طرق الديدان الطفيلية. الفحص المجهري للبراز

تنقسم البروتوزوا إلى 4 فئات:

عند تكيسها، تكتسب الكائنات الحية الدقيقة شكلًا دائريًا ومغطاة بقشرة واقية. في شكل كيس، تصبح الأوليات أقل عرضة للإصابة العوامل غير المواتيةبيئة.

قد يكون ما يلي خاضعًا للبحث:

ملحوظة:هناك أنواع عديدة من التشخيصات، وسننظر في الأنواع الأكثر شيوعًا في الممارسة المخبرية السريرية.

أنواع خاصة من التشخيص

في كل حالة محددة، يتم تكليف مساعد المختبر بالعثور على عامل ممرض محدد، وفي بعض الأحيان يتم اكتشاف مسببات أخرى بالإضافة إلى العامل الرئيسي.

هناك 6 أنواع من هذه الكائنات الحية الدقيقة قادرة على العيش في الأمعاء البشرية. الأهمية السريريةفقط الأميبا الزحارية، التي تحدث في شكل نباتي وعلى شكل كيسات، هي التي تمتلك المرض.

بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام الطرق المناعية:

• التألق المناعي غير المباشر؛
• التراص غير المباشر (INA)؛
• الانتشار المناعي الشعاعي.

ملحوظة: الطرق المصلية ليست مفيدة للغاية وتستخدم فقط كإضافة إلى الطرق الرئيسية في الحالات المشكوك فيها.

تشخيص الهدبية (الهدبية)

الشكل الممرض للكائنات الحية الدقيقة من هذا الجنس هو البلانتيديوم. هذا هو الميكروب الذي يسبب داء الحويصلات، وهو مرض يصاحبه عملية تقرحية في الأمعاء الغليظة. تم اكتشاف العامل الممرض في اللطاخة الأصلية على شكل شكل نباتي وكيس. يتم أخذ مادة اللطاخة (البراز والمخاط) أثناء فحص التنظير السيني وزرعها على وسائط خاصة.

تشخيص السوطيات (الليشمانيا، الجيارديا، المثقبيات، المشعرات)

الليشمانيا، المثقبيات، اللامبليا، والمشعرات تشكل خطورة على البشر.

الليشمانيا– يتم فحص الميكروبات المسببة لداء الليشمانيات في مسحات الدم والمواد نخاع العظم، تتسلل قصاصات من الجلد. في بعض الحالات، عند تشخيص الليشمانيا، يتم استخدام الثقافة على الوسائط المغذية.

المثقبيات- العوامل المسببة لمرض النوم (داء المثقبيات الأمريكي/الأفريقي، أو مرض شاغاس).

يتم تحديد المتغير الأفريقي في الفترة الأولية أثناء دراسة الدم المحيطي. توجد الميكروبات المرضية مع تقدم المرض في مادة ثقوب العقد الليمفاوية مراحل متقدمة- في السائل النخاعي.

لتشخيص داء المثقبيات في حالة الاشتباه في داء شاغاس، يتم فحص المادة التي يتم فحصها تحت المجهر بتكبير منخفض. في هذه الحالة، يتم تلطيخ المسحات والقطرات السميكة مسبقًا.

المشعرة(الأمعاء، الفم،) يتم الكشف عنها عن طريق الفحص المجهري للمواد المأخوذة من الأغشية المخاطية المصابة.

تحديد هوية الحيوانات البوغية (البلازموديوم الملاريا، العامل المسبب للكوكسيديا، وما إلى ذلك)

أكثر الأنواع شيوعًا وخطورة على البشر هي المتصورة الملاريا، التي تحتوي على 4 أنواع رئيسية من مسببات الأمراض: العامل المسبب للملاريا لمدة ثلاثة أيام، والملاريا لمدة أربعة أيام، والملاريا الاستوائية والملاريا البيضوية.

يحدث التطور الجنسي للبلازموديوم (sporogony) في بعوض الأنوفيلة. اللاجنسي (فصام الأنسجة وكرات الدم الحمراء) - في أنسجة الكبد البشرية وكريات الدم الحمراء. هذه المواصفات دورة الحياةيجب أن تؤخذ في الاعتبار عند تشخيص بلازموديوم الملاريا.

وهكذا، في دم المريض المصاب حديثًا، يمكن اكتشاف الخلايا الجرثومية للدورة البوغية. ولكن في ذروة هجمات الملاريا، تظهر المتقسمات بأعداد كبيرة في الدم.

علاوة على ذلك، في مراحل مختلفةحمى الملاريا تظهر نفسها أشكال متعددةالبلازموديوم:

• خلال فترة البرد، يمتلئ الدم بالميروزويت، وهو نوع من المتقسمات؛
• في درجات حرارة مرتفعة، تتراكم التروفوزويت على شكل حلقة في كريات الدم الحمراء؛
• يتميز انخفاض درجة الحرارة بغلبة الجوائز الشبيهة بالأميبا.
• خلال فترات حالة طبيعيةيحتوي الدم على أشكال بالغة من المتقسمات.

يتم إجراء دراسة العامل المسبب للملاريا (البلازموديوم الملاريا) في مسحة وفي قطرة سميكة.

ملحوظة:في بعض الأحيان يكون تشخيص الملاريا عن طريق فحص المسحات وقطرات الدم السميكة خاطئًا. قد تعزى الصفائح الدموية في بعض الحالات عن طريق الخطأ إلى مسببات مرض الملاريا. وفي بعض الأحيان تحاكي أجزاء من الكريات البيض والخلايا الأخرى البلازموديوم.

الطرق الأساسية لدراسة الأوليات

دعونا نلقي نظرة سريعة على طرق البحث الأكثر شيوعًا لوجود الأوليات.

تشخيص الأوليات باستخدام مسحة محلية ومسحة ملطخة بمحلول لوغول (في البراز)

يتم تحضير الدواء من مستحلب البراز في محلول متساوي التوتر. يتم وضع قطرتين من كلور الصوديوم ومحلول لوغول على شريحة زجاجية. تتم إضافة مادة الاختبار إلى كلا التركيبتين بعصا خشبية، وبعد تغطيتها بالزجاج، يتم عرضها بدقة مجهرية مختلفة.

يتم تسجيل الأوليات الموجودة بناءً على خصائص معينة. للتأكد من الدقة، قم بإعداد 2-3 مستحضرات من نفس المادة. في الحالات المشكوك فيها، يتم تكرار التحليل عدة مرات خلال 2-3 أسابيع.

يمكن لهذه الطريقة اكتشاف الأشكال الخضرية والكيسية:

• لامبليا.
• بالنتيديوم.
• الأميبا الزحارية.

جنبا إلى جنب مع الأشكال المسببة للأمراض، يتم تحديد الأوليات غير المسببة للأمراض أيضا. يوجد أيضًا في الناقلات الصحية أشكال لامعة وكيسية.

مهم:وينبغي إجراء البحوث مرارا وتكرارا لتجنب عدم الدقة والأخطاء.

يجب أن تحتوي نتيجة تشخيص الأوليات باستخدام طريقة اللطاخة الأصلية والملطخة على وصف لشكل العامل الممرض (اللمعة، الكيس، الأنسجة).

متطلبات البحث:

• يتم فحص المواد المأخوذة للتحليل (البراز السائل) في موعد لا يتجاوز 30 دقيقة بعد التغوط؛
• يجب تشخيص البراز الرسمي خلال ساعتين بعد التغوط؛
• يجب ألا تحتوي المادة على شوائب ( المطهراتالماء، البول)؛
• للعمل مع المواد، استخدم العصي الخشبية فقط، والزجاجية ليست مناسبة بسبب انزلاق المخاط؛
• يجب حرق العصي مباشرة بعد الاستخدام.

طريقة الحفظ (فحص البراز) لتشخيص الأوليات

يتم إجراء الدراسة عن طريق تثبيت الأوليات بمادة حافظة. الفرق بين هذه الطريقة والطريقة السابقة هو أن المواد الحافظة تسمح لك بالحفاظ على الدواء لفترة طويلة.

المواد الحافظة المستخدمة:

• رابية. يحتوي على مكونات حافظة: 0.7 مل كلوريد الصوديوم، 5 مل فورمالين، 12.5 مل كحول 96٪، 2 جرام فينول و 100 مل ماء مقطر. تركيبة التلوين: محلول 0.01% من الثيونين (الأزورا).
• حل سفرليف. المكونات: 1.65 جرام كبريتات الزنك، 10 مل فورمالين، 2.5 جرام فينول بلوري، 5 مل حمض الاسيتيك، 0.2 جم ميثيلين أزرق، 100 مل ماء. يتم استخدام هذه المادة الحافظة في الحالات التي يجب فيها تخزين المادة لمدة تزيد عن شهر.

تمتلئ الزجاجات الفارغة بمادة حافظة، وتنقل المادة إليها بنسبة 3:1، ثم تضاف الصبغة إذا لزم الأمر. يتم تقييم النتائج عند دراسة 2-3 أدوية.

طريقة تخصيب الفورمالين-إيثر (تحليل وجود الأوليات في البراز)

تسمح لك طريقة التشخيص هذه بفصل وتركيز الأكياس الأولية. المكونات التالية مطلوبة للتحليل: الفورمالديهايد (10 مل)، 0.85 جم من محلول متساوي التوتر، ماء مقطر، الأثير الكبريتي، حل لوغول.

يتم خلط خليط المادة الحيوية مع السوائل المذكورة وطرده مركزيًا. يتم تلوين الرواسب التي تم الحصول عليها في الجزء السفلي من أنبوب الاختبار بمحلول لوغول ويتم فحصها بحثًا عن وجود الخراجات والأشكال الخضرية.

طريقة الكشف عن الليشمانيا (مسحة نخاع العظم)

لتشخيص داء الليشمانيات يتم استخدام الكواشف التالية: خليط نيكيفوروف (الإيثر الكبريتي والأثير الكبريتي). الإيثانول)، عازلة الفوسفات، أزور يوزين وفقا لرومانوفسكي.

يتم وضع مادة النخاع العظمي بعناية شديدة على شريحة زجاجية بعد تحضير خاص. يتم استخدام المجهر مع نظام الغمر.

في الفترة الحادةيتم الكشف عن الأمراض في ثقب عدد كبير منالليشمانيا.

ملحوظة:في بعض الأحيان قد تشبه خلايا الدم الليشمانيا المعالجة، لذلك من المهم جدًا أن يكون فني المختبر حذرًا وأن يكون لديه الخبرة الكافية لفحصها بشكل مستقل.

طريقة الكشف عن الليشمانيا في مسحة من ارتشاح الجلد

الكواشف المطلوبة مشابهة للتحليل السابق.

يتم الحصول على مادة الاختبار من محتويات الحديبة أو التقرحات الموجودة. في حالة الاشتباه في داء الليشمانيات، يتم إجراء الكشط بعناية شديدة باستخدام مشرط، بدون دم. ثم يتم تحضير المستحضر على الزجاج. للتأكد من دقة النتائج التي تم الحصول عليها، يتم فحص العديد من الاستعدادات في وقت واحد.

إذا كان هناك مرض بين الخلايا البلعمية، أو الخلايا الليفية الموجودة في مادة الاختبار، الخلايا الليمفاويةتم اكتشاف الليشمانيا أيضًا.

طريقة لعزل مزرعة الليشمانيا النقية التي تم الحصول عليها عن طريق كشط الأنسجة المرضية

باستخدام هذه الطريقة لتشخيص الأوليات، يتم وضع قصاصات الأنسجة في وسط غذائي خاص تتكاثر فيه الليشمانيا بشكل نشط.

قبل أخذ الكشط، يتم معالجة الجلد جيدًا بالكحول، ثم يتم عمل شق في الحديبة، ويتم إزالة محتوياتها من الأسفل ووضعها في أنبوب اختبار به وسط. يتم أخذ المادة عدة مرات، وبعد ذلك يتم وضعها في أنابيب اختبار مختلفة. ثم تتم الزراعة في منظم الحرارة عند درجة حرارة 22-24 درجة. ويتم تقييم النتائج تحت المجهر. يتم استخدام هذه الطريقة عندما تكون طريقة أخرى أرخص و طرق سريعةتشخيص البروتوزوا غير فعال.

يمكنك معرفة كيفية فك رموز اختبارات وجود الأوليات باستخدام قطرة دم من خلال مشاهدة مراجعة الفيديو:

لوتين ألكسندر، كاتب عمود طبي

يتم فحص البراز باستخدام طريقتين:

1. العيانية - الكشف عن الديدان الطفيلية ورؤوسها وأجزاءها وشظاياها. يتم خلط أجزاء صغيرة من البراز مع الماء في حمام مسطح أو طبق بيتري ويتم عرضها في ضوء جيد خلفية داكنةباستخدام عدسة مكبرة إذا لزم الأمر. يتم نقل جميع التكوينات المشبوهة باستخدام الملقط إلى كوب آخر به ماء أو على شريحة زجاجية في قطرة من الجلسرين المخفف.

مع الطريقة الدفاعيتم خلط جزء البراز الذي يتم اختباره مع الماء في أسطوانة زجاجية، وبعد تسويته، يتم تصريف الطبقة العليا من الماء. ويتكرر هذا عدة مرات. عندما يصبح السائل شفافًا، يتم تصريفه وفحص الرواسب في طبق بيتري.

2. مجهرية – الكشف عن بيض ويرقات الديدان الطفيلية. هناك العديد من طرق البحث.

1). مسحة أصلية – طريقة البحث الأكثر شيوعًا والتي يمكن الوصول إليها تقنيًا. يمكن اكتشاف بيض ويرقات جميع الديدان الطفيلية. ومع ذلك، مع وجود عدد قليل من البيض، ليس من الممكن دائما العثور عليها. ولذلك، يتم استخدام طريقة الإثراء.

1). طريقة فوليبورج – هذه طريقة تخصيب تعتمد على تعويم بيض الديدان الطفيلية في محلول كلوريد الصوديوم المشبع (1.2 – الكثافة؛ 400 جم من كلوريد الصوديوم لكل 1 لتر من الماء؛ محلول كلوريد الصوديوم 40٪). هذه الطريقة أكثر فعالية من اللطاخة الأصلية. يتم وضع 2-5 جم من البراز في مرطبانات زجاجية ومليئة بمحلول كلوريد الصوديوم، مع التحريك وبعد 45 دقيقة، قم بإزالة الفيلم الناتج بحلقة معدنية، ثم ضع قطرة من الجلسرين على شريحة زجاجية. فحص تحت المجهر. عيب هذه الطريقة هو الظهور البطيء لبيض الديدان الطفيلية المختلفة ، والدودة الشريطية القزمة - بعد 15-20 دقيقة ، والدودة المستديرة - 1.5 ساعة ، والدودة السوطية - 2-3 ساعات.

2) طريقة كالانتاريان – وهي أيضًا طريقة للتخصيب، ولكن يتم استخدام محلول مشبع من NaNO 3 (كثافة 1.38). معظم البيض يطفو، ولا يلزم إجراء اختبار الرواسب. العيب هو أن إبقاء البيض في المحلول لفترة طويلة يؤدي إلى حقيقة أن بعض البيض يبدأ في الانتفاخ ويستقر في القاع ويختفي من الفيلم السطحي.

3. طريقة جورياتشيف – على أساس مبدأ ترسب البيض، والكشف عن بيض الديدان المثقوبة الصغيرة. يتم استخدام محلول كلوريد الصوديوم المشبع كمحلول ويتم وضع 3-4 مل من محلول البراز بعناية في الأعلى. بعد 15-20 ساعة، يستقر بيض تريماتود في القاع. يتم تصريف السائل ووضع الرواسب على شريحة زجاجية وتحت المجهر.

4. طريقة التواء شولمان – للكشف عن يرقات الديدان الطفيلية في البراز. يتم فحص البراز الطازج فقط. يوضع 2-3 جرام في وعاء زجاجي ويضاف إليه كمية من الماء 5 أضعاف، ويقلب بسرعة بالعصا دون ملامسة جدران الوعاء - لمدة 20-30 دقيقة، ثم يتم إزالة العصا بسرعة، وتوضع قطرة من يتم نقل السائل في النهاية إلى شريحة زجاجية ومجهر.

5. طريقة بيرمان - يعتمد على قدرة يرقات الديدان الطفيلية على الهجرة نحو الحرارة، ويعمل على التعرف عليها في البراز.

6. طريقة هارادا وموري (طريقة تربية اليرقات) ويوصى به لاختبار عدوى الدودة الشصية. تعتمد هذه الطريقة على حقيقة أنه في الحرارة وعلى الورق المفلتر الرطب، يتطور بيض الدودة الشصية إلى يرقات خيطية الشكل، والتي يمكن اكتشافها بسهولة. يتم وضع 15 جرام من البراز على منتصف شريط من الورق المفلتر، وتوضع الورقة التي تحتوي على البراز في وعاء بحيث يتم غمر الطرف السفلي في الماء ويتم تأمين الطرف العلوي بسدادة. يتم حفظ الجرة في منظم حرارة عند 28 درجة مئوية لمدة 5-6 أيام. تتطور اليرقات الخيطية خلال هذا الوقت وتنزل في الماء. يتم فحص السائل تحت عدسة مكبرة. إذا كان من الصعب اكتشافه، يتم طرد السائل، بعد قتل اليرقات أولاً عن طريق التسخين إلى درجة حرارة 60 درجة. يجب على مساعد المختبر ارتداء القفازات.

7. طرق داء المعوية – التعرف على بيض الدودة الدبوسية والدودة الشريطية البقرية.

أ) كشط من الطيات حول الشرج – بقطعة قطن ملفوفة بإحكام على عصا خشبية ومبللة بمحلول جلسرين 50٪. في المختبر، يتم غسل المسحة باستخدام 1-2 قطرات من محلول مائي 50٪ من الجلسرين.

ب) طريقة العث اللزج (طريقة جراهام)

يتم وضع الشريط اللاصق على الطيات حول الشرج، ثم يتم وضع الطبقة اللاصقة على شريحة زجاجية وفحصها تحت المجهر.

ج) الكشط باستخدام قضبان العين (طريقة رابينوفيتش). بالنسبة للكشط حول الشرج، يتم استخدام قضبان زجاجية للعين، الجزء العريض منها مغطى بغراء خاص، مما يسمح لك بالاحتفاظ ببيض الدودة الدبوسية.

فحص الدم والصفراء والبلغم والعضلات

يكشف الفحص المجهري للدم عن يرقات الفيلاريا.

فحص البلغم - بيض الباراجانيم، يرقات الدودة، الفواكة، الأسطوانيات، عناصر المثانة المشوكية.

فحص العضلات - في حالة الاشتباه في داء الشعرينات، يتم فحص عضلات المريض أو الجثة، وكذلك اللحوم التي من المفترض أنها تسببت في إصابة الشخص بالعدوى. لغرض تنظير الشعرينة، يتم تقطيع العضلة إلى قطع صغيرة ووضعها في ضاغط، وهما عبارة عن كأسين عريضين وسميكين يسحقان العضلات، وتوجد يرقات الشعرينيلا على شكل كبسولات - وهي طريقة ضغط.

طريقة الهضم – تمتلئ العضلات بعصير المعدة الاصطناعي (محلول حمض الهيدروكلوريك والبيبسين). يتم هضم العضلات، ويتم التعرف على اليرقات بسهولة. تحديد شدة الغزو: عدد اليرقات يصل إلى 200 لكل 1 جرام الأنسجة العضلية- شدة الغزو معتدلة؛ ما يصل إلى 500 - مكثفة. أكثر من 500 – غزو فائق الكثافة.

الطرق المصلية

الفصل الثالث. تشخيص داء الديدان الطفيلية وطرق بحث الديدان الطفيلية

من الضروري إجراء فحص للديدان الطفيلية لجميع المرضى الذين يطلبون المساعدة الطبية، وخاصة المرضى الذين يلجأون إلى طبيب الأطفال والمعالج وطبيب الأعصاب الذين يشتكون من الآثار الجانبية. الجهاز الهضمي, الجهاز العصبيومع فقر الدم. إذا لم يكن الطبيب قادرًا دائمًا على استخدام أساليب البحث المختبري، فيجب على كل عامل طبي يقدم الرعاية في العيادة الخارجية أو المستشفى إجراء مقابلة مع المريض حول عزل الديدان الطفيلية.

إذا كانت هناك مؤشرات سريرية واردة في الفصول ذات الصلة، فيجب توضيح التشخيص باستخدام الطرق المختبرية لاختبار الإصابة بالديدان الطفيلية.

بسبب غلبة الديدان الطفيلية المعوية، أعظم أهمية عمليةلديه فحص البراز.

طرق اختبار البراز لمرض الديدان الطفيلية

يتم تسليم البراز إلى المختبر في وعاء زجاجي نظيف (حوالي ربع كوب من البراز مأخوذ من أماكن مختلفةحصة واحدة)؛ أثناء الفحص الروتيني، يُسمح بتوصيل البراز إلى المختبر في علب الثقاب أو صناديق الجبيرة.

للسيطرة على التخلص من الديدان، يتم إخراج الجزء الكامل من البراز الذي تم جمعه بعد تناوله (حسب وصف الطبيب). ديدانوملين (كبير مغلق الجرار الزجاجية، دلاء).

الفحص المجهريالبراز هو الطريقة الرئيسية لتشخيص الإصابة بالديدان الطفيلية المعوية. يجب أن يسبقه دائمًا فحص مجهري عام للبراز للكشف عن أجزاء من الديدان الكبيرة والديدان الدبوسية والديدان المستديرة وما إلى ذلك.

يجب أن يكون البراز طازجًا أو معلبًا (في محلول فورمالدهيد بنسبة 5٪)، لأن التجفيف يغير بشكل كبير بنية البيض. بالإضافة إلى ذلك، عندما يقف البراز، تتطور بيض بعض الديدان الطفيلية (مثل الديدان الخطافية) بسرعة، مما يجعل التشخيص صعبًا.

وفقا لتعليمات وزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية، من الضروري فحص البراز في وقت واحد باستخدام طريقة فولبورن والمسحة الأصلية.

مسحة أصلية

اللطاخة الأصلية: قطعة صغيرة من البراز (بحجم حبة البازلاء تقريبًا)، مأخوذة بعود ثقاب أو زجاج أو عصا خشبية من أماكن مختلفة في الجزء الذي تم تسليمه، ويتم طحنها جيدًا على شريحة زجاجية في قطرة من محلول الجلسرين 50٪ أو في محلول ملحي أو في الماء. تغطية مع ساترة، والضغط بخفة على هذا الأخير (مع إبرة تشريح). يجب أن تكون اللطاخة رقيقة وشفافة وموحدة. يتم استخدامه فقط كإضافة إلى الطرق الأخرى التي توفر إثراء الدواء. يجب مراجعة عقارين على الأقل.

من أجل الكشف عن يرقات الديدان الطفيلية (وكذلك بيضها)، يتم عمل مسحة محلية على النحو التالي (حسب شولمان): يتم خلط 2-3 جرام من البراز جيدًا عن طريق "اللف" الزجاج قضيبفي مستحلب يحتوي على خمسة أضعاف كمية الماء النقي أو المالح. أثناء التحريك، تتراكم اليرقات بالقرب من القضيب الزجاجي، لذلك مباشرة بعد انتهاء التحريك، يتم نقل قطرة من المستحلب بسرعة بقضيب زجاجي إلى شريحة زجاجية مغطاة بشفة ساترة ويتم فحصها. أثبت S. D. Lyubchenko (1936) أن طريقة الالتواء أكثر فعالية من طريقة اللطاخة، خاصة فيما يتعلق ببيض الدودة. بناءً على عمل S. D. Lyubchenko، نعتبر أنه من المستحسن استبدال طريقة اللطاخة بطريقة الالتواء.

طريقة فولبورن

طريقة فولبورن: يتم وضع 5-10 جرام من البراز المأخوذ من أماكن مختلفة في وعاء بسعة 50-100 مل ويفرك جيدًا بقضيب زجاجي أو خشبي في محلول مشبع. ملح الطعام(يذوب 400 جرام من هذا الملح في 1 لتر من الماء، ويُسخن حتى الغليان ويُصفى من خلال طبقة من الصوف القطني أو الشاش؛ ويستخدم المحلول باردًا: الثقل النوعي 1.2). يضاف المحلول تدريجياً حتى يتم الحصول على معلق موحد، ويجب أن تكون الكمية الإجمالية للمحلول المضاف حوالي 20 مرة المزيد من الكميةالبراز. لخلط البراز، أوصى فولبورن باستخدام أكواب الشاي، ولكن من الملائم أكثر تحضير المعلق في مرطبانات مرهم بسعة 50-100 مل، باستخدام برطمانين لكل تحليل (أو في أكواب بسعة 100 مل).

مباشرة بعد تحضير المعلق، تتم إزالة الجزيئات الكبيرة التي طفت على السطح (التكوينات النباتية، بقايا الطعام غير المهضومة، وما إلى ذلك) من على السطح باستخدام ملعقة أو مغرفة معدنية أو قطعة من الورق النظيف، وبعد ذلك يتم ترك الخليط الوقوف لمدة 1-1.5 ساعة. بعد هذا الوقت، تتم إزالة الفيلم بأكمله من سطح الخليط عن طريق لمس سلك أو حلقة بلاتينية (مسطحة) بقطر لا يزيد عن 1 سم، مثنية بزاوية قائمة؛ يتم هز الفيلم على شريحة زجاجية ومغطى بغطاء. ضع 3-4 قطرات تحت كل غطاء منزلق (18 × 18 مم). في المجمل، يجب تحضير 4 مستحضرات على الأقل (غطاء زجاجي واحد لكل مستحضر). يتم تسخين الحلقة على النار وغسلها بالماء بعد كل تحليل.

باستخدام طريقة فولبورن، يتم اكتشاف بيض جميع الديدان الخيطية (باستثناء بيض الدودة المستديرة غير المخصبة) وبيض الدودة الشريطية القزمة بسرعة وسهولة.

تُستخدم طريقة بيرمان لفحص البراز بحثًا عن يرقات الديدان الطفيلية (داء الأسطوانيات). هذه الطريقة هي كما يلي: يتم وضع 5 جرام من البراز على شبكة معدنية (مصفاة الحليب مناسبة لهذا الغرض) على قمع زجاجي متصل بحامل ثلاثي الأرجل. يتم وضع أنبوب مطاطي بمشبك في الطرف السفلي من القمع.

يتم رفع الشبكة التي تحتوي على البراز ويتم سكب الماء الساخن إلى حوالي 50 درجة في القمع بحيث يتم غمر الجزء السفلي من الشبكة التي تحتوي على البراز في الماء. تتحرك اليرقات بنشاط في الماء وتتراكم في الجزء السفلي من الأنبوب المطاطي. بعد 2-4 ساعات، يتم فتح المشبك ويتم تصريف السائل في واحد أو اثنين من أنابيب الطرد المركزي.

بعد الطرد المركزي لمدة 1-2 دقيقة الجزء العلوييتم تصريف السائل بسرعة، ويتم وضع الرواسب على شكل قطرات على شرائح زجاجية ويتم فحصها تحت شرائح تغطية أو توزيعها في طبقة رقيقة على 2-3 أكواب كبيرة ثم فحصها بدون شرائح تغطية.

تُستخدم طريقة بيرمان أيضًا لاختبار التربة لوجود يرقات الدودة الشصية.

طريقة ستول

يتم استخدام طريقة ستول لتحديد شدة الغزو. يسكب المحلول العشري الطبيعي من الصودا الكاوية في دورق زجاجي خاص حتى علامة 56 سم3، ثم يضاف البراز حتى يصل مستوى السائل إلى 60 سم3، أي 4 سم3. بعد الرج بالخرز الزجاجي، يؤخذ 0.075 مل من الخليط للفحص ويتم فحصه تحت غطاء واحد أو اثنين من الغطاء العادي. يتم ضرب الكمية الناتجة بـ 200 للحصول على عدد البيض الموجود في 1 سم 3 من البراز.

دراسة محتويات الاثني عشر

الحصول على عصير الاثني عشر والصفراء المثانة بالطريقة المعتادةباستخدام المسبار (والصفراء المرارة وبعد انعكاس المرارة) تخلط جيدًا مع كمية متساوية من إيثيل الأثير. يتم طرد الخليط بالطرد المركزي، وبعد ذلك يتم فحص الرواسب تحت المجهر. بالإضافة إلى الرواسب، يجب فحص الرقائق العائمة في السائل، والتي قد تحتوي على بيض الديدان الطفيلية، مجهريا. عند اختبار عصير المعدة والقيء بحثًا عن بيض الديدان الطفيلية، يمكنك استخدام نفس التقنية.

ينبغي إجراء فحص عصير الاثني عشر ومحتويات المعدة في حالة الاشتباه في الإصابة بأمراض الديدان الطفيلية في الكبد والمرارة (داء opisthorchiasis، داء المتورقات، داء ثنائي التحلل) والاثني عشر (داء الأسطوانيات).

فحص البلغم

يتم طحن البلغم على لوح زجاجي، ومغطى بإحكام بلوحة زجاجية أخرى ويتم فحصه بالعين المجردة على خلفية فاتحة وسوداء، وكذلك تحت عدسة مكبرة في الضوء المنقول. يتم وضع قطع فردية من البلغم (التراكمات "الصدئة"، وقصاصات الأنسجة، وما إلى ذلك) في طبقة رقيقة على شريحة زجاجية، وتغطيتها بإحكام بغطاء ساترة ويتم فحصها تحت مجهر تكبير منخفض وعالي.

أ) لتشخيص داء الكيسات المذنبة الجلدي، الأنسجة تحت الجلدأو العضلات، يتم فحص قطعة مقطوعة بشكل معقم من الأنسجة ذات الصلة أولاً بالعين المجردة. يتم فصل مناطق الأنسجة باستخدام إبر تشريح من أجل اكتشاف الحويصلة المرئية بالعين المجردة - دودة المثانة (الصورة أ) ؛ طوله 6-20 ملم وعرضه 5-10 ملم. عندما يتم الكشف عن حويصلة مشبوهة لداء الكيسات المذنبة، يتم سحقها بين شريحتين زجاجيتين وفحصها تحت المجهر. يتم تحديد Cysticercus (Cistycercus cellulosae) من خلال وجود scolex مع أربعة مصاصات وكورولا من الخطافات (الصورة B).

صورة.أ - الكيسات المذنبة مع scolex متجهة إلى الخارج؛ ب- رأس الدودة الشريطية لحم الخنزير.

ب) لتشخيص داء الشعرينات، يتم سحق قطعة من العضلة المستأصلة بطريقة معقمة (العضلة ذات الرأسين أو عضلة الساق) بعناية في محلول جلسرين 50% إلى أنعم الألياف باستخدام إبر التشريح. يتم ضغط العضلات المكسرة بين شريحتين زجاجيتين ويتم فحصها تحت مجهر منخفض الطاقة في مجال رؤية مظلم. يوصى باختبار العضلات بحثًا عن داء الشعرينات في موعد لا يتجاوز اليوم الثامن من المرض. تم العثور على يرقات الشعرينيلا في العضلات في وضع ملفوف: وهي محاطة بكبسولات على شكل ليمون.

صورة.أ - يرقات الشعرينيلا في العضلات. ب – كبسولات متكلسة من الشعرينيلا .

الأشعة السينية

في أغلب الأحيان، يتم استخدام التنظير الفلوري لتشخيص داء المشوكات، وبشكل أقل شيوعًا، داء الكيسات المذنبة. يتم اكتشاف Cysticerci عن طريق التنظير الفلوري فقط بعد التكلس (في حالات المرض طويل الأمد). خلف السنوات الاخيرةيستخدم التنظير الفلوري أيضًا لتشخيص داء الصفر في مرحلة اليرقات المبكرة وجزئيًا في المرحلة المعوية.

خلال فترة هجرة يرقات الدودة المستديرة (والدودة الشصية) ، يتم اكتشاف بؤر التهابية غير مستقرة وأحيانًا متعددة في الرئتين. في الوقت نفسه، يظهر فرط الحمضات الكبير في الدم.

تظهر الديدان المستديرة الناضجة جنسيًا بوضوح في التنظير الفلوري لأمعاء الأفراد المصابين. يجب استخدام هذه الطريقة، على الرغم من تعقيدها ومرهقتها، كطريقة إضافية لتشخيص داء الأسكارس في الحالات التي يكون فيها تحليل البراز سلبيًا. وفقًا لـ E. S. Geselevich، من بين 180 مريضًا مصابًا بداء الإسكارس تم تحديدهم عن طريق التنظير الفلوري، لم يتم العثور على بيض الإسكاريس في براز 54 منهم (انظر).

عندما يتم اكتشاف بيض الديدان الطفيلية على أشياء بيئية مختلفة (التربة، الماء، الخضروات، إلخ)، فمن الضروري دائمًا تحديد مدى صلاحيتها للحياة عن طريق مظهر، التلوين بالدهانات الحيوية، الزراعة فيها الظروف المثلىوإعداد عينة بيولوجية، أي.

تغذية حيوانات المختبر.

تحديد صلاحية بيض أو يرقات الديدان الطفيلية من خلال المظهر. يتم فحص بيض الديدان الطفيلية بالمجهر أولاً بتكبير منخفض، ثم بتكبير عالي. في بيض الديدان الطفيلية المشوهة والميتة، تكون القشرة ممزقة أو منحنية إلى الداخل، وتكون البلازما غائمة ومرتخية. يحتوي البيض المجزأ على كرات ساحقة (قسيمات بدائية) ذات حجم غير متساوٍ، ذو شكل غير منتظم، وغالبا ما تحولت إلى قطب واحد. في بعض الأحيان يكون هناك بيض غير طبيعي التشوهات الخارجية، تتطور بشكل طبيعي. في يرقات الدودة المستديرة الحية، توجد الحبيبات الدقيقة فقط في الجزء الأوسط من الجسم، وعندما تموت، تنتشر الحبيبات في جميع أنحاء الجسم، وتظهر فجوات زجاجية لامعة كبيرة - ما يسمى بسلاسل اللؤلؤ.

لتحديد مدى صلاحية البيض الناضج للديدان المستديرة والديدان السوطية والديدان الدبوسية، يجب عليك الاتصال الحركات النشطةيرقات عن طريق تسخين المستحضر بخفة (إلى درجة حرارة لا تزيد عن 37 درجة مئوية). من الملائم أكثر ملاحظة صلاحية يرقات الدودة المستديرة والدودة السوطية بعد عزلها عن قشرة البيضة عن طريق الضغط على زجاج غطاء المستحضر بإبرة تشريح أو ملاقط.

في يرقات الدودة المستديرة الغازية، غالبًا ما يُرى غمد يتقشر عند نهاية الرأس، وفي يرقات الدودة السوطية التي أكملت تطورها في البيضة، يوجد مشط في هذا المكان عند التكبير العالي. في يرقات الديدان الطفيلية الميتة، بغض النظر عن موقعها (في البيضة أو خارجها)، يلاحظ تسوس الجسم. في هذه الحالة، يصبح الهيكل الداخلي لليرقة ممتلئًا أو حبيبيًا، ويصبح الجسم غائمًا ومعتمًا. تم العثور على فجوات في الجسم، وتم العثور على فواصل على بشرة.

يتم تحديد صلاحية الكائنات السرطانية الشريطية (البقرية، والدودة الشريطية لحم الخنزير، وما إلى ذلك) من خلال حركة الأجنة عند تعرضها للإنزيمات الهضمية. يتم وضع البيض عليه مشاهدة الزجاجمع عصير المعدةالكلاب أو عصير الاثني عشر الاصطناعي. تكوين الأخير: البنكرياتين 0.5 جم، بيكربونات الصوديوم 0.09 جم، الماء المقطر 5 مل. توضع أكواب المراقبة التي تحتوي على البيض في منظم حرارة بدرجة حرارة 36-38 درجة مئوية لمدة 4 ساعات، وفي الوقت نفسه يتم تحرير الأجنة الحية من قشرتها. تذوب قذائف الغلاف الجوي الحية أيضًا في البيبسين المحمض وفي أفضل ضاحية للمهنيين واحدالتربسين بعد 6-8 ساعات في منظم الحرارة عند 38 درجة مئوية.

إذا وضعت بيض التانييد في محلول 1% من كبريتيد الصوديوم، أو محلول 20% من هيبوكلوريد الصوديوم، أو في محلول 1% من ماء الكلور عند درجة حرارة 36-38 درجة مئوية، يتم تحرير الأجنة الناضجة والحية من الأغشية وتفعل لا تتغير خلال يوم واحد. تتقلص الأجسام غير الناضجة والميتة أو تنتفخ وتزداد بشكل حاد، ثم "تذوب" خلال 10 دقائق إلى ساعتين.تتحرك أجنة الشريطيات الحية أيضًا بنشاط في خليط من محلول كلوريد الصوديوم 1%، ومحلول بيكربونات الصوديوم 0.5% والصفراء عند 36-38 درجة. درجة مئوية.

يتم تحديد مدى صلاحية scolex للمشوكات بالتسخين المنخفض. للقيام بذلك، يتم وضع كبسولات السكوليكس أو الحضنة المغسولة بالماء في قطرة ماء على شريحة زجاجية بها ثقب، وتغطى بغطاء وتفحص تحت المجهر بمرحلة تسخين عند درجة حرارة 38-39 درجة مئوية. إذا لم يكن هناك طاولة تسخين، يتم تسخين الدواء باستخدام أي مصدر للحرارة. في الوقت نفسه، يقوم scolex القابل للحياة بتحريك المصاصات بشكل فعال، مما يؤدي إلى تقليص أو إرخاء المصاصات، مما يؤدي إلى إطالة وتقصير خرطوم. إذا قمت بوضع scolex بنسبة 0.5-1% المحلول المائيفيليسيلين في درجة حرارة الغرفة، ثم كل scolex القابل للحياة سوف يتحول بسرعة ويموت. لا يتم قلب scolex غير القابل للحياة.

يتم التحقق من صلاحية Adolescaria fascioli المجمعة على النباتات والأشياء الأخرى في المسطحات المائية عن طريق فحصها على شريحة زجاجية في محلول فسيولوجي تحت المجهر مع مرحلة التسخين. عندما يتم تسخين يرقات الديدان المثقوبة، فإنها تبدأ في التحرك.

يتم تحديد صلاحية بيض الدودة الشريطية القزمة من خلال موقع الخطافات على الجنين.

في بيض الدودة الشريطية القزمة الحية ، تحدث حركات بطيئة تشبه البندول في البروتوبلازم وتتحرك بشكل غير محسوس تقريبًا وتتحرك الأطراف المدببة للزوج الجانبي من الخطافات إلى الجانبين من الزوج الأوسط.

تساعد تقلصات بروتوبلازم الجنين والخطافات الجنينية الجنين على تحرير نفسه أولاً من أغشية الغلاف الجوي، ثم من الغلاف الخارجيبيض.

في البيضة الحية، يكون الزوج المتوسط ​​والأزواج الجانبية من الخطافات متوازيين، وفي بعض البيض، تكون شفرات الأزواج الجانبية قريبة من بعضها البعض وتقع بزاوية أقل من 45 درجة بالنسبة للزوج الأوسط من الخطافات.

ينقبض الجنين المحتضر بشكل متشنج ويتحرك ببطء بعيدًا عن الخطافات. في الجنين الميت، تتوقف حركة الخطافات، وتقع في حالة اضطراب؛ وأحيانًا يتم تحريك الخطافات الجانبية للزوج المجاور بعيدًا بزاوية قائمة أو منفرجة أو حادة.

في بعض الأحيان يتم ملاحظة تجعد الجنين وتكوين التحبيب. تعتمد الطريقة الأكثر دقة على ظهور حركات الغلاف الجوي أثناء التغير الحاد في درجة الحرارة: من 5-10 إلى 38-40 درجة مئوية.

ينبغي دراسة تحديد صلاحية الديدان الخيطية غير الناضجة في غرفة رطبة (أطباق بتري)، ووضع بيض الدودة في محلول فورمالدهايد 3٪ محضر في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر عند درجة حرارة 24-30 درجة مئوية، وبيض الدودة السوطية في 3 محلول حمض الهيدروكلوريك٪ عند درجة حرارة 30-35 درجة مئوية، بيض الدودة الدبوسية في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. يجب فتح أطباق بيتري 1-3 مرات في الأسبوع للحصول على تهوية أفضل ويجب إعادة ترطيب ورق الترشيح بالماء النظيف.

تتم مراقبة تطور بيض الديدان الطفيلية مرتين على الأقل في الأسبوع. يشير عدم وجود علامات التطور خلال 2-3 أشهر إلى عدم قابليتها للحياة. علامات تطور بيض الديدان الطفيلية هي أولاً مراحل السحق وتقسيم محتويات البويضة إلى قسيمات متفجرة منفصلة. خلال اليوم الأول، يتطور ما يصل إلى 16 قسيمًا متفجرًا، والتي تنتقل إلى المرحلة الثانية - التوتية، وما إلى ذلك.

يتم تربية بيض الدودة الشصية في أسطوانة زجاجية (ارتفاعها 50 سم وقطرها 7 سم) مغلقة بسدادة. يتم سكب خليط من كميات متساوية من الرمل المعقم والفحم والبراز مع بيض الدودة الشصية، المخفف بالماء إلى قوام شبه سائل، بعناية على قاع الأسطوانة باستخدام أنبوب زجاجي. خلال 1-2 أيام من الاستقرار في الظلام عند درجة حرارة 25-30 درجة مئوية، تفقس اليرقات العصوية من البيض، وبعد 5-7 أيام تصبح خيطية الشكل: تزحف اليرقات إلى أعلى جدران الأسطوانة، حيث تكون مرئية حتى بالعين المجردة. يتم وضع بيض الديدان المثقوبة، مثل opisthorchiids، وdiphyllobothriids، وfasciolae، وما إلى ذلك، التي تتطور بشكل طبيعي في الماء، على زجاج الساعة، أو طبق بتري أو في وعاء آخر، ويتم سكب طبقة صغيرة من الماء العادي. عند زراعة بيض المتورقة يجب الأخذ في الاعتبار أنها تتطور بشكل أسرع في الظلام، بينما يتكون الميراسيديوم في البيض الحي عند درجة حرارة 22-24 درجة مئوية بعد 9-12 يومًا. عند الفحص المجهري لبيض الديدان المثقوبة، تكون حركات الميراسيديوم مرئية بوضوح. ميراسيديوم فاسيولا يخرج من قشرة البيضة فقط في الضوء. أثناء الزراعة، يتم تغيير الماء بعد 2-3 أيام.

يتم تربية يرقات الدودة الشصية والأسطوانية على أجار في طبق بتري مع الفحم الحيواني. بعد وضعها في منظم الحرارة عند درجة حرارة 26-30 درجة مئوية لمدة 5-6 أيام، تزحف اليرقات عبر الأجار، تاركة وراءها مسارًا من البكتيريا (طريقة فولبورن).

طريقة هارادا وموري (1955). أضف 7 مل من الماء المقطر إلى أنابيب الاختبار الموضوعة في الرف. باستخدام عصا خشبية، خذ 0.5 جرام من البراز وقم بعمل مسحة على ورق الترشيح (15 × 150 مم) على بعد 5 سم من الحافة اليسرى (يتم تنفيذ هذه العملية على قطعة من الورق لحماية سطح طاولة المختبر). ثم يتم إدخال الشريط الذي يحتوي على اللطاخة في أنبوب الاختبار بحيث يصل الطرف الأيسر الخالي من اللطاخة إلى أسفل أنبوب الاختبار. الطرف العلوي مغطى بقطعة من السيلوفان وملفوف بإحكام بشريط مطاطي. يتم كتابة رقم ولقب الشخص الذي يتم فحصه على أنبوب الاختبار. في هذه الحالة، يتم تخزين الأنابيب لمدة 8-10 أيام عند درجة حرارة 28 درجة مئوية. لدراسة الثقافة، قم بإزالة غطاء السيلوفان وإزالة شريط من ورق الترشيح باستخدام ملاقط. وينبغي توخي الحذر عند القيام بذلك حيث قد تنتقل أعداد صغيرة من اليرقات المعدية إلى الطرف العلوي من ورقة الترشيح أو إلى جانب الأنبوب وتخترق تحت سطح السيلوفان.

توضع أنابيب الاختبار في مكان ساخن حمام الماءعند درجة حرارة 50 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، وبعد ذلك يتم رج محتوياتها وسكبها بسرعة في أنبوب اختبار سعة 15 مل لترسيب اليرقات. بعد الطرد المركزي، تتم إزالة المادة الطافية، ويتم نقل الرواسب إلى شريحة زجاجية، مغطاة بغطاء، ويتم فحصها مجهريا تحت تكبير منخفض.

ل تشخيص متبايناليرقات الخيطية، فمن الضروري استخدام البيانات الواردة في الجدول. 13.

طرق تلطيخ بيض ويرقات الديدان الطفيلية. ترى الأنسجة الميتة في معظم الحالات الدهانات بشكل أسرع من الأنسجة الحية. تُستخدم هذه الميزات في علم الديدان الطفيلية لتحديد مدى صلاحية بيض ويرقات الديدان الطفيلية. ومع ذلك، في بعض الحالات، يتم إدراك بعض الدهانات من خلال الأنسجة الحية بشكل أفضل من الأنسجة الميتة.

الجدول 13. تشخيص متباينيرقات خيطية الشكل من A.duodenale، N.americanus، Strongyloides stercoralis، Trichostrongylus spp.

للتعرف التفاضلي على البيض واليرقات الحية والميتة، يتم استخدام الدهانات والأساليب التالية.

يستخدم Leukobase methylene blue لصبغ الأنسجة الحية والميتة. تقوم الخلية أو الأنسجة الحية باختزال أزرق الميثيلين إلى قاعدة بيضاء عديمة اللون، بينما لا تمتلك الأنسجة الميتة هذه القدرة، لذلك تكتسب اللون.

لتلوين بيض الدودة المستديرة، يمكنك استخدام الميثيلين الأزرق في محلول حمض اللبنيك مع القلويات الكاوية (0.05 جم من أزرق الميثيلين، 0.5 جم من هيدروكسيد الصوديوم، 15 مل من حمض اللاكتيك). البيض الحي لا يرى اللون، وأجنة البيض الميت تتحول إلى اللون الأزرق.

لا تنطبق طريقة الصبغ على بيض الديدان الأسطوانية والديدان السوطية غير الناضجة؛ القشرة المصطبغة ملطخة، وبالتالي لا يمكن رؤية ما إذا كانت الخلية الجرثومية الموجودة داخل البيضة ملونة أم لا.

يتم تلوين يرقات الإسكاريس بمحلول أساسي من طلاء الكريسيل الأزرق اللامع بتركيز 1:10000 على النحو التالي: يتم وضع قطرة من السائل مع بيض الإسكاريس وقطرة من محلول الطلاء الأساسي على شريحة زجاجية. يتم تغطية المستحضر بغطاء، يتم ضغطه بإحكام على العينة أثناء النقر بخفة بإبرة تشريح. يتم ملاحظة عدد اليرقات الناشئة ودرجة تلطيخها تحت المجهر، وبعد ذلك يتم فحص نفس المستحضر مرة أخرى بعد 2-3 ساعات، فقط اليرقات غير المشوهة التي لم تتصبغ لمدة ساعتين تعتبر حية.يتم تلوين اليرقات الميتة عندما تنكسر القشرة (جزئيًا أو كليًا).

يشار إلى إمكانية تلطيخ المستحضرات بمحلول اليود عند تحديد مدى صلاحية بيض الدودة المستديرة للطيور. في هذه الحالة، يتم استخدام 5٪ كصبغة. محلول الكحوليودا. عند تطبيقه على المستحضر، تتحول أجنة بيض الأسكاريديا الميتة إلى اللون البرتقالي خلال 1-3 ثواني. تم تلوين البيض الميت لدودة opisthorchis والأغلفة السرطانية للدودة الشريطية البقرية بمحلول أزرق التولويدين (1: 1000)، وتم تلوين الأجسام الميتة للدودة الشريطية البقرية بمحلول أزرق كريسيل اللامع (1: 10000). وفي الوقت نفسه، تكتسب أجنة وقذائف البيض الميت والحي لونًا. لذلك، بعد تلطيخ، يتم غسل البيض والقشريات ماء نظيفبالإضافة إلى ذلك، تم صبغها بالسافرانين (مخفف بنسبة 1:10000 في محلول كحول 10٪). يزيل الكحول اللون من القشور، والسافرانين يعطيها اللون الأحمر. ونتيجة لذلك، يتحول لون البيض الحي إلى اللون الأحمر، ويتحول جنين البيض الميت إلى اللون الأزرق، وتظل القشرة حمراء. تتحول الأجنة الميتة للدودة الشريطية البقرية بسرعة، في غضون دقائق قليلة، إلى اللون الأحمر الفاتح أو اللون الورديسافرانين أو أزرق كريسيل لامع بتخفيف 1:4000 أو قرمزي نيلي بتخفيف 1:1000-1:2000.

ولا تتغير الأجنة الحية تحت تأثير هذه الأصباغ حتى بعد 2-7 ساعات.

لتحديد مدى صلاحية بيض الدودة الشريطية القزمة، يوصى باستخدام الدهانات التالية: 1) الأزرق الكريزيل اللامع (1: 8000) - بعد ساعة واحدة، يصبح الغلاف الخارجي للبيض الميت ذو ألوان زاهية بشكل خاص، والذي يبرز بشكل حاد مقابل اللون الشاحب أو خلفية عديمة اللون لبقية البيضة؛ 2) السفرانين: مخفف بنسبة 1: 8000 مع التعرض لمدة ساعتين و1: 5000 لمدة 3-5 ساعات؛ 3) محلول 50% من حمض البيروجاليك مخفف بنسبة 1:2 - عند تعريضه لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة 29-30 درجة مئوية (كلما انخفضت درجة الحرارة، طالت عملية الصباغة).

يتم صبغ البليروسيركويدات الحية للدودة الشريطية جيدًا بمحلول مائي (1: 1000) من الخيط المحايد لمدة 5-20 دقيقة. للحصول على لون وردي ثابت لا يختفي خلال 5 أيام ولا يؤثر على حركة البليروسيركويدات، عادة ما تكون 10 دقائق كافية. يتم التحكم في درجة التلوين من خلال رؤية اليرقات في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، ولهذا الغرض تتم إزالة البليروسيركويدات بشكل دوري من الطلاء. يُنصح باستخدام أزرق الميثيلين لصبغ البليروسيركويدات الميتة.

اقترح آر إي تشوبانوف وآخرون (1986) طريقة لتحديد صلاحية بيض ويرقات الديدان الطفيلية باستخدام صبغة "روبرين"، التي تم الحصول عليها عن طريق زراعة العفن Peniciliium Rubrum، كصبغة. للقيام بذلك، استخدم محلول صبغ مائي 3٪.

تكتمل عملية تلوين البيض واليرقات بعد 1.5 ساعة، ويكتسب البيض غير القابل للحياة من الديدان الدبوسية والديدان الشريطية البقرية والقزمية والديدان الخطافية والتريكوسترونجيليدات لونًا ورديًا كثيفًا، وتصبح الدودة الشصية ويرقات الترايكوسترونجيليد حمراء. لوحظ لون أقل سطوعًا في بيض الديدان المستديرة والديدان السوطية، لأنه عند إطلاقها من الأمعاء، يكون لونها بني غامق بالفعل: البيض واليرقات القابلة للحياة غير ملونة.

الطرق الفيزيائية والكيميائية لتحفيز إطلاق الميراكوليد من بيض الديدان المثقوبة. تم تطوير الطرق بواسطة S.M. German وS.A. Beer (1984) لتحديد مدى صلاحية بيض opisthorchid وDicrocelium عن طريق تعريض البيض لوسط التفاعل. إذا كانوا على قيد الحياة، يتم إطلاق الميراسيديوم. تعتمد الطرق على التنشيط الفيزيائي والكيميائي لغدة فقس الميراسيديوم وتحفيز النشاط الحركي لليرقة. يتم التحفيز عن طريق تعريض بيض الديدان المثقوبة إلى وسط تفاعل خاص بالاشتراك مع تقنيات تسلسلية - خلق فرق في درجة الحرارة، وتجفيف معلق البيض، والتعرض لتدفق ضعيف من السائل في قطرة الاختبار، مما يساهم في الإطلاق الضخم للميراسيديا من البيض.

تحديد صلاحية بيض opisthorchid باستخدام طريقة هيرمان والبيرة. يتم تبريد معلق البيض في الماء (الصنبور، المستقر) مسبقًا إلى 10-12 درجة مئوية. يتم تنفيذ كافة العمليات اللاحقة في درجة حرارة الغرفة (18-22 درجة مئوية). يتم إضافة قطرة واحدة (حوالي 0.05 مل) من المعلق الذي يحتوي على 100-400 بيضة إلى أنبوب الطرد المركزي. توضع الأنابيب في الرف لمدة 5-10 دقائق لترسيب البيض. ثم شريط ضيقباستخدام ورق الترشيح، قم بامتصاص الماء الزائد بعناية حتى يتم إزالته بالكامل. أضف قطرتين من الوسط إلى أنبوب الاختبار، ثم رجها، ثم انقل المحتويات باستخدام ماصة إلى شريحة زجاجية واتركها لمدة 5-10 دقائق، مع رجها قليلاً (أو وضعها تحت مجفف الشعر) لإنشاء تيارات سائلة ضعيفة في قطرة الاختبار من تعليق. هذه العملية، التي تحاكي التمعج في الأمعاء الرخوية، تسمح للمرء بتنشيط إطلاق ميراسيديا. بعد ذلك، يتم إضافة قطرتين إضافيتين من الوسط إلى المعلق ثم يتم فحص المستحضر باستخدام المجهر الضوئي التقليدي (X200). خلال هذا الوقت، يجب أن يفتح غطاء البيض الذي يحتوي على ميراسيديوم قابل للحياة، وتخرج اليرقة بنشاط في البيئة. بفضل وجود الإيثانول فيه، يتم تثبيت الميراسيديوم بعد 3-5 دقائق، ثم يتم صبغه بصبغة موجودة في الوسط. ونتيجة لذلك، يتم اكتشاف وإحصاء الميراسيديا بسهولة.

إعداد وسط التفاعل. يتم تحضير الوسط في 0.05 M من محلول Tris-HCi عند ظروف الرقم الهيدروجيني الأمثل البالغة 8.0-9.5. تتم إضافة الإيثانول بنسبة تصل إلى 10-13% وصبغة (سافرانين، أزرق الميثيلين وغيرها من الصبغات التي تعمل ضمن نطاق الأس الهيدروجيني) إلى المخزن المؤقت حتى يصبح السائل ملونًا قليلاً (على سبيل المثال، بالنسبة للسافرانين، سيكون تركيزه النهائي 1:50000). يمكنك استخدام مخزن مؤقت آخر يعمل في حدود الرقم الهيدروجيني القلوي، على سبيل المثال 0.05 م فوسفات (الرقم الهيدروجيني 8.5). لذلك، يحتوي الوسط على 96٪ إيثانول - 12 جزءًا؛ صبغة (محلول الأم) - 1-10 أجزاء؛ 0.05 م تريس-NS! المخزن المؤقت (الرقم الهيدروجيني 8.5-9.5) - ما يصل إلى 100 جزء. مثال للوسط: 12 جزءًا من 96٪ إيثانول، وجزء واحد من محلول سفرانين مشبع، والباقي حتى 100 جزء - 0.05 مولار محلول Tris-HCl، ودرجة الحموضة 9.5.

تحديد صلاحية بيض ثنائي السيليوم باستخدام طريقة هيرمان، بيرة، ستراتان. يتم وضع قطرة من المعلق تحتوي على 100-150 بيضة تريماتود في أنبوب الطرد المركزي لمدة 1-2 دقيقة لترسيب البيض. ثم يتم تجفيف السائل بعناية باستخدام شريط من ورق الترشيح. أضف 1-2 قطرات من وسط التفاعل باستخدام ماصة باستور واحتضانها في حمام مائي عند 28-30 درجة مئوية لمدة 2-3 دقائق. التركيبة المتوسطة: 6 أجزاء بيوتانول، 94 جزء من محلول كلوريد الصوديوم 0.4% أو محلول كلوريد البوتاسيوم 0.3% في الماء المقطر. يتم نقل البيض في الوسط باستخدام ماصة على شريحة زجاجية ويترك لمدة 1.5-2 ساعة في درجة حرارة الغرفة (18-22 درجة مئوية)، مع إضافة 1-2 قطرة (0.05) كل 25-30 دقيقة (أثناء تجفيفها). مل) من محلول البيوتانول في الماء المقطر. بعد ذلك، يتم فحص المستحضر تحت المجهر بتكبير 100-200x. يتم تحديد الصلاحية من خلال عدد البيض المفتوح مع الميراسيديا المنطلقة. يخترق البيوتانول مسام قشرة البيضة ويصل إلى الميراسيديا وينشطها. الحضانة في درجة الحرارة المذكورة يعزز هذه العملية. البيوتانول بتركيز 3-7% يضر بالميراسيديوم الخارج من البيضة. يسمح نقل تعليق البيض من أنبوب اختبار إلى شريحة زجاجية، بحلول الوقت الذي يتم فيه إطلاق الميراسيديوم (بعد 30-40 دقيقة)، بتقليل تركيز البيوتانول بسبب التطاير إلى مستوى آمن (1.5-0.5٪). إن وجود كلوريد الصوديوم في الوسط بتركيز 0.1-0.5٪ (أو كلوريد البوتاسيوم بتركيز 0.05-0.4٪) يحدد نشاط الميراسيديوم المنطلق. على عكس بيض opisthorch الصغير الشفاف، فإن بيض ثنائي السيليوم له قشرة داكنة اللون، وله غطاء مرئي بوضوح، والذي يفتح بعد ظهور الميراسيديوم. ولذلك، فإنه أكثر ملاءمة لتقييم صلاحية بيض ثنائي السيليوم عن طريق عد البيض المفتوح بدلا من تلطيخ وحساب الميراسيديا.

طريقة الانارة لدراسة بيض ويرقات الديدان الطفيلية.

لأول مرة في ممارسة علم الديدان الطفيلية، تم استخدام طرق الفحص المجهري الفلوري في عام 1955. وأفيد أن المجهر الفلوري يجعل من الممكن التمييز بين الكائنات الحية والميتة دون الإضرار بالبيضة. بالنسبة للتألق، لم يتم استخدام الأشعة فوق البنفسجية، ولكن الجزء الأزرق البنفسجي من الضوء المرئي، مع المجهر التقليدي والشرائح الزجاجية؛ تم استخدام مجموعة خاصة من مرشحات الألوان لإضاءة OI-18.

لقد وجد أن البيض الحي والميت للديدان المستديرة والديدان الدبوسية والديدان الشريطية القزمة والديدان الشريطية البقرية والديدان الشريطية العريضة والديدان الطفيلية الأخرى يتألق بشكل مختلف. يتم ملاحظة هذه الظاهرة أثناء التلألؤ الأولي دون استخدام الأصباغ، وعند تلطيخها بالفلوروكروم (برتقال أكريدين، كوريفوسفين، بريمولين، أورولين، كبريتات البرليرين، تريبافلافين، ريفانول، كينين، إلخ).

يتوهج بيض الدودة المستديرة غير الملونة الحية وغير المقسمة باللون الأخضر الفاتح مع لون مصفر؛ في البيض الميت، تنبعث القشرة ضوءًا أخضر أكثر سطوعًا من القشرة الجنينية ذات اللون الأخضر الداكن؛ في بيض الدودة المستديرة مع اليرقة تظهر القشرة فقط، وفي البيض الميت تكون القشرة واليرقة صفراء زاهية.

البيض الحي غير المصطبغ وغير المجزأ من الديدان الدبوسية والديدان الشريطية القزمة ينبعث منه ضوء أصفر مخضر؛ في البيض الميت، تتألق القشرة بشكل مكثف على خلفية كتلة جنينية خضراء داكنة. مع التلألؤ الثانوي (عند صبغه ببرتقال أكريدين عند تخفيف 1:10.000 و1:50.000 من 30 دقيقة إلى ساعتين)، تتألق قشرة الديدان الخيطية الحية والميتة والديدان المثقوبة والديدان الشريطية بشكل مختلف.

قوقعة Ascaris lumbricoides الحية والميتة، Toxocara leonina، Enterobius vermcularis، Hymenolepis nana، H.fraterna، H. diminuta، T.saginatus، D.latum ملونة باللون البرتقالي والأحمر. أجنة حية تصاعدي. lumbricoides، T.leonina، H.diminuta، D.latum والدودة الشريطية البقرية تتألق باللون الأخضر الداكن الباهت أو اللون الرمادي والأخضر. تنبعث الأجنة الميتة لبيض الديدان الطفيلية من ضوء برتقالي-أحمر "محترق". اليرقات الحية للديدان الدبوسية والتوكسوكارا (تتحرر قشر البيض) تنبعث منها ضوء رمادي-أخضر خافت؛ وعندما تموت، يتغير اللون من طرف الرأس إلى اللون الأخضر الفاتح "المحترق"، ثم الأصفر والبرتقالي، وأخيرا البرتقالي الساطع.

عندما تكون ملطخة بالفلوروكروم - كوريفوسفيلوس، بريمولين - فإن البيض الميت للديدان المستديرة والديدان السوطية يظهر توهجًا من الأصفر الأرجواني إلى الأحمر النحاسي. البيض القابل للحياة لا يلمع ولكنه ملون اللون الأخضر الداكن. لا يلمع البيض الحي لدودة تريماتودا Paragonimus westermani وClonorchis sinensis عند صبغه ببرتقال أكريدين، لكن البيض الميت ينبعث منه ضوء أخضر مصفر.

يمكن أيضًا استخدام طريقة التلألؤ لتحديد مدى صلاحية يرقات الديدان الطفيلية. وهكذا، فإن يرقات الأقويلات والرابدياتات متألقة بمحلول أكريدين برتقالي (1: 2000) يتوهج: الحية - خضراء (مع صبغة)، الميتة - مع ضوء برتقالي ساطع. لا تتوهج يرقات التريكينيلا الحية أو تعطي وهجًا ضعيفًا عند معالجتها لمدة 10 دقائق بمحلول فلوريسئين أيزوثيوسيانات، والأورامين، وما إلى ذلك. وتعطي اليرقات الميتة المفلورة بالكروم (بتركيز 1:5000) توهجًا ساطعًا.

تنبعث الميراسيديا الحية الخارجة من القشرة من ضوء مزرق خافت مع كورولا من الأهداب صفراء فاتحة بالكاد يمكن ملاحظتها، ولكن بعد 10-15 دقيقة من الموت تظهر مع ضوء أخضر فاتح "محترق" ثم ضوء برتقالي-أحمر.

إرشوفا آي.بي., أوسيشنيوك إل إم., موشالوفا أ.، مؤسسة الدولة "جامعة لوغانسك الطبية الحكومية"، قسم طب الأطفال المصابين بالتهابات الطفولة.
تم نشر المقال في مجلة “Actual Infectology” العدد 2 (3) لعام 2014.
مصدر المعلومات "دار نشر زاسلافسكي" www.mif-ua.com

توضح المقالة طرق تشخيص الإصابة بالديدان الطفيلية: المجهرية، مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط، تفاعل البلمرة المتسلسل المصلي، والتشخيص بالرنين الحيوي، وفحص الدم، وكذلك الأدوات (فحص الموجات فوق الصوتية والأشعة السينية، والتصوير المقطعي المحوسب) والمختبر، ذات الأهمية غير المباشرة ( التحليل السريريالدم، اختبار الدم لاختبارات وظائف الكبد، اختبار البراز لخلل البكتيريا). ويرد وصف مزايا الأساليب، وعيوبها، وموثوقية البيانات التي تم الحصول عليها. يتم اقتراح استبيانات للمرضى لتحديد خطر الإصابة بالديدان الطفيلية. ويرد وصف مزايا الأساليب، وعيوبها، وموثوقية البيانات التي تم الحصول عليها. يتم اقتراح استبيانات للمرضى لتحديد خطر الإصابة بالديدان الطفيلية.

الديدان الطفيلية لها تأثير سلبي على جسم الإنسان. أنها تؤدي إلى الحساسية، وتطوير نقص الفيتامينات، الكلي والصغرى، ضعف تكون الدم ونفاذية الأوعية الدموية، وعدم التوازن الهرموني. تساهم عدوى الديدان الطفيلية في التكوين الأمراض المزمنة(التهاب المرارة، تحص صفراوي، التهاب البنكرياس، التهاب القولون، السكري, الربو القصبي, مرض في الجلد)، الاضطرابات النفسية والعاطفية ( التعب المزمن، والتهيج، والقلق، وفرط النشاط لدى الأطفال)، وفقر الدم، وما إلى ذلك. مع الإصابة بالديدان الطفيلية لفترة طويلة، يمكن أن تتطور نقص المناعة الثانوية.

إن انتباه الأطباء فيما يتعلق بالعدوى بالديدان الطفيلية بين السكان غير كافٍ حاليًا، ويتم تقليل الوقاية إلى علاج المرضى المصابين الذين تم تحديدهم.

تشخيص الديدان الطفيليةيعتمد على البيانات السريرية والوبائية والمخبرية. علامات مثل متلازمة الوهن، الشرى المتكرر، ضعف تجديد الجلد والأغشية المخاطية، من الصعب علاج التهاب الجلد التأتبي و متلازمة الانسداد القصبي، اعتلال العقد الليمفاوية وتضخم الكبد الطحال مجهول السبب، النباتات الغدانيةالدرجة الثانية إلى الثالثة، اللسان "الجغرافي"، الشهية المنخفضة أو الانتقائية، البراز غير المستقر، قد تشير إلى وجود الديدان الطفيلية.

أثناء الدراسة المصلية، يتم تحديد وجود الأجسام المضادة للديدان الطفيلية (الموثوقية حوالي 60٪): في حالة الاشتباه في داء المشوكات، وداء الكيسات المذنبة، وداء الشعرينات، وداء التسمميات، يتم استخدام تفاعلات تراص الدم غير المباشرة، وتراص اللاتكس، والتثبيت التكميلي، والتألق المناعي على نطاق واسع.
ليس في جميع الحالات طرق التحديد أجسام مضادة محددةلديهم خصوصية وموثوقية كافية. لا يعتمد التركيب المستضدي للديدان الطفيلية على الأنواع فحسب، بل يعتمد أيضًا على المرحلة؛ يمر بدورة تطور معقدة من البيضة إلى بالغ، الديدان الطفيلية تغير تكوينها المستضدي. بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام الأجسام المضادة الجسدية في التفاعلات التشخيصية المناعية، ويتم إنتاج الأجسام المضادة في جسم المضيف بشكل رئيسي إلى فضلات وإفرازات الديدان الطفيلية. التحسس غير النوعي للجسم، والقواسم المشتركة لبعض مستضدات الديدان المثقوبة، والأوالي، والبشر، تخلق نسبة عالية من التفاعلات الإيجابية الكاذبة في عيارات أقل من تلك التي يمكن تشخيصها بشكل موثوق.

طريقة تحديد الديدان باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل إنه محدد للغاية وحساس للغاية، ولكن نظرًا لارتفاع تكلفته وتعقيده، لا يمكن استخدامه للفحص عندما يكون من الضروري، على سبيل المثال، فحص مجموعة من الأطفال من منشأة رعاية الطفل.

لا يتفاعل الجهاز المناعي دائمًا (يتعرف ويدمر) على وجود الديدان الطفيلية في الجسم. وذلك لأن بعض الديدان الطفيلية تحتوي على كبسولة متينة ومقاومة كيميائيًا أو تكون مغلفة بمادة لا يتعرف عليها الجهاز المناعي؛ موضعية في الأنسجة الأكثر حماية منها ردود الفعل الالتهابية، على سبيل المثال، في الحبل الشوكي; أنواع كثيرة منهم في السبيل الهضميتفرز مضادات الإنزيمات، مما ينقذها من الموت؛ يملك مدة أطولالحياة (لسنوات، وأحيانا حتى وفاة الشخص نفسه)؛ تتغذى على تحلل الكربوهيدرات الصافية. أن يكون لديك أجهزة مثل أكواب الشفط والخطافات وما إلى ذلك، مما يسهل التثبيت داخل الجسم؛ العديد من الأنواع لديها التكاثر الجنسي، حيث يتم تبادل المعلومات الجينية، مما يؤدي إلى زيادة عدد السكان غير المتجانسين وانخفاض درجة الضعف؛ يملك مستوى عالخصوبة.

في بالموجات فوق الصوتية , فحص الأشعة السينيةأعضاء البطن , التصوير المقطعي ويمكن تحديد علامات غير مباشرةداء الديدان الطفيلية: تضخم الكبد الطحال، وعدم انتظام حمة الكبد والطحال بسبب إشارات فرط الصدى الصغيرة، وزيادة الغدد الليمفاويةفي أبواب الطحال والديدان الطفيلية نفسها (المكورات المشوكة، كرات الديدان الطفيلية المعوية، وما إلى ذلك).

فحص الدم - فحص الدم النوعي باستخدام مجهر قوي ذو مجال مظلم، يمكنك رؤية حالة خلايا الدم (الشكل والحجم والنشاط واللون وما إلى ذلك)، ووجود عناصر ومواد غير محددة - كل هذا يشير بشكل مباشر أو غير مباشر إلى وجود الديدان الطفيلية في الجسم. يتم عرض الصورة على شاشة العرض باستخدام كاميرا الفيديو المدمجة في المجهر. طريقة التشخيص هذه موثوقة للغاية.

مختبر غير مباشر علامات داء الديدان الطفيليةقد يكون هناك فقر الدم، قاعدية، فرط الحمضات، وزيادة مستويات ناقلة أمين الأسبارتات. وهكذا، في حالة داء السموم، يتم اكتشاف تفاعل الكريات البيض من الحمضات (أكثر من 20٪) على خلفية متلازمة الحساسية المستمرة (التهاب الجلد التأتبي مع حكة شديدة ومقاومة العلاج التقليدي، الربو القصبي الشديد). قد يشير أيضًا تثبيط الإشريكية القولونية الطبيعية في اختبار البراز لمرض ديسبيوسيس إلى الإصابة بالديدان الطفيلية المحتملة.

مع الأخذ في الاعتبار انتشار الديدان الطفيلية، ونحن نقدم استبيانلتحديد خطر الإصابة بالديدان الطفيلية.

• السباحة في المسطحات المائية العذبة.
• لا تغسل يديك قبل الأكل بالصابون والماء الساخن.
• شرب الماء من مصادر لم يتم التحقق منها.
• أنت تأكل شحم الخنزير محلي الصنع مع شرائح من اللحم.
• هل تأكل السمك المملح قليلاً؟
• تأكل لحماً متوسط ​​النضج (بالدم).
• هل تأكلين الكافيار المملح قليلًا وغير المُعد في المصنع؟
• لا تغسل بيض الدجاجمع الصابون.
• لا تغسل الموز والبرتقال واليوسفي قبل الأكل.
• قم بتسميد حديقتك بالسماد.
• تناول الخضروات مباشرة من الحديقة.
• تأكل الفواكه والتوت مباشرة من الحديقة.
• أكل الفواكه المتساقطة.
• لا تصب الماء المغلي على كل ما تبذلونه من الخضر لصنع السلطات.
• تخزين الجزر في الرمال المأخوذة من الفناء.
• المشي حافي القدمين على العشب.
• كان أفراد الأسرة مصابين بالديدان الطفيلية.
• العائلة لديها كلب أو قطة.

لكل إجابة" نعم" - 2 نقطة، " أحيانا"- 1،" لا" - 0. مع درجة 0-5، احتمال الإصابة ضئيل، 6-12 - العدوى ممكنة، 13-25 - احتمال كبير، أكثر من 25 نقطة - مرتفع جدًا. مع النتيجتين الأخيرتين، من الضروري إجراء فحص منتظم، وربما العلاج الوقائي.

بسبب ال الاعراض المتلازمةعدوى الديدان الطفيلية ليست دائمًا محددة، وفي المراحل الأولية - غير محددة، نقدم استبيانًا للمرضى تشخيص ذاتي داء الديدان الطفيلية.

• هناك حكة في فتحة الشرج في الصباح.
• الغثيان في الصباح عند تنظيف الأسنان.
• تقشير أصابع اليدين أو القدمين مع تقشير طبقات الجلد.
• طفح جلدي تحسسي، وحكة في الجلد.
• تقشر وتورم في منطقة الجفن.
• زيادة التعب والخمول والنعاس.
• زيادة الشعور بالجوع.
• الشعور بعدم الراحة في المعدة.
• فقدان وزن الجسم.
• وجود العديد من الأمراض المزمنة في الجهاز الهضمي والمفاصل والجهاز القصبي الرئوي.
• سوء الحالة الصحية، ونقص التشخيص الرسمي، والعلاج غير الفعال على المدى الطويل.
• ارتفاع دوري في درجة الحرارة، يصاحبه آلام في العضلات والمفاصل.

إجابة " نعم"يشير ما لا يقل عن 2-3 أسئلة إلى احتمالية عالية للإصابة بالديدان الطفيلية.

الاستنتاجات

1. تشغيل المرحلة الحديثةلا توجد طرق مختبرية لاختبار الإصابة بالديدان الطفيلية يمكن الاعتماد عليها بنسبة 100%.

2. يتمتع اختبار البوليميراز بأكبر قدر من الموثوقية في تشخيص داء الديدان الطفيلية تفاعل تسلسليوالتشخيص بالرنين الحيوي.

فهرس