الأجسام المضادة Ig المضادة للإنسان المترافقة مع علامات الإنزيم. في حالة التفاعل الإيجابي، يقوم الإنزيم المرتبط بمجمع المستضد والجسم المضاد بتحليل الركيزة المضافة إلى النظام، مما يؤدي إلى تطور تلطيخ اللون بكثافة متفاوتة.

في التفاعل، يتم تحديد مركب AG وAT الممتص في الطور الصلب باستخدام أجسام مضادة ضد الجلوبيولين تحمل علامة الإنزيم، بناءً على تفاعل لون الإنزيم مع الركيزة.

في التفاعل، يتم تحديد مركب المستضدات والأجسام المضادة الممتصة في الطور الصلب باستخدام أجسام مضادة ضد الجلوبيولين تحمل علامة الإنزيم.

يوفر ELISA القدرة على اكتشاف Igs في الدم من فئات مختلفة. هناك أنظمة في السوق تسمح لك بتحديد IgM وIgG والأجسام المضادة الإجمالية بشكل منفصل.

يمكن أن يكون للمستضدات المحددة المستخدمة في ELISA أصول مختلفة:

صوت فائق- يتم الحصول عليها عن طريق تدمير الخلية البكتيرية T. pallidum بواسطة الموجات فوق الصوتية أو بطريقة أخرى؛

المؤتلف- يتم الحصول عليها عن طريق تقنيات الهندسة الوراثية عن طريق إدخال جينوم الخلية البكتيرية (على سبيل المثال، E. Coli) الجين المسؤول عن تخليق مستضد T. pallidum محدد، يليه زيادة في الكتلة البكتيرية للمنتج المنتج الكائنات الحية الدقيقة، وتدمير هذه الخلايا، وعزل وتنقية المستضد.

الببتيد- تم الحصول عليه نتيجة التوليف الكيميائي المتسلسل للحواتم المستضدية لبروتينات T. pallidum.

الجسم قادر على تكوين أجسام مضادة لأي جزء من جزيء المستضد تقريبًا. مع الاستجابة المناعية الطبيعية، لا يحدث هذا عادة. واحد أو أكثر من الببتيدات المناعية المعزولة من مستضد البروتين لها مولد مضاد خاص، وتتشكل معظم الأجسام المضادة خصيصًا لها. تتطور الاستجابة المناعية الأكثر شدة لهم. أظهر اختبار ELISA الأكثر إفادة المناطق المناعية لبروتينات اللولبية الشاحبة ذات الأوزان الجزيئية 15 كيلو دالتون و17 كيلو دالتون و47 كيلو دالتون. تم استخدام مستخلص منظف أو سونيكات من اللولبيات المسببة للأمراض من سلالة نيكولز كمستضد.

3. طريقة إجراء البحث باستخدام الطريقة

مبدأ هذه الطريقة هو الكشف عن مركب مضاد-مستضد محدد ممتز على الطور الصلب (سطح تجاويف صفيحة بلاستيكية) مع أجسام مضادة للجلوبيولين موسومة بإنزيم (بيروكسيداز) باستخدام تفاعل اللون مع الركيزة، المأخوذة في حساب كمي طيفي.

المستضدات المستخدمة لتوعية آبار لوحة البوليسترين يمكن أن تكون:

• المحللة- تم الحصول عليها نتيجة لتدمير اللولبية الشاحبة بالموجات فوق الصوتية.
• الببتيد- تم الحصول عليها نتيجة للتخليق الكيميائي لأجزاء البروتين من اللولبية الشاحبة ولها تفاعل مستضدي مماثل للبروتينات الأصلية للعامل الممرض؛
• المؤتلف- تم الحصول عليها باستخدام طرق الهندسة الوراثية، والتي تحمل محددات مستضدية مماثلة لللولبية الشاحبة.

في ممارسة مرض الزهري، عادة ما يتم استخدام نسخة غير مباشرة من ELISA.

4. المحاسبة عن النتائج

في ELISA، يتم استخدام تفاعل الإنزيم لتصور تفاعل الجسم المضاد مع المستضد ( الفوسفاتيز القلويةأو بيروكسيداز الفجل) مع الركيزة التي تغير لونها. تحدد شدة اللون إيجابية التفاعل (من "-" إلى "++++"). يمكن تقييم نتائج ELISA بصريًا باستخدام نظام من 4 نقاط أو بشكل فعال في شكل مؤشرات رقمية للكثافة الضوئية يتم الحصول عليها من أجهزة قراءة خاصة (مثل Multiscan) بطول موجة يبلغ 492 نانومتر. لأن ويتم تقييم النتائج طيفيًا، مما يلغي التفسير الشخصي.

5. في أي فترات المرض يكون من الأفضل استخدامه

توقيت نتيجة اختبار ELISA هو من الأسبوع الرابع من الإصابة. تصبح نتائج اختبار ELISA (وكذلك RIF) إيجابية في الأيام الأولى من الفترة الأولية أو في نهاية فترة الحضانة وتظل إيجابية في جميع الفترات. يعد اختبار ELISA ذا قيمة خاصة في التشخيص المبكر لمرض الزهري - حيث يمكن الحصول على نتائج إيجابية للكشف عن الأجسام المضادة بالفعل في نهاية فترة حضانة المرض (أي بعد 4-6 أسابيع من الإصابة).

6. الحساسية والنوعية

يعد اختبار ELISA اختبارًا حساسًا ومحددًا للغاية، وهذه هي ميزته. ELISA قريب من RIF من حيث آلية التفاعل والحساسية والنوعية تشارك نفس الأجسام المضادة في كلا التفاعلين. يلاحظ معظم الباحثين خصوصية وحساسية عالية في جميع مراحل المرض. حساسية متغيرات ELISA المختلفة، وفقًا لـ G. A. Dmitriev، تصل إلى 98-100٪، والنوعية - 96-100٪. وفقًا لـ TsNIKVI، تبلغ حساسية ELISA لمرض الزهري 99.1٪ (الأمر رقم 87 M3 للاتحاد الروسي).

يعد متغير ELISA ذو الطور الصلب (مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم، ELISA) واحدًا من أكثر التفاعلات المصلية حساسية، حيث يسمح باكتشاف 0.0005 ميكروجرام/مل من الأجسام المضادة و0.000005 ميكروجرام/مل من المستضدات.

7. نطاق تطبيق الطريقة

يوصى باستخدام هذه الطريقة عند فحص النساء الحوامل وأشخاص الاتصال والمانحين وممثلي المجموعات المعرضة للخطر. يمكن استخدام ELISA كاختبار فحص وتأكيد. نسبيا وقت قصيرفي تاريخها، تطورت تقنية ELISA من اختبار إرشادي إلى اختبار تأكيدي. في تشخيص مرض الزهري، يُستخدم الاختبار أيضًا كاختبار تأكيدي للعينات التي تظهر نتائج إيجابية باستخدام اختبارات غير لولبية مختلفة وRPGA.

يمكن استخدام طريقة ELISA في نسخة كمية مع حساب مؤشر الإيجابية، أو التفاعل، مما يسمح لك بتقييم مستوى الأجسام المضادة في العينة.

حاليًا في روسيا، يتم تنظيم استخدام المقايسة المناعية الإنزيمية لتشخيص مرض الزهري بأمر من وزارة الصحة في الاتحاد الروسي رقم 87 بتاريخ 26 مارس 2001 "بشأن تحسين التشخيص المصلي لمرض الزهري" (الملحق رقم 1 " مراحل الفحص والاختبارات التشخيصية لمرض الزهري"). يخطط الأمر لاستبدال RSC في مجمع التفاعلات المصلية (SRC) بـ ELISA و RPGA.

8. مصادر وأسباب الأخطاء أثناء الإنتاج والنتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة

المقايسة المناعية للإنزيم هي دراسة معقدة متعددة المراحل، حيث من الضروري اتباع جميع توصيات الشركات المصنعة لمجموعات التشخيص بدقة، وقواعد ضبط وتكوين المعدات المستخدمة في الدراسة.

قد يكون مصدر الأخطاء عند إجراء ELISA هو النقاط التالية:

دراسة تفاعل مصل الدم أو مصل الدم المرتفع أو المتحلل مع علامات نمو البكتيريا.

لا تمارس تجميد عينة من المادة البيولوجية مرتين أو أكثر، إذا لزم الأمر، كرر الدراسة، استخدم المصل من أنبوب اختبار مكرر؛

انتهاك شروط وأحكام تخزين محلول الامتصاص المناعي والغسيل. واستخدام مجموعات الاختبار منتهية الصلاحية؛

استخدام مكونات التفاعل من مجموعات التشخيص الأخرى؛

انتهاك توقيت مراحل التفاعل.

تجفيف آبار اللوحة المناعية في مراحل التفاعل؛

إعادة استخدام الأطباق البلاستيكية (الصواني البلاستيكية) لتحضير خليط من الكروموجين والركيزة؛

عدم الالتزام بتكرار التحكم المترولوجي لمعلمات التشغيل للأجهزة المستخدمة (الغسالة ومقياس الطيف الضوئي)؛

استخدام الأدوات الزجاجية المخبرية الملوثة عند إعداد التفاعلات: القوارير، والأسطوانات المتدرجة، وأنابيب الاختبار، والماصات، وأطراف الماصات؛

عدم الاهتمام بتخفيفات العينة مادة بيولوجية;

أخطاء عند إدخال عينة من المادة البيولوجية في البئر المقابل للوحة؛

أخطاء عند نقل نتائج الدراسة إلى سجل التسجيل أو بروتوكول الدراسة أو نموذج الاستجابة.

إن التنفيذ الدقيق لتوصيات التعليمات الخاصة باستخدام مجموعات الاختبار التشخيصي، والتحقق المنتظم من دقة موزعات الماصات والأجهزة الأوتوماتيكية، واستخدام الضوابط الإيجابية والسلبية الداخلية، يجعل من الممكن الحصول على نتائج اختبار ELISA مع إمكانية تكرار نتائج عالية.

9. الميزات والمزايا والعيوب

يعد اختبار ELISA طريقة حديثة واعدة للتشخيص المصلي لمرض الزهري نظرًا لبساطته وإمكانية تكرار نتائجه وسهولة الوصول إليه. تحديد الأجسام المضادة بواسطة ELISA الطريقة المثاليةالتشخيص مناسب للفحص المتزامن لعدد كبير من العينات. نظرًا لمزاياها، فقد اكتسبت شعبية في جميع البلدان.

تتطلب تكنولوجيا أبحاث ELISA الامتثال لجميع توصيات الشركات المصنعة لمجموعات الاختبارات التشخيصية التجارية ودقة إجراءات البحث. لإجراء البحوث في ELISA، من الضروري شراء معدات خاصة إضافية. تستغرق تقنية التدريج وقتًا أطول مقارنةً بـ RMP وRPR وRPGA.

يتيح لك وجود أتمتة عدد من المراحل أو العملية برمتها الدراسة في وقت واحد عدد كبير منعينات من المواد البيولوجية بدرجة عالية من توحيد الدراسة، والتقليل من العنصر الذاتي في تقييم النتائج، وإمكانية تخزين بروتوكولات الدراسة الثابتة، مما يتيح لك أرشفة بيانات الدراسة والوصول إليها مرة أخرى للتحليل بأثر رجعي.

مزايا:

• يتيح التحديد المتمايز والكامل للأجسام المضادة IgM وIgG للعامل المسبب لمرض الزهري.
• حساسية وخصوصية عالية تقترب من 100%،
• قابلية اعادة الأنتاج
• قدرات الأتمتة

تشمل مزايا ELISA الخصوصية العالية (96-100%) والحساسية (98-100%)، والتي لاحظها معظم الباحثين.

يتيح لك وجود أتمتة لعدد من المراحل أو العملية برمتها دراسة التدفق في وقت واحد مع عدد كبير من عينات المواد البيولوجية بدرجة عالية من توحيد الدراسة، مما يقلل من العنصر الذاتي في تقييم النتائج ‎القدرة على تخزين بروتوكولات البحث الثابتة مما يسمح لك بأرشفة بيانات البحث والوصول إليها مرة أخرى لتحليلها بأثر رجعي.

العيوب الكبيرة للطرق اليدوية، بما في ذلك تحديد الأجسام المضادة لمستضدات T. pallidum بواسطة ELISA، هي:

~ أخطاء الموظفين المحتملة أثناء البحث (الإشراف، الإهمال، انتهاك التكنولوجيا)؛

~ استحالة التوحيد الكامل لعملية البحث مع النسخة اليدوية من ELISA؛

~ زيادة خطر إصابة الأفراد بالعدوى.

10. تعديلات الطريقة

جنبا إلى جنب مع ELISA الكلاسيكية غير المباشرة، فإن الطريقة فخ إليسا. تم اقتراحه في عام 1989 من قبل O. E. Ijsselmudien et al. للكشف عن الأجسام المضادة IgM لمستضدات Tr. الشاحبة. تتميز الطريقة بخصوصية وحساسية عالية.

يتم امتصاص الأجسام المضادة المنقاة للجلوبيولين المناعي البشري من الفئة M على سطح آبار اللوحة، وبعد حضانة مصل الاختبار، يرتبط كل IgM بالحامل. وجود المستضد النوعي Tr بين IgM المرتبط به. تم الكشف عن الشاحبة باستخدام Tr. الشاحبة مترافق مع الانزيم.

تتيح لك هذه الطريقة اكتشاف الأجسام المضادة ليس فقط من فئة IgM، ولكن أيضًا من فئتي IgG وIgA. للقيام بذلك، يتم توعية آبار الصفائح بأجسام مضادة منقاة من فئة معينة ضد الغلوبولين المناعي البشري. في هذه الحالة، يتم التقاط الأجسام المضادة من هذه الفئة من المصل، ويتم اكتشاف الأجسام المضادة الخاصة باللولبية من خلال دمجها مع مترافق يمثل اتصال المستضد اللولبي مع الإنزيم.

إن استخدام نسخة مصيدة من مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم يقلل من خطر التفاعلات الإيجابية الكاذبة بوساطة عامل الدم الروماتويدي، والتفاعلات المتصالبة بين الغلوبولين المناعي من الفئتين M وG. عند فحص الأطفال حديثي الولادة، في هذه الحالة، يتم إجراء اختبار إيجابي كاذب كما تم استبعاد النتائج المرتبطة باكتشاف IgM الموجه ضد IgG المضاد لللولبية لدى الأمهات.

لقد وجدت ELISAs استخدامًا واسع النطاق في الخارج كخيارات. مقايسة المناعة الإنزيمية (EIA)والنظام مرض الزهري الجليدي. في الأخير، يتم امتصاص خليط من الأجسام المضادة لـ IgM وIgG، بالإضافة إلى ثلاثة بروتينات مؤتلفة من T. pallidum، في خلايا اللوحة. يتم اختبار النتائج الإيجابية في نفس نظام الاختبار في نسختين للحصول على النتيجة النهائية.

في روسيا، تم تطوير عدد من أنظمة الاختبار للتشخيص المصلي لمرض الزهري باستخدام طريقة ELISA مع الكواشف المحلية. تتميز هذه الأنظمة بخصوصية وحساسية عالية.

بالإضافة إلى ما سبق، هناك أيضًا خيارات ELISA أخرى، بما في ذلك تلك التي تسمح بالكشف المباشر عن العامل الممرض في الدم (ELISA المباشر)، Dot-ELISA مع تفاعل على شرائح النيتروسليلوز، ELISA مع الدم الشعري، بالإضافة إلى اللطخة المناعية، أو اللطخة الغربية، مع الكشف المتزامن عن الأجسام المضادة لمختلف مكونات العامل الممرض.

التعديل الحديث المحسن لـ ELISA هو التطعيم المناعي.

ICA (مقايسة اللمعان المناعي)، ICL (مقايسة اللمعان المناعي)

مع تطور التشخيص المختبري في سياق تحديث الرعاية الصحية في الاتحاد الروسي، دخلت أتمتة البحوث المختبرية في ممارسة المختبرات، مما يجعل من الممكن توحيد المراحل التحليلية للبحث. وهذا يساعد على تحسين جودة التشخيص. مع إدخال الأتمتة، بدأ استخدام طرق جديدة عالية التقنية ذات حساسية وخصوصية عالية، مثل المقايسة المناعية للتألق الكيميائي (CLIA)

اللمعان الكيميائي هو عملية انبعاث الفوتونات أثناء انتقال المنتجات المثارة إلكترونيًا من التفاعلات الكيميائية المؤكسدة إلى حالة الطاقة الأصلية. أثناء تفاعل التألق الكيميائي، يتم إطلاق كمية كبيرة من الطاقة، ويكون العائد الكمي للضوء المنبعث مرتفعًا جدًا. من بين جميع الطرق غير النظائرية، يوفر التألق الكيميائي أعلى حساسية. بالنسبة للطرق المناعية، تكون حساسية التألق الكيميائي أكبر من حساسية المقايسة المناعية الإشعاعية.

لقد وجدت طريقة التلألؤ المناعي (ICL) حاليًا استخدامها في تشخيص علامات الأورام وأمراض المناعة الذاتية والسكري وعلامات القلب والهرمونات ( الغدة الدرقية، الغدد الكظرية، الهرمونات الجنسية الأنثوية والذكورية)، التهابات الشعلة، التهاب الكبد الفيروسي، فيروسات مجموعة الهربس.

استنادًا إلى طريقة التألق المناعي، تم تطوير عدد من أنظمة الاختبار شديدة الحساسية والمحددة (98-100%) لتشخيص مرض الزهري، والتي تستخدم بشكل رئيسي في الخارج.

تستخدم هذه الطريقة البروتينات الدهنية المؤتلفة التي تم الحصول عليها بطرق الهندسة الوراثية كمستضدات، وهي نظائر كاملة لمستضدات T. pallidum.

طريقة ICA على أساس النتائج تجربة سريريةحصل على الاعتراف ويوصى باستخدامه في التشخيص المختبري لمرض الزهري في الاتحاد الروسي كاختبار فحص وتأكيد في حالة توفر المعدات المناسبة في المختبرات. في عام 2012، تم إدراج ICA كاختبار فحص وتأكيد لتشخيص مرض الزهري في المبادئ التوجيهية السريرية لإدارة المرضى الذين يعانون من الأمراض المنقولة جنسيا والتهابات الجهاز البولي التناسلي.

وبالتالي، فإن استخدام ICA عالي التقنية، والذي أصبح جزءًا من ممارسة التشخيص المختبري العالمي والمحلي مع إدخال الأتمتة، يوفر المزايا التالية:

• القضاء على تأثير العوامل الذاتية في المرحلة التحليلية للدراسة
• سلامة الموظفين عند إجراء البحوث على المواد البيولوجية التي يحتمل أن تكون مصابة
• زيادة سرعة حصول المريض على النتائج
• توحيد الدراسات ومراقبة جودة الدراسات
• تقديم نتائج موثوقة وموثوقة للمرضى
• جودة عالية من البحوث المختبرية السريرية.

من حيث الحساسية، فإن طريقة ICA قابلة للمقارنة مع طريقة المقايسة المناعية الإشعاعية، ومن حيث سهولة التنفيذ وسلامة الموظفين والعديد من المعايير الأخرى، فهي تتفوق عليها.

تتيح طريقة ICA، التي تتميز بحساسية ونوعية عالية (98-100%)، تحديد مستوى الأجسام المضادة للعامل المسبب لمرض الزهري كميًا ويمكن استخدامها لتأكيد الإصابة بالزهري وفحصه. حدود الاستخدام: لا يمكن استخدامه لمراقبة فعالية العلاج، وقد يعطي نتيجة إيجابية كاذبة.

التصوير المناعي (ICH).

تعد طرق اكتشاف الأجسام المضادة الخاصة بالتريبونيم بناءً على طرق التحليل اللوني المناعي (ICH) جديدة نسبيًا للاستخدام في الاتحاد الروسي. كما هو الحال في طريقة ICA، يتم استخدام البروتينات الدهنية المؤتلفة التي تم الحصول عليها بطرق الهندسة الوراثية (على سبيل المثال: المستضدات Tp15، Tp17، Tp47) والببتيد الحيوي TmpA كمستضدات. تُستخدم المستضدات المدرجة أيضًا في مجموعات مختلفة كجزء من الممتزات المناعية في ELISA والتخثر المناعي.

تتيح لك طريقة ICG تحديد محتوى الأجسام المضادة الخاصة باللولبية للعامل المسبب لمرض الزهري بسرعة في عينات المصل والدم الكامل دون استخدام معدات مخبرية خاصة وتستخدم في توفير الرعاية الصحية الأولية، بما في ذلك المؤشرات الوبائية.

حدود الاستخدام: لا يمكن استخدامه لمراقبة فعالية العلاج، وقد يعطي نتيجة إيجابية كاذبة.

PBT (اختبارات السرير السريعة البسيطة)

في الآونة الأخيرة نسبيًا، في التشخيص المصلي لمرض الزهري، بدأ الاتجاه في تطوير ما يسمى بالاختبارات السريعة البسيطة (SRT)، أو الاختبارات بجانب السرير (نقطة الرعاية - POC). تسمح الاختبارات السريعة البسيطة بجانب السرير، أو الاختبارات الكروماتوغرافية المناعية، بالتحديد السريع لمحتوى الأجسام المضادة الخاصة باللولبيات للعامل المسبب لمرض الزهري في عينات المصل والدم الكامل دون استخدام معدات مخبرية خاصة ويمكن استخدامها في الرعاية الصحية الأولية، بما في ذلك المؤشرات الوبائية. حدود الاستخدام: لا يمكن استخدامه لمراقبة فعالية العلاج، وقد يعطي نتيجة إيجابية كاذبة.

تعتمد هذه الاختبارات على التحديد المناعي للأجسام المضادة للمستضدات اللولبية لللولبية الشاحبة ويتم إجراؤها على شرائط؛ وفي هذه الحالة، يمكن استخدام كل من الدم الكامل والمصل (Herring A., Ballard R. et al, 2006). يسمح شكل الاختبار بإجراء البحث في غياب المعدات الخاصة ودون استخدام الكهرباء. ومع ذلك، نظرًا للحساسية والنوعية المنخفضة نسبيًا، لم يتم بعد استخدام هذه الاختبارات على نطاق واسع في الممارسة العملية.

اللطخة المناعية (لطخة غربية)

في السنوات الأخيرة، ظهرت طرق بحث تهدف إلى اكتشاف وتحليل محتوى الأجسام المضادة لكل مستضداللولبية الشاحبة بشكل منفصل. إحدى هذه الطرق هي طريقة النشاف المناعي (أو النشاف، النشاف المناعي، اللطخة الغربية)، والتي تستخدم لتحديد الأجسام المضادة IgG أو IgM لللولبية الشاحبة. طريقة التطعيم المناعي هي تعديل للمقايسة المناعية الإنزيمية - وهو نوع مختلف من ELISA.

يعد التطعيم المناعي أحد أحدث الطرق للتشخيص المصلي لمرض الزهري ويستخدم بنشاط في الخارج. لقد حصلت على اسمها ("النشاف الغربي") كرد فعل فكاهي على أسماء تقنيات تحديد الحمض النووي ("النشاف الجنوبي") والحمض النووي الريبي ("النشاف الشمالي").

1. تاريخ الطريقة

يتم استخدام اللطخة المناعية (اللطخة الغربية) لتحديد الأجسام المضادة IgG أو IgM لمستضدات اللولبية الشاحبة (Herremans M. et al., 2007).

2. البقعة المناعية الكلاسيكية

الكتلة المناعية الكلاسيكية(تحليل اللطخة الغربية) يجمع بين المقايسة المناعية الإنزيمية واستخدام طريقة الرحلان الكهربي. يتم فصل بروتينات المستضد للعامل المسبب لمرض الزهري بشكل مبدئي عن طريق الرحلان الكهربائي ونقلها إلى حامل - غشاء النيتروسليلوز (الشريط). ويسمى هذا النقل النشاف. ثم تتم معالجة هذا الناقل ذو النقاط المنفصلة (البقع) بمصل الاختبار والأجسام المضادة لـ IgG أو IgM، الموسومة بالإنزيمات أو المواد المشعة. تتضمن الطريقة استخدام بروتينات اللولبية الطبيعية أو المؤتلفة.

الكهربائيهو فصل المركبات المشحونة على أساس حركتها في المجال الكهربي. عند تطبيق فرق الجهد في وسط ما، تتحرك الجزيئات الموجبة الشحنة نحو القطب السالب، وتتحرك الجزيئات سالبة الشحنة نحو القطب الموجب.

يتم تجميع معظم البروتينات الكروية بطريقة تجعل معظم المجموعات المشحونة، وتحديدًا المجموعات المحبة للماء، موجودة على سطح البروتين، بينما تكون البقايا غير المشحونة الكارهة للماء مدمجة في الجزء الداخلي من الكرية. في المجال الكهربائي، تهاجر البروتينات وفقًا لشحنتها نحو القطب الكهربائي المشحون بشكل معاكس.

يتم إجراء الفصل الكهربي للبروتينات في وسط جل صناعي يعتمد على بولي أكريلاميد. لفصل البروتينات حسب وزنها الجزيئي، يتم تحضين خليط البروتين مسبقًا في وجود كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) قبل الترحيل الكهربائي.

أظهرت الدراسات التفصيلية التي أجراها العلماء الأجانب ويبر وأوزبورن (1969) أنه بعد هذا العلاج، فإن العامل الوحيد الذي يمكن أن يؤثر على حركة البروتينات في هلام بولي أكريلاميد (PAGE) هو حجم البروتين، أو بالأحرى وزنه الجزيئي. هذا جعل من الممكن استخدام طريقة PAGE الكهربائي في وجود SDS لتحديد الوزن الجزيئي للبروتينات والببتيدات بشكل دقيق إلى حد ما. في الأدب الأجنبي، كانت هذه الطريقة تسمى SDS-PAGE (الرحلان الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات بولي أكريلاميد الصوديوم).

ملف تعريف التفاعل في اختبار WB الكلاسيكي مع المستضدات الطبيعية (طريقة الترحيل الكهربي لهلام بولي أكريلاميد كبريتات دوديسيل الصوديوم). (1) - نتيجة السيطرة إيجابية، (2) - نتيجة السيطرة سلبية، (3-6) - العينات السريرية.

في اختبارات مرض الزهري باستخدام هذه الطريقة، يتم إخضاع اللولبية الشاحبة، التي تم تنقيتها مسبقًا وتدميرها إلى مكوناتها الأساسية، للرحلان الكهربائي في بولي أكريلاميد أو هلام الاغاروز. في هذه الحالة، يتم فصل المستضدات المدرجة في تكوينها بالوزن الجزيئي.

بعد ذلك، باستخدام الرحلان الكهربائي العمودي، يتم نقل المستضدات إلى شريط من النيتروسليلوز، والذي يحتوي الآن على طيف من العصابات المستضدية غير المرئية للعين، وهي سمة من سمات اللولبية الشاحبة.

عند إجراء التحليل، يتم تطبيق مادة الاختبار (المصل، بلازما دم المريض، وما إلى ذلك) على شريط (شريط) النيتروسليلوز. إذا كانت هناك أجسام مضادة محددة في العينة، فإنها أثناء عملية الحضانة ترتبط بقوة بالعصابات المستضدية (المكملة) المقابلة بدقة وتشكل مجمع "الجسم المضاد للمستضد".

بعد إزالة الغلوبولين المناعي غير المرتبط أثناء غسل الشريط، يتبع ذلك الحضانة باستخدام أجسام مضادة تحمل علامة الإنزيم للجلوبيولين المناعي البشري (الأجسام المضادة لـ IgG أو IgM البشري)، حيث ترتبط الأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم بمجمعات الأجسام المضادة للمستضد الموجودة على سطح الشريط. الغشاء.

بعد إزالة الاتحاد غير المنضم أثناء الحضانة بمحلول الركيزة، يتفاعل الإنزيم مع الركيزة، مما يؤدي إلى تطور تفاعل اللون - تلطيخ مناطق الغشاء (على شكل خطوط) حيث توجد مستضدات اللولبية الشاحبة الفردية، والأجسام المضادة التي لها كانوا في مصل الاختبار. تعتمد شدة الصبغة على كمية الأجسام المضادة المرتبطة بالمصل. يتم تقييم نتيجة التفاعل بصريا.

إن وجود أشرطة في مناطق معينة من صفيحة النيتروسليلوز يؤكد وجود أجسام مضادة في المصل المختبر لمستضدات محددة بدقة من اللولبية الشاحبة.

إن المحددات المناعية 15، 5، 17، 44.5، 47 كيلو دالتون المحددة باستخدام هذه الطريقة لها أهمية تشخيصية لمرض الزهري. يتشابه التطعيم المناعي Ig G في الحساسية والنوعية مع RIF مع الامتصاص (RIF abs). يمكن أن يكون التطعيم المناعي Ig M بمثابة اختبار تشخيصي لمرض الزهري الخلقي.

3. Immunoblot في شكل المقايسة المناعية الخطية

يسمح المقايسة المناعية الخطية (LIA) بالتحديد المتزامن للأجسام المضادة لمستضدات اللولبية الشاحبة في المصل البشري أو البلازما. يتم تطبيق المستضدات مسبقًا على شرائط الاختبار، والتي يتم توفيرها كجزء من مجموعات التشخيص التجارية.

تصنع الشرائط من غشاء النيتروسليلوز، أو مادة البولي أميد مع دعامة بلاستيكية أو غشاء من النايلون مع دعامة بلاستيكية. أثناء التصنيع، يتم وضع العديد من المستضدات المنفصلة على شريط الاختبار على شكل خطوط مستضدية منفصلة. بالإضافة إلى مستضدات مرض الزهري، يتم تطبيق أربعة خطوط تحكم أخرى على كل شريط: الستربتافيدين وعينات التحكم (3 +، 1 + و± خط القطع).

تستخدم الشرائط مستضدات اصطناعية تم الحصول عليها بطرق الهندسة الوراثية - البروتينات المؤتلفة أو تركيبات البولي ببتيد الاصطناعية. هذه هي نظائرها للمستضدات السطحية لللولبية الشاحبة - TpN15 وTpN17 وTpN47 وTmpA بأوزان جزيئية 15 و17 و47 كيلو دالتون و44.5 (TmpA)، حيث kDa = كيلو دالتون. بمساعدتهم ، يتم تحديد الأجسام المضادة في الدم لمختلف المكونات المناعية للعامل الممرض.

يتم تحضين عينة الاختبار في الكوفيت، حيث يتم وضع شريط المؤشر أيضًا. يتم تحديد الأجسام المضادة لـ T. pallidum عن طريق الارتباط بالمستضدات المطبقة على شرائط الاختبار. إذا كانت الأجسام المضادة الخاصة بـ T. pallidum موجودة في العينة، فإنها تشكل روابط مع سلالات مستضد متميزة. عندما تتفاعل الأجسام المضادة الموجودة في مصل الاختبار مع مستضدات T. pallidum المنفصلة الموضوعة على شريط الاختبار، يتم تشكيل مجمع الأجسام المضادة للمستضد في شكل نطاقات ألوان يمكن اكتشافها بصريًا.

عند الأخذ في الاعتبار نتائج النشاف المناعي، يتم تقييم تفاعل المصل لكل من المستضدات بشكل منفصل. يتم إصدار استجابة إيجابية إجمالية عندما يتم الحصول على النتيجة في وقت واحد مع اثنين أو ثلاثة من المستضدات المقدمة.

تتم إجراءات البحث يدويا أو على محلل خاص، مع تفسير النتائج باستخدام برنامج حاسوبي متخصص للأمراض المعدية.

نظرًا للدرجة العالية من تنقية المستضدات المؤتلفة والكشف المتزامن عن الأجسام المضادة لأكثر المحددات المناعية للعامل المسبب لمرض الزهري، فإن الطريقة تتمتع بحساسية وخصوصية عالية.

4. المحاسبة عن النتائج

لقراءة شدة تلطيخ العصابات المستضدية على الشرائط، تم تطوير أجهزة قياس الضوء التي يعتمد تشغيلها على انعكاس الإشارة، مما يلغي التقييم الذاتي ويوفر إمكانية التشغيل الآلي.

5. في أي فترات المرض يكون من الأفضل استخدامه

يمكن للاختبارات التي تستخدم النشاف المناعي اكتشاف أجسام مضادة محددة لمستضدات اللولبية الشاحبة في مرحلة مبكرة جدًا من المرض. الأجسام المضادة الأكثر أهمية في تشخيص مرض الزهري هي الأجسام المضادة لمستضدات اللولبية الشاحبة TpN15، TpN17، TmpA وTpN47. هذه المستضدات عبارة عن بروتينات غشائية ذات أوزان جزيئية تبلغ 15 و17 و44.5 و47 كيلو دالتون على التوالي.

عندما يتم إدخال اللولبية الشاحبة إلى جسم الإنسان، تظهر الأجسام المضادة المضادة للزهري بهذا الترتيب: أولاً، تتطور الاستجابة المناعية لمستضدات TpN17، ثم إلى TpN47، بعد TpN15 وبعد ذلك لجميع TmpA. عند الأخذ في الاعتبار نتائج الاختبار، يتم تقييم تفاعل المصل لكل منها على حدة. على سبيل المثال، عندما تظهر اللطخة الخطية تفاعلًا فقط مع خطوط المستضد TpN17 وTpN47، فهذا يعني أن المرض في المراحل المبكرة. كلما أصبحت خطوط المستضد أكثر تفاعلية، كلما تقدمت العدوى. عند علاج مرض الزهري، يتغير نمط التفاعل في هذا الاختبار.

إن تحديد IgM للبروتينات ذات الوزن الجزيئي 15.17، 41، 47 كيلو دالتون يجعل من الممكن تحديد 29.2٪ من مرضى الزهري الثانوي، و 12.5٪ ​​مع مرض الزهري الكامن المبكر و 8.0٪ مع المقاومة المصلية. يتميز البحث عن IgG لنفس الجزيئات بحساسية تبلغ 61.6% للمقاومة المصلية و100% للزهري الثانوي والزهري الخافي المبكر.

6. الحساسية والنوعية

وفقًا للأدبيات، فإن حساسية وخصوصية الاختبار عالية جدًا - 99.6-100 و99.3-99.5% على التوالي. في الطريقة الكلاسيكيةويتم تحقيق ذلك من خلال الفصل الكهربي للبروتينات والبروتينات السكرية والدهنية والحد الأقصى من الخصوصية للكشف عن الأمصال المناعية أو الأجسام المضادة وحيدة النسيلة. في ظل الظروف المثالية، يمكن للتطعيم المناعي اكتشاف المستضد بكميات أقل من 1 نانوغرام في حجم الاختبار.

تبلغ حساسية اللطخة الخطية أيضًا 99.6%، وتتراوح النوعية بين 99.3% و99.5%.

وفقًا للخبراء، فإن التطعيم المناعي باستخدام مستضدات مؤتلفة عالية النوعية يشبه في الحساسية والنوعية بروتين RIF-abs.

وفقا لبيانات الأدبيات الأجنبية ونتائج دراسة أجريت في TsNIKVI، فإن طريقة التطعيم المناعي لها حساسية عالية (98.8-100٪) وخصوصية (97.1-100٪) لتشخيص مرض الزهري.

7. نطاق تطبيق الطريقة

تعتبر اللطخة المناعية (immunoblotting) طريقة مرجعية محددة للغاية وحساسة للغاية. تسمح الحساسية والنوعية العالية باعتبار هذه الطريقة بمثابة اختبار تأكيدي لمرض الزهري. يمكن استخدام هذه الطريقة لتأكيد التشخيص، وكذلك في الحالات التي تعطي فيها اختبارات اللولبيات الأخرى نتائج مشكوك فيها ومتناقضة. باستخدام التطعيم المناعي، يمكنك تأكيد التشخيص لدى المرضى الذين لديهم نتائج اختبار إيجابية أو غير محددة، بما في ذلك تلك التي تم الحصول عليها باستخدام RPGA أو ELISA.

8. مصادر وأسباب الأخطاء أثناء الإنتاج والنتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة

النتائج الإيجابية الكاذبة نادرة جدًا. النتائج السلبية الكاذبة نادرة جدًا أيضًا ويتم ملاحظتها في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة - في أغلب الأحيان عند المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية وبتأثير "نافذة" تشخيصية بسبب التأخير في تخليق الأجسام المضادة، وكذلك في حالة حدوث أخطاء في مرحلة التشخيص.

إن استخدام أنظمة الاختبار الحديثة يفرض الالتزام الصارم بجميع المتطلبات لكل من المادة وتنفيذ التفاعل. في الأساس، مصدر الأخطاء هو انتهاك ترتيب وتقنية الدراسة (خاصة بالنسبة لللطخة الغربية الكلاسيكية)، وعدم الامتثال لتوصيات الشركات المصنعة لمجموعة الاختبار. . قد تحدث أخطاء أيضًا أثناء جمع عينات المصل وتسليمها وتخزينها وأثناء الاختبار. بالإضافة إلى العينات الفاسدة، تشمل الأسباب المحتملة الأخرى استخدام مجموعات اختبار منتهية الصلاحية، بالإضافة إلى أخطاء في تحليل نتائج الدراسة.

9. الميزات والمزايا والعيوب

يكمن تفرد الكتلة المناعية في محتواها العالي من المعلومات وموثوقية النتائج.

لا يتطلب الاختبار مستضدات عالية النقاء أو أمصال مرجعية أو ضابطة. يعتمد تحديد هدف الجسم المضاد على الوزن الجزيئي للبروتين الذي تتفاعل معه الأجسام المضادة من مصل المريض. في تفاعل واحد، يمكن اكتشاف ارتباط الجسم المضاد بمستضدات متعددة، ويمكن وصف كل منها بدقة. ونتيجة لذلك، يتمتع التطعيم المناعي بعدد من المزايا مقارنة بالطرق الأخرى للكشف عن الأجسام المضادة، والتي تعتمد نتائجها على التوحيد القياسي أو الحساسية أو جودة الركيزة أو عدم الاستقرار أو عدم قابلية ذوبان مستضدات معينة

هذه الطريقة قابلة للتكرار بسهولة، وبسيطة نسبيًا في أداء النتائج وتفسيرها، وتجعل من الممكن تحديد طيف الأجسام المضادة للعديد من مستضدات T. pallidum في وقت واحد وتقييم مساهمة الأجسام المضادة ذات الخصائص المختلفة في الاستجابة الشاملة.

إن استخدام المستضدات المؤتلفة والببتيدية عالية النقاء يقلل من تفاعل المصل غير النوعي. استخدام هذه الطريقة يجعل من الممكن تجنب العمالة الكثيفة و أساليب ذاتيةتشكل خطرا على الباحث (تلقيح سلالات G. الشاحبة، والعمل مع T. الشاحبة المسببة للأمراض عند تنظيم رد فعل). يحدد هذا تفضيل طريقة التطعيم المناعي على اختبارات اللولبيات الأخرى (RIF وخاصة RIBT) لتشخيص مرض الزهري.

10. تعديلات الطريقة

هناك العديد من أنظمة الاختبار التجارية القائمة على هذه الطريقة. بعضها مصنوع في الشكل لطخة غربية، تتكون من شرائط يتم نقل مكونات بروتين T. pallidum إليها، والتي تم فصلها مسبقًا بواسطة الرحلان الكهربائي في هلام بولي أكريلاميد.

والبعض الآخر في الشكل لطخة خطية، تتكون من شرائط يتم امتصاص الببتيدات المؤتلفة والصناعية عليها في شكل خطوط منفصلة - نظائرها للمستضدات السطحية لـ T. pallidum و TpN15 و TpN17 و TpN47 و TmpA.

من الصعب تفسير نتائج اللطخة الغربية لأن الشرائط تكشف عن مجموعة واسعة من الأجسام المضادة، العديد منها خاص بالمجموعة. في المقابل، تفسير نتائج لطخة الخط واضح ومباشر؛ بالإضافة إلى ذلك، تسمح خطوط التحكم الإضافية المطبقة على الشريط بإجراء تقييم شبه كمي لمستوى الأجسام المضادة لأربعة مستضدات T. pallidum.

تقنية اكس ماب

xMAP هي تقنية حديثة تسمح بإجراء دراسات متعددة المعلمات من خلال الكشف المتزامن لتحليلات متعددة في عينة بيولوجية واحدة. تُستخدم الكريات المجهرية الملونة المطلية بكواشف الالتقاط (أليغنوكليوتيدات، والأجسام المضادة، والمستضدات) كمرحلة صلبة.

تضاف عينة الاختبار إلى المحلول الذي يحتوي على الكرات المجهرية. ترتبط المواد التحليلية المكتشفة في العينة بالغلاف الميكروي المقابل، وبعد ذلك تتم إضافة عامل الكشف (الأجسام المضادة للكشف، ملصق الفلورسنت) إلى المحلول. للكشف عن الحليلة التي يتم تحديدها، يتم استخدام نظام من ليزرين، مما يسمح بإجراء تقييم نوعي لوجود الحليلة في العينة (لهذا، يتم استخدام الليزر الأحمر، لتصنيف الكرات المجهرية حسب اللون)، وتقييم كمي. تقييم محتوى الحليلة في العينة (يتم استخدام الليزر الأخضر لهذا الغرض).

كلما تم اكتشاف مرض الزهري في وقت مبكر وأكثر دقة، كلما كان العلاج أبسط وزاد احتمال أن يسير الأمر بسلاسة بالنسبة للمريض.

الهدف من جميع الاختبارات المعملية هو نفسه: إجراء التشخيص بشكل لا لبس فيه وبسرعة. لكن أياً من اختبارات التقنية العالية الحديثة لمرض الزهري لا يعطي النتيجة بشكل لا لبس فيه وبدقة 100٪. يتم تحسين الطرق القديمة، ويتم اختراع طرق جديدة، ولكن لا يزال يتعين على الأطباء في الممارسة السريرية استخدام مجموعة من الاختبارات المختلفة لمرض الزهري. لا يمكن للأطباء الاعتماد على نتيجة أي شيء واحد.

هناك العديد من أنواع اختبارات مرض الزهري بحيث يستحيل فهم جميع الاختصارات على الفور:

تم التعرف على المرض لأول مرة باستخدام تفاعل مختبري في عام 1906. وهذا فضل العالم الألماني أوغست واسرمان، الذي سمي التفاعل باسمه. لقد مر الكثير من الوقت منذ ذلك الحين، والطريقة قديمة ولم يتم تطبيقها في الممارسة العملية، ولكن تشخيص مرض الزهري لا يزال مرتبطا بقوة بتحليل RV.

قد يحتاج الشخص إلى الخضوع لاختبار مرض الزهري لعدة أسباب.
السبب الأول الذي يتبادر إلى ذهنك هو عندما تشك في الإصابة، وفي الواقع ليس هذا هو الأكثر شيوعا. في هذه الحالة، من المهم أن نفهم أن العدوى لها فترة حضانة (من لحظة الإصابة حتى تكوين القرحة) وفترة مصلية أولية (القرحة في الأسابيع الثلاثة الأولى) - خلال هذا الوقت ستكون الاختبارات سلبية . لذلك، إذا كانت المخاوف جدية، يتم تكرار الاختبارات بعد بضعة أسابيع.

في كثير من الأحيان، يحتاج الأشخاص الذين لا يشكون في وجود أي عدوى إلى إجراء اختبار لمرض الزهري. ويحدث هذا عادةً عند التقدم لوظيفة (يتم تضمين التحليل في السجل الطبي) وأثناء الفحوصات الطبية الدورية (الفحوصات الطبية). من الضروري أيضًا التبرع بالدم لمرض الزهري:

• الجهات المانحة,
• النساء في الأسابيع الأولى من الحمل - مرتين، عند التسجيل في عيادة ما قبل الولادة وفي مستشفى الولادة قبل أسابيع قليلة من الولادة،
• المرضى قبل الجراحة أو أي إجراءات طبية أخرى ( مجموعة التركيز، تنظير القصبات، الخ).

وفي نهاية المقال أجبنا على الأكثر التعليماتالأشخاص الذين تم تشخيص إصابتهم بمرض الزهري. ليس هناك وقت لقراءة تفاصيل حول طرق البحث -.

جميع أنواع اختبارات مرض الزهري

هناك مجموعتان رئيسيتان من طرق البحث لمرض الزهري: المباشرة وغير المباشرة.

• طريقة مباشرة- هذه دراسة يتم فيها البحث عن العدوى نفسها في المادة الحيوية - الممثلين الفرديين للعامل الممرض ككل، أو قطعهم - الحمض النووي.
• الأساليب غير المباشرة(التفاعلات المصلية) هو اختبار يحاولون من خلاله اكتشاف الأجسام المضادة للعامل المسبب لمرض الزهري في الدم. والمنطق هو كما يلي: إذا تم العثور على استجابة مناعية مميزة لنوع ما من العدوى، فهذا يعني أن هناك عدوى نفسها التي تسببت في هذه الاستجابة المناعية.

الطرق المباشرة- الأكثر موثوقية: إذا تم "القبض على" البكتيريا متلبسا، فإن وجود المرض يعتبر مثبتا. لكن من الصعب اكتشاف الإصابة باللولبية الشاحبة، ولا تستبعد نتائج الاختبار السلبية وجود العدوى. من المنطقي إجراء هذه الدراسات فقط في حالة وجود طفح جلدي ومتى فقط شكل مبكرمرض الزهري - ما يصل إلى عامين من المرض. أولئك. من المستحيل تحديد مرض الزهري الكامن أو أشكاله المتأخرة باستخدام هذه الطرق، لذلك نادرًا ما يتم استخدامها في الممارسة السريرية وفقط لتأكيد الاختبارات الأخرى.

تشمل الطرق المباشرة ما يلي: الفحص المجهري ذو المجال المظلم، إصابة حيوانات المختبر، تفاعل البوليميراز المتسلسل .

1. المجهر الميداني المظلم ( TPM) - فحص اللولبية الشاحبة تحت المجهر. المادة مأخوذة من القرحة أو الطفح الجلدي. هذه الطريقة رخيصة وسريعة، وتكتشف مرض الزهري في بداية الفترة الأولية، عندما تكون اختبارات الدم الخاصة بمرض الزهري سلبية. لكن البكتيريا الموجودة بكميات صغيرة في الطفح الجلدي قد لا يتم التقاطها بسهولة عن طريق الكشط. بالإضافة إلى ذلك، يمكن بسهولة الخلط بين اللولبية الشاحبة والسكان الآخرين في تجويف الفم والقناة الشرجية وما إلى ذلك.
2. تعد إصابة حيوانات المختبر طريقة مكلفة للغاية ومضنية، وتستخدم فقط في الممارسة البحثية.
3. تفاعل البوليميراز المتسلسل- طريقة جديدة نسبيًا يبحثون عنها الحمض النوويالالتهابات. أي نسيج أو سائل قد يحتوي على اللولبية الشاحبة يكون مناسبًا للبحث: الدم، البول، إفرازات البروستاتا، القذف، كشط من الطفح الجلدي، من الجهاز البولي التناسلي، البلعوم الفموي أو الملتحمة. التحليل حساس ومحدد للغاية. لكنها معقدة ومكلفة. يوصف في حالة وجود نتائج مشكوك فيها لاختبارات أخرى.

الطرق غير المباشرة، والمعروفة أيضًا بالتفاعلات المصلية، هي أساس الاختبارات المعملية لمرض الزهري. يتم استخدام هذه الأساليب للفحص الشامل للسكان، لتأكيد التشخيص ومراقبة العلاج. تنقسم طرق البحث غير المباشرة إلى اختبارات غير اللولبية واختبارات اللولبية.

الاختبارات غير اللولبية أرخص بشكل ملحوظ. لتنفيذها، لا يستخدمون بروتين المستضد نفسه، وهو خاص باللولبية اللولبية الزهري، ولكن بديله، مستضد الكارديوليبين. هذه الاختبارات حساسة للغاية ولكنها غير محددة بشكل جيد. وهذا يعني أن مثل هذه الاختبارات ستحدد كل شخص مصاب بمرض الزهري وأكثر من ذلك: يمكن أيضًا أن يحصل الأشخاص الأصحاء على نتائج إيجابية كاذبة. يتم استخدامها للفحص الشامل للسكان، ولكن في حالة وجود نتيجة إيجابية فإنها تتطلب بالضرورة تأكيدًا من خلال اختبارات أكثر تحديدًا - اختبارات اللولبيات. تعتبر الاختبارات غير اللولبية أيضًا مفيدة جدًا في تقييم فعالية العلاج: متى علاج فعاليتناقص حجم الأجسام المضادة في الدم، وينخفض ​​​​عيارها وفقًا لذلك (سنتحدث عن هذه التتر بمزيد من التفصيل). النتيجة الأكثر موثوقية لهذه الاختبارات غير اللولبية ستكون خلال مرض الزهري المبكر، وخاصة في الفترة الثانوية.

تشمل الاختبارات غير اللولبية ما يلي:

• رد فعل واسرمان( ، هي تكون عربة سكن متنقلة، أو RSK) - لقد عفا عليه الزمن بالفعل وغير مستخدم، ولكن نظرًا لارتباطه القوي بالمرض، غالبًا ما يكون هذا هو الاسم الذي يطلق على أي اختبار لفحص السكان بحثًا عن مرض الزهري. إذا رأيت ملاحظة "التحليل" في إحالة الطبيب عربة سكن متنقلة" - لا تشعر بالحرج، في المختبر، من المحتمل أن يفهموا كل شيء بشكل صحيح وسوف يفعلون ذلك RPR.
• تفاعل الهطول الدقيق (السيد، هي نفسها RMP) هو اختبار بسيط ورخيص للكشف عن مرض الزهري. كان يستخدم سابقًا كاختبار رئيسي غير اللولبي، ولكنه الآن أفسح المجال لاختبار أكثر ملاءمة وموضوعية RPR-امتحان.
• اختبار البلازما السريع (RPR-test) هو اختبار سريع وبسيط ومريح للفحص الشامل للسكان ومراقبة العلاج. وهو الاختبار الرئيسي غير اللولبي المستخدم في روسيا والخارج.
• يثق - هذا تعديل أكثر حداثة RPR-امتحان. يتم تعيينه خلاف ذلك على أنه RPR- اختبار مع التولودين الأحمر. في روسيا يتم استخدامه فقط في عدد صغير من المختبرات.
• VDRL - هذا التحليل متشابه في موثوقية النتائج RMP، وهو أدنى أيضاً RPR. لم يتم العثور على استخدام واسع النطاق في روسيا.
• اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية-امتحان(أو تعديله - RST-اختبار) - أكثر تقدمًا VDRLاختبار، ولكن في روسيا يتم استخدامه أيضًا بشكل نادر للغاية.

اختبارات اللولبيةيتم إجراؤها باستخدام المستضدات اللولبية. فهي أكثر تحديدًا، وبالتالي فهي تفرز بعناية الأصحاء من المرضى. لكن حساسيتها أقل، وقد تغفل مثل هذه الاختبارات عن الشخص المريض، خاصة في مرحلة مبكرة من المرض. ميزة أخرى هي أن اختبارات اللولبيات تظهر في وقت متأخر عن الاختبارات غير اللولبية، بعد ثلاثة إلى أربعة أسابيع فقط من ظهور القرحة. لذلك، لا يمكن استخدامها كاختبارات فحص. الغرض الرئيسي من اختبارات اللولبيات هو تأكيد أو دحض نتائج الاختبارات غير اللولبية.

كما أن نتائج اختبارات اللولبيات ستظل إيجابية لعدة سنوات بعد العلاج الناجح. ولهذا السبب لا يتم استخدامها لمراقبة فعالية العلاج، وأيضاً لا يتم الاعتماد على نتائج هذه الاختبارات إلا إذا تم تأكيدها باختبارات غير اللولبية.

تشمل اختبارات اللولبية ما يلي:

• آر بي جي إيه (أو تعديله الأكثر حداثة - تربا، ترنا) - رد فعل تراص الدم السلبي. رد الفعل اللولبي الرئيسي يستخدم الآن في الخارج وفي روسيا. اختبار بسيط ومريح لتحديد الأجسام المضادة لمرض الزهري في الجسم.
• إليسا (مضاد لـ Tr. pallidum مفتش / الغلوبولين المناعي) - المقايسة المناعية الإنزيمية، والمعروفة أيضًا باسم إليسامن الاختصار الانجليزي . يمكن إجراء هذا الاختبار باستخدام مستضد الكارديوليبين ومستضد اللولبيات. يمكن استخدامه كفحص وتأكيد. من حيث الموثوقية، فهي ليست أقل شأنا آر بي جي إيهوهو أيضًا اختبار اللولبيات الموصى به لتأكيد تشخيص مرض الزهري.
• اللطخة المناعية- هذا متقدم أكثر تكلفة إليسا-امتحان. تستخدم فقط في الحالات المشكوك فيها.
• الشعاب المرجانية - رد فعل المناعي. تحليل صعب ومكلف من الناحية الفنية. وهو ثانوي ويستخدم لتأكيد التشخيص في الحالات المشكوك فيها.
• ريبت (RIT) - رد فعل الشلل (الشلل) اللولبية الشاحبة. رد الفعل هذا معقد ويستغرق وقتًا طويلاً ويصعب تفسير النتيجة. لا يزال يُستخدم في بعض الأماكن، ولكنه يتلاشى تدريجيًا في الخلفية، مما يفسح المجال أمامه آر بي جي إيهو إليسا.

تفسير الاختبارات المصلية لمرض الزهري:

خوارزمية لتشخيص مرض الزهري

يتكون أي تشخيص من ثلاث ركائز أساسية للطب: التاريخ الطبي (التاريخ الطبي)، الاعراض المتلازمة(الأعراض) والفحص المخبري. إذا كان الطبيب بناء على قصة المريض والفحص الخارجي لجسمه يشتبه في إصابته بمرض الزهري فإنه يصف مجموعة من الاختبارات (أو مجموعة من التفاعلات المصلية - KSR). يجب أن يتضمن اختبارًا واحدًا غير لولبي ( RMPأو RPR) و 1 اختبار اللولبي ( آر بي جي إيهأو إليسا). إذا تباينت نتائج هذه الاختبارات، يتم إجراء اختبار اللولبيات البديل الإضافي ( إليساأو آر بي جي إيه). هذا هو أبسط مخطط. في حالة وجود مؤشرات مشكوك فيها، اعتمادا على الحالة، يصف الطبيب طرق تشخيصية أخرى.

اختبار سريع لمرض الزهري، أو كيفية تحديد مرض الزهري في المنزل

هناك اختبار لمرض الزهري يمكنك إجراؤه بنفسك. يمكن شراؤه مجانًا من الصيدلية، ومتوسط ​​التكلفة هو 200-300 روبل. مبدأ تحديد المرض يشبه غير اللولبية RPR. يدعي المصنعون دقة عالية، لكنها في الواقع منخفضة، لا تزيد عن 70٪.

تشبه خوارزمية الفحص اختبار الحمل، حيث يتم استخدام الدم فقط بدلاً من البول. يتم وضع قطرة دم على المؤشر، وخلال 10-15 دقيقة تظهر النتيجة. شريط واحد - اختبار سلبي، شريطين - اختبار إيجابي.
لا نوصي بهذه الطريقة التشخيصية. إذا كانت لديك أي شكوك حول مرض الزهري، فمن الأفضل استشارة الطبيب على الفور، أو على الأقل مختبر مستقل. سيكون أكثر تكلفة قليلاً وأطول، ولكنه أكثر دقة.

فك رموز نتائج مرض الزهري: الإيجابيات والصلبان والاعتمادات.

تعتمد تكتيكات الطبيب الإضافية على نتائج اختبارات معينة. يتم التعبير عن نتائج اختبارات الفحص إما بالتقاطعات (الإيجابيات) أو في إدخال منفصل:

4 أو 3 تهجينات - نتيجة إيجابية، ومن الضروري إجراء فحص إضافي لمرض الزهري باستخدام طرق تشخيصية أخرى.
2 أو 1 نتيجة مشكوك فيها، وينصح بتكرار النتيجة بعد 10 أيام.
0 تهجين - نتيجة سلبية، لم يتم اكتشاف مرض الزهري.

في حالة وجود رد فعل إيجابي ومشكوك فيه، أبحاث إضافيةالدم المأخوذ: تخفيفه من 1:2 إلى 1:1024 وإضافة قطرة من مستضد الكارديوليبين إلى كل عيار دم. تسجل النتيجة الحد الأقصى للعيار الذي حدث عنده التفاعل: كلما زاد التخفيف، زاد المزيد من القيمةعيار، كلما زادت كمية اللولبية الشاحبة في الدم. لكن المهمة الرئيسية لتحديد العيار ليست حساب درجة تلوث الدم، بل مراقبة نجاح العلاج: يعتبر العلاج فعالا إذا انخفض العيار 4 مرات خلال 4 أشهر. بحلول نهاية العلاج، يجب أن تكون الاختبارات غير اللولبية سلبية.

لوحظت أعلى حساسية لاختبارات الفحص في الفترة الثانوية من مرض الزهري (100٪)، وأقل قليلاً في المرحلة الابتدائية (86٪) وحتى أقل في المرحلة الثالثة (73٪).

الفروق الدقيقة الهامة في تشخيص مرض الزهري:

1. عند إجراء الاختبارات، من الممكن الحصول على نتائج إيجابية كاذبة. وهي شائعة بشكل خاص أثناء العروض. إذا لم تكن مصابًا بمرض الزهري من قبل وكانت الاختبارات إيجابية، فلا داعي للذعر على الفور؛ فأنت بحاجة إلى إجراء اختبار بديل آخر على الأقل.
2. تحدث أيضًا نتائج سلبية كاذبة. إذا كان هناك شك في مرض الزهري، فمن الأفضل تكرار الاختبار بعد بضعة أسابيع.
3. يظل مرض الزهري الذي تم علاجه إيجابيًا في اختبارات اللولبيات لعدة سنوات أو مدى الحياة.

الأسئلة الأكثر شيوعاً حول اختبارات مرض الزهري

كيف يتم إجراء اختبار مرض الزهري مجانًا؟

للقيام بذلك، عليك الذهاب إلى العيادة في مكان إقامتك وزيارة طبيبك المحلي، الذي سيعطيك إحالة لإجراء الاختبار. اختبار مرض الزهري مجاني لجميع المقيمين الترددات اللاسلكيةوفقا للسياسة التأمين الطبي الإلزامي.

أين يمكنني إجراء اختبار مرض الزهري دون الكشف عن هويتي؟

يمكن إجراء الاختبارات بشكل مجهول في أي مختبر مدفوع الأجر، وغالبًا ما تقدم مستوصفات الجلد والأوردة هذه الخدمة بنفسها. من الممكن أيضًا اختبار مرض الزهري في المنزل باستخدام الاختبارات السريعة التي تباع في الصيدليات. ومع ذلك، يجب أن نتذكر أن مثل هذا الاختبار لا يعطي نتيجة دقيقة، وإذا كنت تشك في مرض الزهري، يجب عليك استشارة الطبيب.

كم يوما بعد الجماع يمكنك التبرع بالدم لمرض الزهري؟

في 1-1.5 أشهر. في حالة حدوث العدوى، سيكون اختبار مرض الزهري إيجابيًا في موعد لا يتجاوز سبعة إلى عشرة أيام بعد ظهور القرحة، أو بعد 4-5 أسابيع من الإصابة. قد تكون هذه الفترة أطول، فإذا كانت النتائج سلبية، يجب تكرار الاختبار بعد أسبوعين.

أين يتم أخذ الدم لمرض الزهري؟

يتم أخذ الدم الخاص بمرض الزهري في أغلب الأحيان من الوريد، ولكن يمكن أيضًا أخذه من الإصبع. ذلك يعتمد على نوع التحليل.

تحضير. كيف يتم فحص مرض الزهري؟

قبل التبرع بالدم لعلاج مرض الزهري، يجب ألا تأكل لمدة أربع ساعات - يجب التبرع بالدم على معدة فارغة. بالإضافة إلى ذلك، يجب ألا تشرب الكحول قبل 12 ساعة من الاختبار. وهذا أمر مهم لأن تلف الكبد من الكحول يمكن أن يسبب اختبارات إيجابية كاذبة.

كم من الوقت يستغرق اختبار مرض الزهري في المتوسط؟

عادة ما تُعرف النتائج في اليوم التالي. لا يستغرق إجراء الاختبارات السريعة أكثر من 30 دقيقة.

ما هو الاختبار الذي يتم إجراؤه لمرض الزهري وما اسمه؟

للفحص، عندما لا يكون هناك اشتباه في المرض أيضا RMP(رد فعل الهطول الجزئي)، أو RPR(اختبار البلازما السريع). في بعض الأحيان تسمى اختبارات الفحص هذه باختبار واسرمان.

إذا كانت هناك أية شكوك أو شكوك حقيقية، فإنها لا تقتصر أبدًا على تحليل واحد. قم بإجراء إحدى مجموعات الفحص في نفس الوقت ( RMPأو RPR) وواحدة من أي مجموعة اختبار أكثر تحديدًا ( آر بي جي إيهأو إليسا)، ثم التصرف بناءً على النتائج وتاريخ المريض.

هل يمكن أن يكون اختبار مرض الزهري خاطئًا؟

ربما! احتمالية الخطأ طرق مختلفةيعتمد في المقام الأول على فترة المرض والحالة العامة للجسم.

تكون الاختبارات غير اللولبية أكثر حساسية في ذروة المرض - في الفترة الثانوية. نظرًا لخصوصيتها المنخفضة، فإنها غالبًا ما تعطي نتائج إيجابية كاذبة. قد يحدث هذا بسبب الحمى أو الأنفلونزا أو غيرها الأمراض المعديةوالتطعيمات الأخيرة والأمراض المزمنة وعدد من الأسباب الأخرى.

تكون اختبارات اللولبية أكثر حساسية في الفترة اللاحقة. ويمكنها أيضًا أن تعطي نتائج إيجابية كاذبة، ولكن فقط إذا كانت هناك بكتيريا مسببة للأمراض مشابهة لبكتيريا اللولبية الشاحبة في الجسم وتسبب أمراضًا أخرى: داء اللولبيات غير التناسلية بينتا (نادر في روسيا) أو مرض لايم (ينتقل عن طريق لدغة القراد).

نتائج الاختبار السلبية الكاذبة ممكنة مع جميع طرق التشخيص. وهي تعتمد على الاستجابة المناعية للجسم: عدم الاستجابة – عدم وجود رد فعل تجاه مرض الزهري. وهذا ممكن عند الأشخاص المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية، وكذلك أولئك الذين يعانون من ضعف المناعة لأسباب أخرى. بالإضافة إلى ذلك، هناك رد فعل عكسي: فرط إنتاج الأجسام المضادة، وهو تأثير "البروزون"، حيث يوجد الكثير من الأجسام المضادة التي تمنع بعضها البعض من التفاعل مع المستضد. والنتيجة هي نتيجة سلبية كاذبة.

هل يمكن للاختبارات العامة أن تظهر مرض الزهري؟

لا يمكن تحديد مرض الزهري إما عن طريق فحص الدم العام أو عن طريق اختبار الكيمياء الحيوية. لن تظهر ذلك التحليل العامالبول أو المسحة المهبلية العادية. جميع اختبارات مرض الزهري متخصصة للغاية ولكل منها اسم خاص بها. باستخدام أي اختبارات أخرى، من المستحيل حساب ما إذا كان الشخص مصابا بمرض الزهري أم لا. ولكن ماذا ستظهر الاختبارات الأخرى إذا كان الشخص مصابًا بمرض الزهري؟ دعونا ننظر إلى كل واحد منهم:

تعداد الدم الكامل: يظهر خلايا الدم الرئيسية – خلايا الدم الحمراء، خلايا الدم البيضاء، الصفائح الدموية. في نهاية المرحلة الابتدائية وفي بداية الفترة الثانوية قد ترتفع كريات الدم البيضاء لدى الشخص وتزيد أيضًا إسر- مؤشر للالتهاب. هذه مؤشرات غير محددة تشير ببساطة إلى أن الجسم يقاتل ضدها عدوى بكتيرية. خلاف ذلك، فإن فحص الدم يتوافق مع الحالة العامة للجسم.

فحص الدم البيوكيميائي: يوضح أداء الكبد والكلى والقلب والبنكرياس والأعضاء الأخرى. إذا لم يؤثر مرض الزهري بعد على هذه الأعضاء، وأنها تعمل بشكل صحيح، فسيكون فحص الدم طبيعيا.

اختبار البول العام: يوضح عمل الكلى ونظام الغدد الصماء، كذلك الحالة العامةجسم. إذا كانت حادة أو الأمراض المزمنةهذه الأنظمة غير موجودة - سيكون التحليل طبيعيا.

اللطاخة المهبلية: تحدد ما إذا كانت هناك عملية التهابية أو ورم، وكذلك دسباقتريوز. من المستحيل تشخيص مرض الزهري باستخدام مثل هذه اللطاخة.

الفصل:		أمراض النساء جراحة المسالك البولية أمراض المفاصل أمراض تناسلية أمراض الجهاز الهضمي علم الوراثة المعالجة المثلية الأمراض الجلدية طب المناعة والحساسية الأمراض المعدية أمراض القلب التجميل طب الأعصاب الأورام طب الأنف والأذن والحنجرة طب العيون المستقيم الطب النفسي أمراض الرئة الأمراض الجنسية طب الأسنان علاج الرضوح وجراحة العظام جراحة الغدد الصماء علاج النطق
الكلمات الدالة:
يبحث		جميع الكلمات:
		كلمة واحدة على الأقل:

إجمالي الصفحات: 3
الصفحات: 01

ملخص. مكان العمل الأخير: المعهد الفيدرالي الحكومي للعلوم "معهد البحوث المركزي لعلم الأوبئة" التابع للخدمة الفيدرالية للمراقبة في مجال حماية حقوق المستهلك ورفاهية الإنسان. معهد مشاكل معقدةاستعادة القدرات الاحتياطية البشرية. أكاديمية الأسرة والثقافة الأبوية "عالم الأطفال" في إطار البرنامج الوطني للتنمية الديموغرافية في روسيا مدرسة آباء المستقبل "التواصل قبل الولادة" مسمى وظيفي: باحث كبير. طبيب أمراض النساء والتوليد، أخصائي الأمراض المعدية. تعليم 1988-1995 معهد موسكو الطبي لطب الأسنان الذي سمي على اسمه. سيماشكو تخصص الطب العام (دبلوم EV رقم 362251) 1995-1997 الإقامة السريرية في MMSI الذي يحمل اسمه. سيماشكو في تخصص “أمراض النساء والتوليد” بتقدير “ممتاز”. 1995 "التشخيص بالموجات فوق الصوتية في أمراض النساء والتوليد" RMAPO. 2000 "الليزر في الطب السريري" RMAPO. 2000 "الأمراض الفيروسية والبكتيرية خارج وأثناء الحمل" NTSAGi P RAMS. 2001 "أمراض الثدي في ممارسة طبيب أمراض النساء والتوليد" NCAG وP RAMS. 2001 "أساسيات التنظير المهبلي. أمراض عنق الرحم. طرق العلاج الحديثة أمراض حميدةعنق الرحم" NCAG وP RAMS. 2002 "فيروس نقص المناعة البشرية - العدوى والتهاب الكبد الفيروسي" RMAPO. 2003 امتحانات "المرشحة الدنيا" في تخصص "أمراض النساء والتوليد" و"الأمراض المعدية".

سؤال:مرحبًا، في عام 2014، أجريت اختبارًا لمرض الزهري (مضاد اللولبية الشاحبة Ig M - سلبي؛ مضاد اللولبية الشاحبة إجمالي Ig M + Ig G نصف. KP 11.2 Titer 1:640؛ RMP - إيجابي +++ Titer 1:8). "لقد أجريت اختبارات في مختبر مستقل. وبهذه الاختبارات جئت لرؤية طبيب أمراض تناسلية، وبعد عدة اختبارات تأكيدية، تم التشخيص: "الزهري الكامن المبكر"، لأن لم يكن لدي وليس لدي أي علامات مرض خارجية. خضعت لعلاج المرضى الداخليين (البنسلين في العضل لمدة 20 يومًا (80 مليون وحدة دينار كويتي)؛ بيانات الاختبار بعد الخروج من المستشفى: rmp_3+;ifa IgM (+)KP=1.4.IgG(+) KP=5.5.rpga 4+;rif abs 3+; rif200 2+;التهاب الكبد الوبائي - مسحات سلبية للأمراض المنقولة جنسيا - لا يوجد علم الأمراض. حاليا أنا في السيطرة المصلية، لأن الاختبارات الأخيرة أعطت نتيجة إيجابية ضعيفة (أخذت EDS في ديسمبر 2015) قبل ذلك، لمدة ستة أشهر كانت النتائج سلبية و لقد أرادوا بالفعل إلغاء تسجيلي، وأوصى الطبيب بأن أعود لإجراء الاختبارات في غضون 6 أشهر: في يونيو/حزيران. ورغبة في معرفة ما إذا كانت اختباراتي قد تغيرت نحو الأفضل، أخذتها إلى مختبر مستقل في أبريل/نيسان 2016، وهنا النتيجة: IgM سلبي، إجمالي IgM + IgG إيجابي. CP = 24.939 عيار 1:1280، RMP إيجابي +++ عيار 1:32. يرجى توضيح سبب كون النتائج سيئة للغاية. لقد أصبحت أسوأ بكثير مما كانت عليه قبل العلاج. مستبعد: لم أمارس الجماع منذ اكتشاف المرض.

جواب الطبيب:مرحبًا! تحتاج إلى الاتصال بطبيبك. أعد إجراء التحليل في KVD.

الخدمات الطبية في موسكو:

سؤال:مرحبًا! ساعدني في فك تشفير تحليل المسؤولية الاجتماعية للشركات: مضاد اللولبية الشاحبة IgM سلبي، مضاد اللولبية الشاحبة إجمالي IgM + IgG إيجابي KP 11.2 عيار 1:640، مرض الزهري EDS(RMP) إيجابي +++ عيار 1:8. ماذا يعني ذلك؟

جواب الطبيب:مرحبًا! أنت مريض بمرض الزهري، تحتاج إلى رؤية طبيب الأمراض الجلدية والتناسلية.

سؤال:مرحبًا! قل لي، من فضلك، في عام 2010. بعد التبرع بالدم، كمتبرع، تلقيت نتائج إيجابية ضعيفة لاختبارات محددة لمرض الزهري (RIF، DAC). ظلت RW وMCI سلبية باستمرار. تحاليل زوجي كلها سلبية لم أمرض من قبل. تم تكرار الاختبارات 6 مرات (من يوليو إلى نوفمبر) - ولم تتغير نتائج الاختبار. تم علاجها في المستشفى (21 يومًا، 8 حقن بنسلين يوميًا في العضل).

2011 - RW وMCI بالنسبة لي ولزوجي سلبيان.

2012 - أصبحت حاملاً، وكانت نتائج RW وMCI سلبية. زوجي يفعل ذلك أيضًا. لا يوصف العلاج المهني. في ديسمبر 2012 أنجبت.

الطفل في مستشفى الولادة لديه نتائج فحص الدم (BCT)، المتخصصين الضيقينالأشعة السينية - سلبية.

بعد أسبوعين من الولادة، أقوم بإجراء اختبارات من طبيب الأمراض الجلدية لإلغاء التسجيل - RW وMCI - سلبي، RIF، CSR - إيجابي ضعيف. إعادة الاختبارات في مارس.

في سن 43 يومًا، خضع الطفل لاختبار MCI - وكانت النتيجة سلبية. لم يأخذوا الدم لإجراء اختبارات محددة لأنهم لم يتمكنوا من العثور على تاج، لذلك قاموا بتأجيله حتى مارس.

يصر KozhVenDispanser على العلاج الوقائي للطفل، وكتبت أنا وزوجي رفضًا للخضوع للعلاج الوقائي.

لا ترغب في حقن طفل عمره شهر ونصف بالمضادات الحيوية "في حالة حدوث ذلك".

من فضلك قل لي ما سبب نتائج الاختبار هذه بالنسبة لي؟

ما هو احتمال أن يكون الطفل مريضا حقا؟

كم مرة يجب على الطفل التبرع بالدم وإلى أي عمر؟

ما هي نتائج الاختبار الحاسمة لإلغاء التسجيل؟

عندما يذهب ابني إلى روضة الأطفال، هل ستكون الممرضة على علم بتشخيصي وشكوكي بمرض الطفل؟ نحن لا نتحدث حتى عن السرية الطبية...

كيف تشرح لموظفي عيادة الأطفال أن الطفل من المحتمل أن يكون مصابًا بمرض الزهري الخلقي وماذا يصرخ في الممر عندما يكون هناك صف من الآباء مع الأطفال في كل مكان: "أوه، هذا أنت مصاب بمرض الزهري، تفضل، الآن نحن" سأجري اختبارًا!" - على الأقل ليس بشكل صحيح (هذا سر طبي لك!!!).

كيف نشرح للطبيب في المركز الطبي أن صحة الطفل هي في المقام الأول رعايتنا ومسؤوليتنا الأبوية. إذا، عند محاولة مناقشة المسار المحتمل للمرض والعلاج المحتمل، يتم سماع العبارات: "هل أنت طبيب؟ ما الفرق الذي يحدثه لك، ما زلت لا تفهم! لذلك ترفض حقنه، و "إنه لن يعيش ليرى ثلاث سنوات معك، تذكر كلماتي. على الإنترنت، هل قرأته؟ حسنًا، ربما ستعالجه بنفسك؟"

شكرا مقدما على إجابتك.

جوليا

جواب الطبيب:مرحبًا! من الصعب التوصية بأي شيء في حالتك. لا يحتاج الطفل إلى العلاج إلا إذا كانت الاختبارات إيجابية، ويجب إجراؤها كل 6 أشهر. كتابة شكوى إلى الطبيب الرئيسي أو وزارة الصحة ضد الأطباء الذين لا يراعون السرية الطبية. خذ مسجلاً صوتيًا وسجل جميع البيانات الموجهة إليك. يمكنك الاستعانة بمحامي... لا تستسلم، ناضل من أجل حقوقك، رغم أن الأمر في أوكرانيا أصعب منه في روسيا.

سؤال:مرحبًا! الحمل 23 أسبوعا. من فضلك أخبرني ما إذا كنت بحاجة إلى الخضوع لعلاج وقائي إذا تم اختبار النتائج التالية (ثلاث مرات) لمرض الزهري: CSR A1-، A2-، Microreaction - سلبي، RGPA3+، RIF3+، ELISA M - لم يتم اكتشافه، G 3. لم أتلق العلاج مطلقًا , الحمل الثالث . شريك جنسي واحد (الزوج) لمدة 12 سنة. جميع اختباراته سلبية. شكرًا لك

جواب الطبيب:مرحبًا! ليست هناك حاجة للخضوع للعلاج. الملاحظة مطلوبة.

سؤال:لقد أصبت بمرض الزهري منذ 3 سنوات، والآن لدي اختبار TPHA إيجابي 1:320، IgM سلبي، IgG 173، RPR إيجابي، هل أحتاج إلى الخضوع للعلاج مرة أخرى؟ شكرا مقدما على إجابتك

جواب الطبيب:مرحبًا. يشير اكتشاف IgG إلى وجود مناعة ضد هذا المرض. تتم الإشارة إلى نشاط العملية من خلال الكشف عن IgM. تشخيص الزهري الكامن: تفاعل الهطول الدقيق (MPR) أو نظيره RPR/RPR التناظري في الإصدارات النوعية والكمية (الاختبارات غير اللولبية)، وفي حالة وجود نتيجة إيجابية، التأكيد في اختبارين اللولبيات في وقت واحد من ما يلي: RPGA، ELISA، RIF، DAC، RIT (قبل 2006). "اختبار لويس RPR"، "اختبار لويس RPGA"، "ICE Syphilis"، "درجة INNO LIA Syphilis". يتم تحديد مسألة العلاج خلال التشاور وجهاً لوجه. يجب عليك استشارة طبيب تناسلية.

إجمالي الصفحات: 3
الصفحات: 01

اختبارات الدم المصلية مهمة للغاية. حاليًا، يتم استخدام مجموعة معقدة من التفاعلات المصلية - عادةً ما يتم استخدام تفاعل فاسرمان الكلاسيكي وتفاعلين رواسب. من بين تفاعلات الرواسب، يتم استخدام تفاعلات خان وساكس فيتيبسكي والسيتوكوليك في أغلب الأحيان.

يتم تحديد نتائج الدراسات المصلية بالإيجابيات على النحو التالي: + + + + إيجابية للغاية، + + + إيجابية، + + و + إيجابية ضعيفة؛ يشار إلى رد الفعل السلبي بعلامة ناقص (-).

بالإضافة إلى مجموعة التفاعلات المصلية المشار إليها، تم في السنوات الأخيرة اختبار تثبيت اللولبية الشاحبة (اختبار نيلسون ماير)، والذي يتم إجراؤه باستخدام مستضد محدد(تعليق اللولبية الشاحبة). هذا التفاعل أكثر تحديدًا من مجموعة التفاعلات المذكورة التي يتم إجراؤها باستخدام مستضدات غير محددة. يعتبر اختبار نيلسون ماير ذو قيمة خاصة في تحديد خصوصية تفاعل واسرمان الإيجابي وتفاعلات الرواسب لدى الأفراد الذين ليس لديهم أعراض مرض الزهري.

التفاعلات المصلية خلال فترات مختلفة من مرض الزهري. القيمة التشخيصية للتفاعلات المصلية في فترات مختلفة من مرض الزهري ليست هي نفسها. في الفترة الأولية - في غضون 2-3 أسابيع بعد ظهور مرض الزهري الأولي - عادة ما تكون التفاعلات المصلية سلبية؛ بدءًا من الأسبوع 3-4 تصبح إيجابية لدى بعض المرضى. ومع اقتراب المرض من المرحلة الثانوية، تزداد نسبة التفاعلات المصلية الإيجابية، وبحلول وقت ظهور المرض أعراض ثانويةمرض الزهري تصبح إيجابية في ما يقرب من 100٪ من المرضى.

في الفترات الثانوية والمتكررة الجديدة من المرض، تظل التفاعلات المصلية في الدم إيجابية في ما يقرب من 100٪ من المرضى.

في الفترة الثالثة من مرض الزهري مع المظاهر النشطة للمرض، يمكن أن تكون التفاعلات المصلية في كثير من الأحيان سلبية، في حوالي 15٪ من المرضى، وفي غياب الأعراض النشطة للمرض، يمكن أن يصل عدد التفاعلات السلبية إلى 30-40٪ .

التفاعلات المصلية كمعيار للعلاج الناجح لمرض الزهري. يجب إجراء علاج محدد لمرض الزهري تحت سيطرة التفاعلات المصلية. عادة، في المرضى الذين يعانون من فترات جديدة إيجابية مصلية وثانوية، تصبح التفاعلات المصلية سلبية بعد 1-2 أشهر من العلاج العقلاني لمرض الزهري. وفي فترة الانتكاس الثانوي قد تصبح سلبية في نفس الوقت أو بعد ذلك بقليل. إذا لم تصبح التفاعلات المصلية سلبية خلال الإطار الزمني المحدد، فهذا يدل على عدم كفاية فعالية العلاج. في مثل هذه الحالات، من الضروري زيادة فعالية العلاج، ولكن ليس عن طريق زيادة جرعة الأدوية، ولكن عن طريق تغيير طريقة العلاج وإضافة طرق العلاج غير النوعية.

يمكن اعتبار التفاعلات المصلية الإيجابية للغاية في غياب الأعراض السريرية أحد أعراض مرض الزهري، بشرط أن تظل إيجابية بقوة عند الاختبار المتكرر وأن يتم إجراء الدراسة في مختبر مصلي مؤهل.

التفاعلات المصلية الإيجابية الضعيفة في غياب الأعراض السريرية وغيرها من البيانات لا يمكن أن تكون بمثابة دعم لتشخيص مرض الزهري. يجب أن تؤخذ هذه النتائج في الاعتبار فقط في الحالات التي كان فيها المريض مصابًا بمرض الزهري في الماضي وتم علاجه وفقًا لذلك. قد تكون التفاعلات المصلية الإيجابية الضعيفة مهمة أيضًا إذا كان المريض يعاني من مرض مجهول السبب. في هذه الحالات، يجب تقييم نتائج التفاعلات المصلية مع الأخذ في الاعتبار البيانات السابقة للذاكرة والسريرية والمخبرية الأخرى.

تفاعلات مصلية غير محددةيمكن ملاحظتها في العديد من الأمراض. وبالتالي، غالبا ما تحدث نتيجة إيجابية حادة مع الجذام والحمى الراجعة. في الملاريا والسل وداء البروسيلات والعديد من الأمراض المعدية الأخرى، وكذلك في المرضى الذين يعانون من أورام خبيثة، عادة ما تكون النتائج إيجابية أو إيجابية ضعيفة (+ + +) ونادرا ما تكون إيجابية بقوة (+ + + +).

استخدم قبل الدراسة مشروبات كحوليةأو الأطعمة الدهنية قد تسبب رد فعل إيجابي ضعيف وغير محدد. يجب أخذ الدم لإجراء الدراسات المصلية على معدة فارغة.

وفي حالة عدم وجود مختبر مصلي، يوصى بإرسال الدم لفحصه عن طريق البريد في ظرف على شكل “قطرة جافة”.

للحصول على قطرة جافة، يتم سحب 5 مل من الدم من الوريد المرفقي في أنبوب اختبار. يُترك أنبوب الدم لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. يتم فصل الجلطة الدموية الناتجة عن جدران أنبوب الاختبار بسلك مكلس ومبرد، ثم يوضع الدم في مكان بارد حتى صباح اليوم التالي. في اليوم التالي، استخدم ماصة متدرجة لسحب 0.75 مل من المصل، والذي يتم تطبيقه على ورق الشمع أو شريط من السيلوفان. يُترك المصل على الورق أو السيلوفان حتى اليوم التالي في درجة حرارة الغرفة، لحمايته من الغبار والذباب. بعد ذلك، يتم لف ورق الشمع أو السيلوفان مع المصل المجفف على شكل مسحوق دوائي، ووضعه في مظروف وإرساله بالبريد مع مذكرة مصاحبة إلى أقرب مختبر مصلي.

تجدر الإشارة إلى أن طريقة التفاعلات المصلية باستخدام "قطرة الدم المجففة" أقل موثوقية من الطريقة المعتادة.

يعتمد تشخيص مرض الزهري على البيانات السريرية والمخبرية. من بين هذه الأخيرة، تعد الدراسات المصلية ذات قيمة كبيرة، والتي يتم إجراؤها ليس فقط لتأكيد تشخيص مرض الزهري، ولكن أيضًا لمراقبة ديناميكياته تحت تأثير العلاج.

تمثل أمصال مرض الزهري اليوم منطقة منفصلةمعرفة. مخلوق ردود فعل مختلفة، استقبل في دول مختلفةالاعتراف بالدولة. ومن المهم أن يتم تفسير النتائج التي تم الحصول عليها بشكل صحيح، وهو ما لا يمكن تحقيقه إلا من خلال معرفة أساسيات علم الأمصال.

في بلادنا، للتشخيص المصلي لمرض الزهري، وفقاً للتوصيات المنهجية لوزارة الصحة، يتم استخدام ما يلي:

التفاعل الدقيق لهطول الأمطار (MR) مع مستضد الكارديوليبين هو اختبار فحص لفحص السكان بحثًا عن مرض الزهري؛

يتم استخدام اختبار بلازما الريجين (RPR)، وهو أيضًا غير لولبي، كاختبار فحص؛

مجموعة معقدة من التفاعلات المصلية (CSR)، والتي تتضمن تفاعل التثبيت التكميلي (CFR) مع مستضدات اللولبيات والكارديوليبين والرنين المغناطيسي؛

تفاعل تجميد اللولبية الشاحبة (TRIRT)، حيث يتم استخدام اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض من سلالة نيكولز كمستضد؛

تفاعل التألق المناعي (RIF) (في التعديلات: RIF-abs وRIF-c وRIF مع الدم الشعري من الإصبع)؛ يتم استخدام اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض من سلالة نيكولز كمستضد في RIF؛

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA) مع مستضد من اللولبية الشاحبة المزروعة أو المسببة للأمراض؛

مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) مع مستضد من اللولبية الشاحبة الثقافية أو المسببة للأمراض.

كل هذه التفاعلات لها حساسية وخصوصية مختلفة ويوصى باستخدامها اعتمادًا على المهمة المطروحة.

خلال الفحوصات الوقائية الجماعية للسكان لمرض الزهري، يتم استخدام MR مع بلازما الدم أو مصل الدم المعطل للموضوعات. يتم تقييم نتائج التفاعل -

نوعيا مثل 4+، 3+، 2+ والسلبية. وتتمثل ميزة الطريقة السريعة في سرعة الحصول على الإجابة (في 30-40 دقيقة)، وحجم الدم الصغير المطلوب للاختبار (2-3 قطرات)، والذي يمكن أخذه من المرضى من الإصبع.

وباستخدام هذه الطريقة السريعة، يتم فحص الأفراد الذين يخضعون لفحوصات دورية. فحوصات طبيهللأمراض المنقولة جنسيا، والمرضى في المستشفيات الجسدية، والأشخاص المودعين في مراكز الاحتجاز الخاصة. إذا تم استخدام الطريقة السريعة بشكل منفصل، فهي مجرد اختبار فحص. بناءً على نتيجته الإيجابية، لا يتم تشخيص مرض الزهري، ويتم إحالة الأشخاص إلى طبيب الأمراض الجلدية والتناسلية لمزيد من العلاج. فحص طبي بالعيادةوفحص دمهم باستخدام أي من الاختبارات التشخيصية الأخرى (DSR، RIBT، RPGA، ELISA أو RIF). لا يتم استخدام الطريقة السريعة عند النساء الحوامل أو المتبرعين لأنها غالبًا ما تعطي نتائج إيجابية كاذبة. متوسط العاملين في المجال الطبيالذين خضعوا لتدريب خاص، يأخذون الدم من الإصبع ويقومون بإجراء التصوير بالرنين المغناطيسي. ويجب على أطباء المختبر أن يأخذوا نتائجه بعين الاعتبار.

تُستخدم مراكز RSC مع مستضدات اللولبيات والكارديوليبين لتأكيد تشخيص مرض الزهري في وجود مظاهر نشطة للمرض، لفحص الأشخاص الذين مارسوا اتصالاً جنسيًا مع مريض مصاب بمرض الزهري، لتحديد مرض الزهري الكامن (الكامن)، وفعالية العلاج عند فحص المرضى في مستشفيات الأمراض النفسية والعصبية والمتبرعين والحوامل بما في ذلك الأشخاص المحالين للإجهاض.

يتم أخذ الدم للبحث بمبلغ 5-7 مل من الوريد الزندي بإبرة معقمة، مع مراعاة قواعد التعقيم. ش الرضعويمكن الحصول على الدم من الوريد الصدغي أو من شقوق في الكعب. يتم أخذ الدم بشكل صارم على معدة فارغة (5-6 ساعات بعد الأكل) ويترك في أنابيب نظيفة وجافة لمدة 2-3 ساعات في درجة حرارة الغرفة للتجلط. يتم إجراء اختبار DSR وردود الفعل المحددة في المختبرات المصلية لمؤسسات الجلد والتناسلية، وفي المناطق الريفية - في مختبرات مستشفيات المناطق الريفية.

تعتبر طريقة القطرة الجافة ملائمة جدًا لإرسال الدم للاختبار إلى المختبرات البعيدة. للقيام بذلك، في اليوم التالي بعد جمع الدم، يتم فصل المصل عن الجلطة. باستخدام ماصة مدرجة، خذ 1 مل من المصل واسكبه على شكل دائرتين منفصلتين على شريط من الورق السميك (الشمع أو السيلوفان) بقياس 6 × 8 سم تقريبًا، وعلى الحافة الحرة للورقة، اكتب اسم عائلة المريض، الاسم الأول والعائلي وتاريخ جمع الدم والرقم التسلسلي. يُترك المصل على الورق، محميًا من أشعة الشمس المباشرة والغبار.

لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة حتى يجف. بعد ذلك، يتم لف شرائح من الورق مع المصل المجفف وإرسالها إلى المختبر.

RSC في CSR مع مستضد الكارديوليبين ليس حساسًا جدًا ويصبح إيجابيًا بعد 2-4 أسابيع من ظهور القرحة، ويزداد عيار الريجين تدريجيًا ويصل إلى الحد الأقصى (1:160-1:320 وما فوق) مع مرض الزهري الثانوي الطازج. ثم ينخفض ​​​​عيار الريجين تدريجيا وفي حالة مرض الزهري الثانوي المتكرر لا يتجاوز عادة 1:80-1:20. في المرضى الذين يعانون من مرض الزهري الثالثي، تعطي هذه التفاعلات نتيجة إيجابية فقط في 70٪ من الحالات.

يجب التأكيد على أن المسؤولية الاجتماعية للشركات ليست محددة بشكل صارم لمرض الزهري وفي بعض الحالات يمكن أن تعطي نتائج إيجابية كاذبة (غير محددة). ولوحظت ردود الفعل الإيجابية الكاذبة هذه في المرضى الذين يعانون من الجذام والملاريا، وأحيانا مع أمراض المناعة الذاتية، والأورام، والالتهاب الرئوي، والسل، وأمراض الكبد، عند تناول الأدوية (السلفوناميدات، الجلوكوزيدات، حشيشة الهر، وما إلى ذلك)، وكذلك أثناء الحمل والحيض الخ د. عند أخذ الدم لاختبار المسؤولية الاجتماعية للشركات، من الضروري تحذير الموضوع بحيث لا يشرب الكحول أو الأطعمة الدهنية أو يتناوله قبل 2-3 أيام. الأدوية. لا ينصح باختبار الدم خلال الأسبوع الأول بعد التطعيم، أو الإصابة، أو الجراحة، أثناء حالات الحمى، خلال أول أسبوعين بعد الولادة، عند الأطفال حديثي الولادة في الأيام العشرة الأولى من الحياة، لأن التغيرات الفيزيائية والكيميائية في مصل الدم في هذه الظروف قد تكون مشابهة لتلك التي لوحظت في المرضى الذين يعانون من مرض الزهري.

ويمكن أيضًا الحصول على نتائج إيجابية كاذبة بسبب أخطاء فنية (انحلال الدم غير الكامل، جمع الدم غير المعقم، عدم كفاية مؤهلات فنيي المختبرات).

للتمييز بين نتائج CSR الإيجابية الكاذبة والنتائج الحقيقية، لتشخيص الأشكال الكامنة والمتأخرة من مرض الزهري، في حالة الاشتباه في الإصابة بمرض الزهري، لإنشاء تشخيص بأثر رجعي للمرض، يوصى باستخدام اختبارات مصلية محددة (RIBT، RPGA، ELISA أو ريف)

لإجراء تفاعلات مصلية محددة، يتم أيضًا أخذ الدم بكمية 5-10 مل من الوريد المضاد للعدوى على معدة فارغة. يتم سكب الدم في أنبوب اختبار جاف لاختبار RIBT وفي أنبوب اختبار معقم لاختبار RIBT. يتم إجراء تفاعلات مصلية محددة لمرض الزهري في المختبرات المتخصصة التابعة لمؤسسات الأمراض الجلدية والتناسلية.

يعتمد RIF على طريقة غير مباشرة لتحديد الأجسام المضادة الفلورية. المستضد في هذا التفاعل هو عبارة عن معلق من اللولبية الشاحبة المزروعة المقتولة، مثبت على شرائح زجاجية، حيث يتم تطبيق الاختبار ومصل الفلورسنت المضاد للأنواع. يتم تحديد نتائج RIF تحت المجهر الفلوري من خلال تقييم توهج اللولبيات في التحضير. إذا كانت النتيجة إيجابية، فإن اللولبيات لها توهج أخضر مصفر، ويتم الإشارة إلى درجة ذلك من خلال الإيجابيات من 1 إلى 4؛ مع نتائج سلبية، لا تتوهج اللولبيات.

رد فعل محدد آخر لمرض الزهري - RIBT - يعتمد على ظاهرة تجميد اللولبية الشاحبة بواسطة مستضدات مصل دم المريض في وجود مكمل. يتم استخدام معلق اللولبية الشاحبة الحية التي تم الحصول عليها من الأرانب المصابة بمرض الزهري كمستضد لـ RIBT. يتم إحصاء اللولبيات التي فقدت القدرة على الحركة (المشلولة) تحت المجهر. يتم تقييم نتائج التفاعل كنسب مئوية: من 0 إلى 20% - سلبي، من 21 إلى 30% - مشكوك فيه، من 31 إلى 50% - إيجابي ضعيف، من 51 إلى 100% - إيجابي. يصبح RIBT إيجابيًا في نهاية الفترة الأولية لمرض الزهري ويظل كذلك خلال جميع فترات هذا المرض، وأحيانًا حتى بعد العلاج الكامل المضاد للزهري. في مرض الزهري الثالثي، وآفات محددة في الأعضاء الداخلية، والجهاز العصبي، والزهري الخلقي، عندما يكون CSR سلبيًا في كثير من الأحيان، يعطي RIBT نتائج إيجابية في 98-100٪ من الحالات. يجب تأكيد تشخيص مرض الزهري الكامن عن طريق اختبار RIBT إيجابي.

يمكن أن يعطي RIBT أيضًا نتائج إيجابية كاذبة إذا كان مصل الاختبار يحتوي على مواد مبيدة لللولبيات (المضادات الحيوية - البنسلين والتتراسيكلين) التي تسبب تجميدًا غير محدد (سامًا) لللولبية الشاحبة. لذلك، لا يمكنك اختبار رد الفعل هذا في دمك قبل أسبوعين من التوقف عن تناول المضادات الحيوية.

يمكن أيضًا استخدام الدراسات المصلية لتحديد الأضرار التي لحقت بالجهاز العصبي بسبب مرض الزهري عن طريق فحص السائل النخاعي للمريض. يتم فحصه أيضًا بحثًا عن وجود عناصر البروتين والإنزيم، التي تشير إلى علم الأمراض وتساعد في تشخيص شكل أو آخر من أشكال الزهري العصبي. يتم الحصول على السائل النخاعي عن طريق البزل القطني. يتم إجراؤها بشكل معقم، ولا تشكل أي خطر ويمكن أن يقوم بها الطبيب حتى في العيادة الخارجية. الدراسات المصلية السائل النخاعييشار في جميع حالات مرض الزهري